髓樣分化蛋白-2研究進(jìn)展

王芷涵　羅藝晨　帥學(xué)宏　顧國婧　李博文　李文杰　周志雄　趙宇　伍莉　陳吉軒　黃慶洲　焦寒偉

摘要 ? ?髓樣分化蛋白-2（Myeloid differentiation protein-2，MD-2）是一種分子量為20～30 kD的分泌蛋白，它結(jié)合在Toll樣受體4（Toll-like receptor 4，TLR4）胞外區(qū)，能與TLR4組成復(fù)合體（MD-2/TLR4），在細(xì)菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）的識(shí)別及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用，MD-2也是目前炎癥、感染、免疫等病理過程研究的熱點(diǎn)之一。本文對(duì)MD-2基因結(jié)構(gòu)、基因表達(dá)及MD-2與機(jī)體天然免疫等方面研究結(jié)果進(jìn)行綜述，以期闡釋MD-2的基因與天然免疫的關(guān)系，為揭示MD-2基因的功能提供技術(shù)參考。

關(guān)鍵詞 ? ?MD-2;TLR4;信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo);天然免疫

中圖分類號(hào) ? ?Q71 ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 ? ?A

文章編號(hào) ? 1007-5739（2019）19-0210-03 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）

Research ?Progress ?on ?Myeloid ?Differentiation ?Protein-2

WANG Zhi-han ? ?LUO Yi-chen ? ?SHUAI Xue-hong ? ?GU Guo-jing ? ?LI Bo-wen ? ?LI Wen-jie ? ?ZHOU Zhi-xiong ? ?ZHAO Yu ? ?WU Li ? ?CHEN Ji-xuan ? ?HUANG Qing-zhou ? ?JIAO Han-wei *

（College of Animal Sciences，Veterinary Scientific Engineering Research Center，Southwestern University，Chongqing 402460）

Abstract ? ?Myeloid differentiation protein-2 is a kind of molecular weight of 20-30 kd secreted protein，it combines the toll-like receptor 4（TLR4）extracellular area，and forms a complex with TLR4（MD-2/TLR4）.In the recognition and signal transduction of LPS，it plays an important role，too.Futhermore，MD-2 is one of the hottest spot of research such as the inflammation，infection，and immune pathological process.This paper summarized the structure，gene expression of MD-2 and innate immune reaction to MD-2，in order to elucidate the relationship between MD-2 gene and natural immunity and provide technical references for revealing the function of MD-2 gene.

Key words ? ?MD-2;TLR4;signal transduction;innate immune

MD-2是一種分子量為20～30 kD的分泌蛋白[1]，它結(jié)合在TLR4胞外區(qū)，能與TLR4組成復(fù)合體（MD-2/TLR4）引起TLR4的活化，在LPS的識(shí)別及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要作用。此外，MD-2還是天然免疫中的調(diào)控分子，在炎癥、感染、免疫等病理過程中發(fā)揮極為廣泛的生物學(xué)功能。MD-2的功能研究對(duì)治療膿毒癥和肝臟相關(guān)疾病具有重要意義[2-4]。對(duì)MD-2水平的調(diào)控有可能成為治療膿毒血癥的有效方法[5]。本文對(duì)MD-2基因等方面研究結(jié)果進(jìn)行綜述，以期闡釋MD-2的基因與天然免疫的關(guān)系，為揭示MD-2基因功能提供參考。

1 ? ?MD-2基因概述

1.1 ? ?MD-2結(jié)構(gòu)

MD-2蛋白由160個(gè)氨基酸組成，分子質(zhì)量為25～30 ku，因其與MD-1具有高度同源性而被鑒定和命名，其N端有1段由16個(gè)氨基酸殘基組成的信號(hào)肽，使MD-2具有分泌性[5-6]（圖1）。

