譚雪飛 熊英 吳晗
昌吉回族自治州食品藥品檢驗(yàn)所 新疆昌吉 831100
谷氨酰胺轉(zhuǎn)氨酶(Transglutaminase,TGase,EC2.3.2.13)也被稱(chēng)為轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶或谷氨酰胺轉(zhuǎn)移酶(以下簡(jiǎn)稱(chēng)TG酶),是一類(lèi)可以催化?;l(fā)生轉(zhuǎn)移的酶,可通過(guò)催化蛋白質(zhì)或多肽分子的賴(lài)氨酸殘基的ε-氨基與谷氨酸殘基的γ-酰胺發(fā)生催化?;D(zhuǎn)移、脫酰胺和交聯(lián)聚合等反應(yīng),通過(guò)共價(jià)鍵結(jié)合對(duì)蛋白質(zhì)凝膠網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)增強(qiáng),進(jìn)而改變蛋白質(zhì)理化和物性學(xué)特性,甚至帶來(lái)新的功能。1989年Ando等首次從茂原鏈輪絲菌(StreptoverticilliumS-8112)中分離得到TG酶。之后研究者又發(fā)現(xiàn)了很多不同的產(chǎn)TG酶的菌株,并對(duì)基因技術(shù)及發(fā)酵優(yōu)化等方面做了大量研究,如肉桂鏈輪絲菌、芽孢桿菌、茂原鏈輪絲菌、吸水鏈霉菌等可以生產(chǎn)TG酶。微生物來(lái)源的TG酶分子質(zhì)量約為38ku,微生物來(lái)源的TG酶(mTG)不依賴(lài)于Ca2+,而且具有成本低、催化效率高、pH及熱穩(wěn)定性高等特點(diǎn)。
轉(zhuǎn)谷胺酞胺酶在肉制品中應(yīng)用可以明顯改善產(chǎn)品的外觀、風(fēng)味、質(zhì)地等性狀。另外,還可以高效重組低價(jià)值的碎肉,提高產(chǎn)品的附加值。利用TG酶的聚合粘結(jié)作用,可充分利用各種碎肉加工重組型產(chǎn)品,在提高其利用價(jià)值和加工效益的同時(shí),更可實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品的標(biāo)準(zhǔn)化和多樣化。
(1)從乳制品中獲得凝膠。TG用作特殊的試劑從商業(yè)奶制品(像:酪蛋白酸鈉或脫脂乳)得到許多不同物理性質(zhì)凝膠的能力。這些凝膠可以在需要特殊質(zhì)地的食品生產(chǎn)中用作基本材料。例如:用酪蛋白酸鈉凝膠可生產(chǎn)一種新的口香糖類(lèi)產(chǎn)品,不僅能有良好的質(zhì)地、口感,還可提供牛奶蛋白的良好營(yíng)養(yǎng)[1]。
(2)低過(guò)敏原蛋白基材。牛奶中的酪蛋白和乳清成分都有過(guò)敏原活性,通過(guò)TG可以選擇性地修飾抗原決定簇中的谷氨酞胺基,改變抗原決定簇的結(jié)構(gòu),阻止其與抗體的結(jié)合,減少抗原性。對(duì)乳制品酪蛋白凝膠來(lái)說(shuō),提高TG濃度,凝膠的拉力、破斷強(qiáng)度、凝結(jié)力都有較大提升。
酸乳一般分為凝固型酸乳和攪拌型酸乳。攪拌型酸乳在保質(zhì)期內(nèi)常遇到酸乳出現(xiàn)脫水收縮現(xiàn)象。雖然可以通過(guò)改善加工工藝或調(diào)整不同的穩(wěn)定劑配比,從而提高酸乳的表觀黏度、酸乳稠度和持水力,但是隨著食品安全與飲食健康概念的普及,消費(fèi)者更青睞在產(chǎn)品標(biāo)簽中出現(xiàn)較少的配料和較少的添加劑種類(lèi),甚至更喜歡選擇無(wú)添加的、保持天然食品原料屬性的產(chǎn)品。對(duì)于酸乳而言,通常酸乳中的蛋白質(zhì)凝膠建立在大量離子鍵、氫鍵等非共價(jià)鍵基礎(chǔ)上,添加TG酶可以引入共價(jià)鍵改善酸乳的質(zhì)構(gòu)特性。