HPLC法測定六味地黃膠囊中酒萸肉的含量

溫建麗，李艷紅

（山西瑞福萊藥業(yè)有限公司，山西 太原 030045）

1 儀器與試藥

Agilent1100全自動(dòng)高效液相色譜儀；KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器（250W，40 KHz），江蘇昆山超聲儀器有限公司；BP211D電子天平（德國賽多利斯公司）；馬錢苷對(duì)照品（批號(hào)：111640-200503）購自中國藥品生物制品檢定所，供含量測定用；甲醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：（20090601）為色譜純；四氫呋喃（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：（20071026）為色譜純；乙腈（天津四友精細(xì)化學(xué)品有限公司，批號(hào)：（080429101）為色譜純；其余試劑為分析純；水為雙重蒸餾水。

2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

色譜柱：迪馬公司Diamond C18柱（250mm×4.6mm，5μm）

流動(dòng)相:四氫呋喃-乙腈-甲醇-0.05%磷酸溶液（1∶8∶4∶87）

檢測波長:236 nm；

流速:1.0mL/min；

理論板數(shù):按馬錢苷峰計(jì)算為9 889.25，符合標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的不低于4 000。

3 提取時(shí)間的考察

在提取時(shí)間上，超聲處理選擇了10min、15min、20min，結(jié)果表明，超聲處理10min的含量為1.049mg略低，而超聲處理20min的含量1.090mg與超聲處理15min的含量1.086mg無顯著差異，所以最終選擇超聲處理時(shí)間為15min；回流提取時(shí)間選擇了30min、60min、90min，結(jié)果表明，回流提取 30min的含量 0.471mg偏低，而回流提取90min的含量0.962mg與回流提取60min的含量0.955mg無顯著差異，所以最終選擇回流提取時(shí)間為60min。

4 線性關(guān)系的考察

精密稱取馬錢苷對(duì)照品8.02mg，加50%甲醇溶解并稀釋至100mL，得濃度為 80.2μg·mL-1的貯備液，精密吸取 0、2.5、5、10、12.5、15、25mL分別置 25mL的量瓶中，加 50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取10μL，依次注入高效液相色譜儀，按正文所附的色譜條件測定峰面積，以馬錢苷進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），馬錢苷峰面積為縱坐標(biāo)（Y）；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：y=69.238x-7.2 354（r=0.9 992），結(jié)果表明，馬錢苷濃度在 0～0.802μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，結(jié)果見表1。

表1

5 專屬性試驗(yàn)

按處方比例制備酒萸肉藥材的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制備陰性空白對(duì)照溶液。取陰性空白對(duì)照溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果空白對(duì)照溶液在與馬錢苷對(duì)照品相同保留時(shí)間處，未顯示明顯的色譜峰，認(rèn)為無干擾。

6 精密度試驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液10μL，注入高效液相色譜儀，按正文所附的色譜條件試驗(yàn)，重復(fù)測定6次，馬錢苷峰面積的RSD為：0.12%（n=6），結(jié)果見表 2。

表2

7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取按正文所附方法處理的六味地黃膠囊供試品同一份溶液,按正文所附的色譜條件試驗(yàn)，在 0，1，2，3，4，5，6，7，24 h 分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，結(jié)果9次進(jìn)樣馬錢苷峰面積的平均值為:882.10 141，RSD為2.06%（n=9），表明供試品溶液較穩(wěn)定，結(jié)果見表3。

8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批六味地黃膠囊樣品（批號(hào)為20090201）6份,分別按正文供試品測定法測定,測得馬錢苷的平均含量為1.36mg/g，RSD為0.59%（n=6），結(jié)果見表4。

表3

表4

9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的六味地黃膠囊樣品（批號(hào)為:20090201）約0.15 g（馬錢苷含量約為0.6 894 mg），精密加入馬錢苷對(duì)照品溶液（42.3μg/mL）10mL、15mL、20mL各 3份，分別置上述量瓶中，混勻，按正文所附的供試品溶液制備方法配制成低、中、高3個(gè)濃度的供試品溶液，在正文測定條件下進(jìn)行測定其含量，計(jì)算回收率,高、中、低3個(gè)濃度的平均回收率分別為:102.07%、99.05%、101.02%,平均回收率為:100.71%，其 RSD為:1.37%（n=9），結(jié)果見表5。

1 0 含量測定

取9批生產(chǎn)的樣品（批號(hào)分別為20060301批、20060401批、20060402批、20070501批、20070502批、20070601批、20071001批、20081001批、20090201批），按正文所附的方法進(jìn)行測定,馬錢苷含量結(jié)果見表6。

表5 馬錢苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

表6 9批樣品含量測定結(jié)果

[1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典一部(2010年版).北京:中國醫(yī)藥科技出版社

[2]陳軍，馬雙成等.HPLC法測定忍冬藤中當(dāng)藥苷和馬錢苷的含量.藥物分析雜志,2005,25(12):145

[3]水彩紅，曹紅.HPLC法測定六味地黃膠囊中馬錢苷的含量.中國藥品標(biāo)準(zhǔn),2005,6（4）:233

[4]晏桂敏等.酒萸肉中馬錢苷含量測定的樣品處理方法改進(jìn).中國藥業(yè)