MD-2由二硫鍵連接成穩(wěn)定的二聚體或寡聚體、多聚體，屬于ML蛋白家族，含ML-功能結(jié)構(gòu)域，與LPS信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和脂質(zhì)代謝有關(guān)，它在結(jié)構(gòu)上可能存在2個(gè)相對(duì)獨(dú)立的功能結(jié)構(gòu)域，使其能與LPS直接結(jié)合，并促進(jìn)LPS和TLR4結(jié)合。其中單體MD-2比多聚體MD-2更易于結(jié)合TLR4，能更有效地賦予TLR4對(duì)LPS的反應(yīng)性。同時(shí)研究表明，MD-2氨基酸序列上的2個(gè)糖基化位點(diǎn)（26位和114位）和7個(gè)半膀氨酸殘基（25、37、51、95、105、133、148位）對(duì)MD-2的功能發(fā)揮具有重要作用，MD-2的第102～116位富含堿性芳香族氨基酸，可形成一環(huán)形，能中和LPS，結(jié)合LPS和脂磷壁酸（lipoteichoic acid，LTA），抑制細(xì)菌生長[7-8]。

1.2 ? ?MD-2基因表達(dá)

髓樣分化蛋白-2是近年新發(fā)現(xiàn)的參與機(jī)體識(shí)別細(xì)菌脂多糖的重要基因，MD-2基因多態(tài)性與創(chuàng)傷后多器官功能衰竭、膿毒癥的發(fā)生和預(yù)后有著密切聯(lián)系[9]。

大量研究猜測(cè)，MD-2基因啟動(dòng)子區(qū)-1625G可能是一個(gè)重要的導(dǎo)致嚴(yán)重創(chuàng)傷后并發(fā)癥發(fā)生的危險(xiǎn)區(qū)域。MD-2基因啟動(dòng)子-1625C/G單核苷酸多態(tài)性與漢族人嚴(yán)重創(chuàng)傷后多器官功能衰竭、膿毒癥的易感性相關(guān)，-1625G可能是嚴(yán)重創(chuàng)傷后并發(fā)癥發(fā)生的危險(xiǎn)因素。同時(shí)化學(xué)發(fā)光結(jié)果顯示，-1625C→G堿基變異可增強(qiáng)MD-2基因啟動(dòng)子活性，變異引起的MD-2基因啟動(dòng)子活性的增強(qiáng)最終有可能導(dǎo)致靶基因表達(dá)升高，從而影響TLR4、MD-2、CD14復(fù)合物對(duì)LPS的反應(yīng)性[9-10]。

2003年有學(xué)者在對(duì)創(chuàng)傷患者進(jìn)行觀察后發(fā)現(xiàn)，患者體內(nèi)TLR4、MD-2基因表達(dá)均降低，預(yù)后良好的在傷后第5天恢復(fù)正常水平，預(yù)后差的則仍處于低水平。創(chuàng)傷可引起內(nèi)毒素血癥，創(chuàng)傷后人外周血單核細(xì)胞內(nèi)TLR4、MD-2 mRNA的表達(dá)與患者的免疫機(jī)能、預(yù)后情況密切相關(guān)。因此，推測(cè)TLR4、MD-2表達(dá)的降低可能是機(jī)體對(duì)過度炎癥反應(yīng)而產(chǎn)生的一種保護(hù)性措施[11]。

大量研究發(fā)現(xiàn)，正常雌性和雄性大鼠肺組織均可表達(dá)少量TLR4、MD-2和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF-α）基因，性別間差異均無顯著性，但膿毒癥雌性大鼠各項(xiàng)指標(biāo)表達(dá)均明顯弱于雄性。LPS注射后大鼠心肌組織、大鼠肝臟組織TLR4、MD-2及TNF-α基因表達(dá)均存在性別差異，內(nèi)源性雌激素的作用可能導(dǎo)致雌性膿毒癥大鼠心肌組織對(duì)LPS的反應(yīng)性弱于雄性，肝臟組織損傷較雄性輕。目前認(rèn)為膿毒癥發(fā)生的根本原因在于機(jī)體過度釋放細(xì)胞因子和炎性介質(zhì)導(dǎo)致炎癥反應(yīng)失控和免疫機(jī)能紊亂。內(nèi)源性雌激素可能通過抑制TLR4/MD-2基因表達(dá)而減弱膿毒癥發(fā)生時(shí)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的活化，從而介導(dǎo)了對(duì)雌性膿毒癥大鼠肝臟功能的保護(hù)作用[12-14]。