楊洋等在攪拌型酸乳中,對(duì)比了先添加TG酶處理1.5h后經(jīng)滅酶添加菌種發(fā)酵,和TG酶與發(fā)酵劑同時(shí)投入的工藝,相對(duì)于空白組,2種工藝的樣品黏度均有提高,前者大于后者但相差不大,而乳清析出率的改善效果后者明顯優(yōu)于前者。同時(shí),該研究表明TG酶一定量時(shí),酸乳的黏度與原料蛋白質(zhì)量分?jǐn)?shù)正相關(guān),而當(dāng)TG酶用量為6U/g蛋白時(shí)酸乳呈最大黏度,TG酶用量為8U/g蛋白時(shí)乳清析出率最低。Pakseresht充分借鑒TG酶在酸乳中良好的交聯(lián)作用,通過(guò)響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化了TG酶在低脂酸乳的生產(chǎn)。研究表明,當(dāng)0.97%的脂肪、乳清蛋白與酪蛋白比例為0.46,TG酶0.5%為最佳條件。說(shuō)明,在蛋白質(zhì)含量較高的條件下,借助TG酶一定程度上可以減少脂肪含量,進(jìn)而生產(chǎn)高蛋白、低脂肪的酸乳成為可能[2]。
TG酶可以顯著地提高蛋白的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),從而提高冰激凌的打發(fā)膨脹率、對(duì)脂肪的結(jié)合能力和冰淇淋的穩(wěn)定性。但因成本較高的問(wèn)題,國(guó)內(nèi)有關(guān)TG酶在冰激凌應(yīng)用的研究資料較少。研究表明,大豆分離蛋白經(jīng)過(guò)TG酶處理后添加到冰激凌的配料中,通過(guò)提高大豆蛋白的乳化性能,冰激凌的體積膨脹率和融化率均有改善。研究了使用木瓜蛋白酶先對(duì)大豆分離蛋白進(jìn)行水解,再使用TG酶交聯(lián)大豆分離蛋白水解產(chǎn)物,應(yīng)用在冰激凌中,產(chǎn)品在冷凍儲(chǔ)存過(guò)程中抵抗聚結(jié)、聚集等不穩(wěn)定現(xiàn)象,提高儲(chǔ)存的穩(wěn)定性。Rossa等研究通過(guò)響應(yīng)面設(shè)計(jì)優(yōu)化了TG酶在處理冰激凌原料乳的添加量和作用時(shí)間等參數(shù)。研究認(rèn)為,在酶的用量為4U/g蛋白、40℃、90min的條件下,成品冰激凌的品質(zhì)明顯提升,說(shuō)明TG酶先處理原料,無(wú)論是牛乳還是植物來(lái)源的原料,如大豆蛋白、堅(jiān)果類(lèi)蛋白等,然后在進(jìn)行配料生產(chǎn)冰激凌,該工藝既簡(jiǎn)單還可以適當(dāng)?shù)販p少乳化劑的使用量,比較而言TG酶對(duì)冰激凌配料的清潔標(biāo)簽方面有一定的作用。研究了TG酶在不同脂肪含量的冰激凌中的作用,發(fā)現(xiàn)冰激凌的底料經(jīng)過(guò)TG酶處理后,較低脂肪含量的冰激凌同樣具有較好的特性,說(shuō)明TG酶應(yīng)用于冰激凌中可以有效降低脂肪含量,進(jìn)而為開(kāi)發(fā)低脂肪的冰激凌產(chǎn)品做了鋪墊。一系列研究成果表明TG酶用于冰激凌加工方面的巨大潛力[3]。
TG酶在提高大量的研究表明,TG酶應(yīng)用于乳制品加工中,可以對(duì)乳制品作出功能上或質(zhì)構(gòu)上的改善。但因TG酶反應(yīng)需要足夠的時(shí)間和適宜的反應(yīng)條件,可能增加生產(chǎn)工序或延長(zhǎng)生產(chǎn)時(shí)間,也可能會(huì)增加能源消耗和資源上的投入。雖然TG酶應(yīng)用在發(fā)酵酸乳乳蛋白抗氧化特性方面的研究成果相對(duì)較少,但是TG酶潛在的生物利用價(jià)值不容忽視。