研究表明，膿毒癥可迅速上調(diào)心肌組織TLR4、MD-2基因廣泛表達(dá)，膿毒癥發(fā)生時(shí)TLR4識(shí)別LPS是以TLR4/MD-2復(fù)合體形式完成的，而且在識(shí)別過程中MD-2是TLR4必需的作用分子[15]。在此狀態(tài)下大鼠心肌TLR4/MD-2基因表達(dá)變化規(guī)律基本保持一致，同時(shí)TLR4、MD-2基因表達(dá)上調(diào)又能促進(jìn)LPS刺激局部組織合成、釋放早期炎癥細(xì)胞因子——TNF-α，從而可能共同參與了機(jī)體失控性炎癥反應(yīng)的病理生理過程[16]。

此外，MD-2基因啟動(dòng)子區(qū)域的rs11465996多態(tài)性與新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎（Necrotizing enterocolitis of newbo-rn，NEC）嚴(yán)重程度有關(guān)[17]。

CHI Xinjin等[18]研究表明，MD-2基因降低使TLR2/4活化作用的增加減弱，降低了原位自體肝移植后的急性肺損傷。目前國內(nèi)已成功構(gòu)建人TLR4及MD-2基因反義真核表達(dá)載體，為研究其在肺炎癥反應(yīng)中的作用奠定基礎(chǔ)[19]。

2 ? ?MD-2與機(jī)體天然免疫

2.1 ? ?與TLR4組成復(fù)合體

近年來，熒光共振能量轉(zhuǎn)移（fluorescence resonance ene-rgy transfer，F(xiàn)RET）技術(shù)為TLR4和MD-2在活體細(xì)胞中的相互作用提供了直接證據(jù)。TLR4的功能需要有髓樣分化蛋白-2的輔助，在只有TLR4而沒有MD-2存在的情況下，細(xì)胞對(duì)LPS不發(fā)生反應(yīng)或反應(yīng)微弱[6];另一方面，TLR4 mRNA與MD-2 mRNA表達(dá)具有顯著正相關(guān)[15]，這表明它們?cè)跈C(jī)體免疫方面具有一定聯(lián)系。

TLR4識(shí)別LPS信號(hào)是以TLR4/MD-2復(fù)合受體的形式完成的，而且在識(shí)別過程中MD-2是TLR4必需的作用分子[16]，其表達(dá)的功能域結(jié)合TLRs并在TLRs激活中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用[18]，起調(diào)節(jié)TLR4的胞內(nèi)分布和輔助TLR4識(shí)別LPS作用;另一部分MD-2釋放到血漿中，形成可溶性MD-2（sMD-2），在白細(xì)胞分化抗原14（CD14）參與下能結(jié)合血漿中的LPS[5]。

MD-2、TLR4以及白細(xì)胞分化抗原14（CD14）三者通常組成復(fù)合物受體識(shí)別LPS，完成信號(hào)傳導(dǎo)。復(fù)合物結(jié)構(gòu)的完整性是其發(fā)揮功能的基礎(chǔ)，其中，MD-2與TLR4結(jié)合，賦予TLR4對(duì)各種配體（包括LPS）的反應(yīng)性，并且與TLR4在細(xì)胞內(nèi)的分布密切相關(guān)[2，8，20]。因此，MD-2不僅僅是TLR4的輔助分子，而且還是天然免疫中的調(diào)控分子，可能在感染、炎癥、免疫等病理生理過程中具有更廣泛的生理學(xué)功能[8]。

可溶性TLR4/MD-2受體復(fù)合物能顯著降低細(xì)菌感染后炎癥性細(xì)胞因子IL6 /IL8的分泌水平以及炎癥細(xì)胞表面共刺激分子的表達(dá)，它能有效阻斷體外感染模型中炎癥介質(zhì)的釋放，為探索新的炎癥性損傷防治途徑提供了試驗(yàn)依據(jù)[3]。

一系列研究顯示，LPS可以對(duì)心肌組織TLR4/MD-2進(jìn)行上調(diào)基因表達(dá)，本過程中，MD-2是TLR4必需的作用分子。TLR4和MD-2結(jié)合在細(xì)胞表面形成的受體復(fù)合物在LPS誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答中具有關(guān)鍵作用。這個(gè)變化有可能是引發(fā)術(shù)后全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome，SIRS）的分子機(jī)制之一[7]。

2.2 ? ?相關(guān)藥物

近年來，越來越多髓樣分化蛋白-2的相關(guān)藥物和物質(zhì)受到重視。研究發(fā)現(xiàn)，苦參素對(duì)EAE大鼠有防治作用，其作用機(jī)制可能與下調(diào)大鼠脊髓中TLR4和血清中MD-2的表達(dá)有關(guān)，其通過影響TLR4/MD-2的表達(dá)進(jìn)而影響EAE的發(fā)病情況[1]。槐定堿作用于TLR4/MD-2，以抑制TLR4-NF-κB-TNF-α通路活化來作為其抗內(nèi)毒素機(jī)制之一[21]。

宣白承氣湯能減輕內(nèi)毒素致ALI大鼠肺組織損傷，對(duì)肺損傷有保護(hù)作用，其機(jī)制可能與其能降低內(nèi)毒素致ALI大鼠MD-2 mRNA、髓樣分化蛋白抗原（myeloid differential pro-tein-88，MyD88）蛋白及其mRNA的表達(dá)有關(guān)[22];此外，ZHA-NG Yali 等[23]研發(fā)出了新的姜黃素類似物MACs，它通過與LPS競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合到MD-2上，進(jìn)而抑制TLR4/MD-2信號(hào)復(fù)合物，其中MAC17和28具有最強(qiáng)的抗炎作用，90%以上抑制了LPS刺激巨噬細(xì)胞的細(xì)胞因子分泌，對(duì)LPS誘導(dǎo)的急性肺損傷和膿毒癥有防衛(wèi)作用。

分化誘導(dǎo)劑豆蔻酸-佛波醇-乙酯酸（PMA）在濃度1～100 ng/mL下均可將THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化為成熟巨噬細(xì)胞，增加誘導(dǎo)質(zhì)量濃度可顯著提高炎癥因子TNF-α、IL-6的分泌水平，但對(duì)其膜表面受體MD-2表達(dá)和分布無明顯影響。因此，對(duì)內(nèi)毒素致炎效應(yīng)的研究，應(yīng)盡可能選擇低質(zhì)量濃度的PMA（1.5 ng/mL），因?yàn)榈唾|(zhì)量濃度的PMA既可誘導(dǎo)THP-1分化為形態(tài)和活性良好的成熟巨噬細(xì)胞，又可避免過高的炎癥因子TNF-α、IL-6的分泌，從而可最大程度地減小誘導(dǎo)過程對(duì)于后續(xù)的巨噬細(xì)胞功能試驗(yàn)的影響[24]。

2011年，丙泊酚已經(jīng)廣泛應(yīng)用于ICU膿毒癥、嚴(yán)重創(chuàng)傷等危重患者的鎮(zhèn)靜治療，早期使用丙泊酚對(duì)膿毒癥大鼠肝臟具有明顯的保護(hù)作用。研究顯示，正常大鼠肝組織內(nèi)可見少量TLR4、MD-2 mRNA表達(dá)，脂多糖可迅速上調(diào)肝組織中TLR4、MD-2基因的廣泛表達(dá)，丙泊酚干預(yù)后TLR4、MD-2 mRNA表達(dá)明顯下降，對(duì)膿毒癥大鼠有明顯的治療作用。肝組織中TLR4、MD-2基因的表達(dá)與早期膿毒癥的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，2種基因的mRNA表達(dá)成顯著正相關(guān)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)TLR4、MD-2 mRNA改變對(duì)膿毒癥發(fā)病及治療過程具有一定意義[25]。

Wolf-Grosse等[26]試驗(yàn)表明，氧化鐵納米顆粒（iron oxide nanoparticles，IONPs）對(duì)TLR配體誘導(dǎo)的細(xì)胞因子有不同程度的影響，顆粒介導(dǎo)的TLR4誘導(dǎo)細(xì)胞因子的增強(qiáng)不能用補(bǔ)體激活來解釋，而是依賴于TLR4/MD-2和CD14。在Saenger等[27]的研究中，牛奶蛋白αS1-casein被確認(rèn)為是TLR4星質(zhì)域的粘結(jié)劑，相較于LPS而言，αS1-casein對(duì)于TLR4/MD2顯示出更高的親和力。

2.3 ? ?臨床應(yīng)用

視網(wǎng)膜缺血再灌注（ischemia reperfusion，I/R）損傷在許多眼科疾病中很常見。Huaicheng Chen等[28]的研究表明，TL-R4參與缺血性視網(wǎng)膜損傷，抑制MD-2可能是調(diào)節(jié)TLR4信號(hào)通路和缺血性視網(wǎng)膜損傷中有害下游效應(yīng)的一種新途徑。MD-2參與TLR4-NADPH氧化酶4（NADPH oxidase4，NOX4）復(fù)合物的形成，在視網(wǎng)膜I/R損傷的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。因此，抑制MD-2可減少視網(wǎng)膜I/R損傷過程中TLR依賴性損傷。

高遷移率組box-1（High mobility group box-1，HMGb1）是一種內(nèi)源性危險(xiǎn)因子相關(guān)分子模式蛋白（danger-associated molecular pattern protein，DAMP），其胞外釋放與無菌損傷以及各種炎癥疾病和條件有關(guān)，現(xiàn)已被證明是一種有價(jià)值的臨床藥物靶點(diǎn)。根據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，假設(shè)二硫化物A-box片段與TLR4/MD-2結(jié)合，而不促進(jìn)TLR4二聚體的形成，則其可與HMGb1結(jié)合位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)，從而達(dá)到防止HMGb1誘導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和下游炎癥的目的。促炎B-box片段保留MD-2活性構(gòu)象，并與復(fù)合物中的TLR4蛋白結(jié)合，協(xié)助TLR4二聚體的形成，激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路下游炎癥通路和細(xì)胞因子釋放[29]。

Babazada等[30]研究表明，自組裝脂肪肝素衍生物通過拮抗TLR4/MD-2來抑制免疫系統(tǒng)，其對(duì)乙二醇拆分肝素-d-紅細(xì)胞-鞘氨嘧啶偶聯(lián)物（glycol split heparin-d-erythrosp-hin-gosine conjugates，NAHNP）及其具有短脂鏈的區(qū)域選擇性脫硫衍生物與TLR4/MD-2相互作用的生物物理性質(zhì)進(jìn)行了研究。二維核奧弗豪斯效應(yīng)光譜研究表明，在乙二醇裂解后，肝素主干獲得了額外的適應(yīng)性，有助于與蛋白質(zhì)結(jié)合。然而，與天然肝素或乙二醇拆分非抗凝劑肝素（nonanticoag-ulant heparin，NAH）不同，NAH的疏水衍生物迫使硫酸酸化的艾杜糖醛酸殘基的構(gòu)型從2S0斜船型改變?yōu)?C4椅型，而肝素和NAH則并未有明顯效果。NAHNP則顯著地抑制脂多糖誘導(dǎo)NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的激活，當(dāng)它與TLR4/MD-2結(jié)合時(shí)，親和力為62.3 nM?；谏飩鞲衅鞯慕Y(jié)構(gòu)動(dòng)力學(xué)關(guān)系研究表明，6-O-sulfo組d-氨基葡萄糖殘基在與受體復(fù)合物的TLR4和MD-2結(jié)構(gòu)域精氨酸結(jié)合中起重要作用，6-O-sulfo基團(tuán)的脫硫使締合動(dòng)力學(xué)下降，導(dǎo)致親和力降低800 nM。與脂多糖類似，NAHNP的2個(gè)脂族鏈與MD-2口袋結(jié)合，鏈長度下降導(dǎo)致NF-κB轉(zhuǎn)錄抑制活動(dòng)以及與TLR4/MD-2的結(jié)合親和力的喪失。

色氨酸t(yī)RNA合成酶（Tryptophanyl-tRNA synthetase，WRS）是一種具有非典型功能的氨基酰基tRNA合成酶（am-inoacyl-tRNA synthetases，ARSs）。在細(xì)菌感染過程中釋放全長WRS，啟動(dòng)TLR4/MD-2復(fù)合物，誘導(dǎo)先天免疫應(yīng)答。有研究表明，重組WRS蛋白處理細(xì)胞可以促進(jìn)炎癥細(xì)胞因子和1型干擾素（type 1 interferons，IFNs）的產(chǎn)生，并抑制THP-1和Raw264.7細(xì)胞中的病毒復(fù)制，但在TLR4-/-或MD-2-/-骨髓源性巨噬細(xì)胞（bone marrow-derived macrophages，BMD-Ms）中則不能[31]。

在疫苗的設(shè)計(jì)和配制方面，一種名為佐劑的疫苗成分可增強(qiáng)宿主免疫系統(tǒng)對(duì)抗原的識(shí)別，從而刺激其細(xì)胞和適應(yīng)性反應(yīng)。特別是具有自組裝特性的合成toll樣受體激動(dòng)劑被認(rèn)為是佐劑開發(fā)的良好候選者。TLR4衍生20殘基肽（TR-433）存在于TLR/MD-2復(fù)合體的二聚反應(yīng)界面，在短暫轉(zhuǎn)染TLR4/CD14/MD-2和Balb/cmice的THP-1單核細(xì)胞和HEK293T細(xì)胞中誘導(dǎo)促炎反應(yīng)，作為一種新的佐劑在治療應(yīng)用中具有很大的發(fā)展?jié)摿32]。

3 ? ?參考文獻(xiàn)

[1] 劉楠，朱琳，呂瑩，等.苦參素對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠TLR4/MD-2表達(dá)的影響[J].中藥藥理與臨床，2012，28（6）：47-49.

[2] 焦寒偉，杜麗，雷明，等.水牛MD-2 cDNA基因的克隆與原核表達(dá)[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32（9）：9-13.

[3] 杜本軍，高全勝，馬洪濱.可溶性TLR4/MD-2體外對(duì)炎癥反應(yīng)的抑制作用[J].軍事醫(yī)學(xué)，2011，35（2）：115-117.

[4] 鐘田雨，唐靖，陳登宇，等.利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)研究活細(xì)胞TLR4與MD-2作用結(jié)構(gòu)域[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2009，36（11）：1451-1457.

[5] 鐘田雨，劉靖華，姜勇.髓樣分化蛋白-2在識(shí)別和轉(zhuǎn)導(dǎo)內(nèi)毒素信號(hào)中的作用[J].生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展，2007，34（5）：460-464.

[6] 劉亞偉，劉靖華，唐靖，等.用FRET技術(shù)研究TLR4和MD-2的相互作用[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，26（8）：1101-1105.

[7] 盧惠倫.MD-2在全身炎性反應(yīng)綜合征中的作用[J].中國現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2010，4（16）：39-40.

[8] 徐發(fā)良，李磊.髓樣分化蛋白-2在天然免疫中的作用[J].生理科學(xué)進(jìn)展，2004，35（2）：139-142.

[9] 顧瑋，單佑安，劉慶，等.漢族人髓樣分化蛋白2基因啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性與嚴(yán)重創(chuàng)傷后并發(fā)癥易感性的關(guān)系[J].中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，29（4）：484-487.

[10] 單佑安，劉慶，董蕻，等.MD-2基因啟動(dòng)子區(qū)-1064、-1625 SNP對(duì)啟動(dòng)子活性的影響[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，29（3）：185-187.

[11] 鄭仲謹(jǐn)，顧長國，胡承香，等.創(chuàng)傷患者外周血單核細(xì)胞Toll樣受體4和髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的變化[J].中華創(chuàng)傷雜志，2003，19（1）：23-25.

[12] 杜曉輝，姚詠明，李榮，等.性別差異對(duì)膿毒癥大鼠非組織Toll樣受體4及髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的影響[J].中國危重病急救醫(yī)學(xué)，2005，17（12）：726-728.

[13] 杜曉輝，李榮，姚詠明，等.性別差異對(duì)膿毒癥大鼠心肌Toll樣受體4和髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的影響[J].軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，27（3）：196-198.

[14] 杜曉輝，李榮，徐迎新，等.性別差異對(duì)膿毒癥大鼠肝臟Toll樣受體4和髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的影響[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2006，23（4）：552-553.

[15] 杜曉輝，姚詠明，李榮，等.膿毒癥大鼠肝臟組織Toll樣受體4和髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的變化規(guī)律[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2005，30（10）：870-872.

[16] 杜曉輝，李榮，徐迎新，等.膿毒癥大鼠心肌Toll樣受體4和髓樣分化蛋白-2基因表達(dá)的變化和意義[J].中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2006，23（3）：312-313.

[17] 袁媛，周偉，袁偉明，等.MD-2和GM2A基因多態(tài)性與新生兒壞死性小腸結(jié)腸炎的關(guān)系[J].中國新生兒科雜志，2015，30（1）：3-8.

[18] CHI Xinjin，ZHANG Ailan，LUO Gangjian，et al.Knockdown of myeloid differentiation protein-2 reduces acute lung injury following orthotopic autologous liver transplantation in a rat model[J].Pulmonary Pharmacol-ogy & Therapeutics，2013，26：380-387.

[19] 李永旺，李淑萍，錢桂生，等.人TLR4及MD2基因反義真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J].第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26（7）：601-603.

[20] 王雯，王東，方明明，等.脂多糖作用巨噬細(xì)胞表面TLR4/CD14/MD-2受體復(fù)合物表達(dá)的變化[J].空軍醫(yī)學(xué)雜志，2015，31（1）：29-30.

[21] 王艷榮，楊峰，劉靜，等.槐定堿與TLR4/MD-2阻斷劑對(duì)LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞TLR4-NF-κB-TNF-α通路的影響[J].中國中藥雜志，2012，37（20）：3107-3111.

[22] 張海英，王利霞，楊愛東，等.宣白承氣湯對(duì)內(nèi)毒素致急性肺損傷大鼠肺組織MD-2mRNA、MyD88蛋白及其mRNA表達(dá)的影響[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15（9）：36-39.

[23] ZHANG Yali，LIU Zhiguo，WU Jianzhang，et al.New MD2 inhibitors de-rived from curcumin with improved anti-inflammatory activity[J].Europ-ean Journal of Medicinal Chemistry，2018，148：291-305.

[24] 許建華，段光杰，朱江，等.分化誘導(dǎo)劑PMA對(duì)THP-1源性巨噬細(xì)胞膜表面受體MD-2表達(dá)的影響[J].免疫學(xué)雜志，2013，29（2）：121-125.

[25] 雷賢英，甘辭海，鐘慶，等.早期膿毒癥大鼠肝TLR4和MD-2基因的表達(dá)及丙泊酚對(duì)其的影響[J].廣東醫(yī)學(xué)，2011，32（23）：3021-3024.

[26] WOLF-GROSSE S，MOLLNES T E，ALI S.Iron oxide nanoparticles en-hance Toll-like receptor-induced cytokines in a particle size-and actin-dependent manner in human blood[J].Nanomedicine（Lond）.2018 Aug 7.doi：10.2217/nnm-2017-0362.

[27] SAENGER T，VORDENB？魧UMEN S，GENICH S，et al.Human αS1-ca-sein induces IL-8 secretion by binding to the ecto-domain of the TLR4/MD2 receptor complex[J].Biochim Biophys Acta Gen Subj，2018，doi：10.1016/j.bbagen.2018.12.007.

[28] CHEN Huaicheng，SONG Zongming，YING Shilong，et al. Myeloid diff-erentiation protein 2 induced retinal ischemia reperfusion injury via up-regulation of ROS through a TLR4-NOX4 pathway[J].Toxicology Let-ters，2018，doi：10.1016/j.toxlet.2017.10.018.

[29] SUN S，HE M，VANPATTEN S，et al.Mechanistic Insights into High Mobility Group Box-1（HMGb1） induced Toll-like Receptor 4（TLR4）Dimer Formation[J].J Biomol Struct Dyn，2018 Sep 21：1-30. doi：10.1080/07391102.2018.1526712.

[30] BABAZADA H，YANAMOTO S，HASHIDA M，et al.Binding and struc-ture-kinetic relationship analysis of selective TLR4-targeted immunos-uppressive self-assembling heparin nanoparticles[J].Int J Pharm，2018 Dec 1;552（1-2）：76-83.doi：10.1016/j.ijpharm.2018.09.054.

[31] LEE H C，LEE E S，UDDIN M B，et al.Released tryptophanyl-tRNA sy-nthetase stimulates innate immune responses against viral infection[J].J Virol，2018，doi：10.1128/JVI.01291-18.

[32] TANDON A，PATHAK M，HARIOUDH M K，et al.A TLR4-derived non-cytotoxic，self-assembling peptide functions as a vaccine adjuvant in mice[J].J Biol Chem，2018，doi：10.1074/jbc.RA118.002768.