鬼燈籠提取物的體外抑菌實(shí)驗(yàn)

楊小良，李瑤，劉振飛

(廣西中醫(yī)藥大學(xué)賽恩斯新醫(yī)藥學(xué)院，廣西 南寧 530222)

鬼燈籠(ClerodendrumfortunatumL.)又名燈籠草，為馬鞭草科植物白花燈籠的莖、葉，主產(chǎn)于廣東、廣西，微苦、微甘，性涼，有清熱止咳、解毒消腫的功效，主治肺癆咳嗽、骨蒸潮熱、跌打損傷、咽喉腫痛、癤腫疔瘡。鬼燈籠根有清熱解毒、涼血消腫的功效，主治感冒發(fā)熱、咳嗽、咽痛、跌打腫痛[1]等。有研究表明,白花燈籠水提取物和醇提取物有較強(qiáng)的抗補(bǔ)體活性[2]。

鬼燈籠能治療癤腫疔瘡，但未見其抑菌研究的相關(guān)報道。為切合臨床實(shí)際應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)通過對鬼燈籠常用溶劑(水和70%乙醇)的提取物進(jìn)行體外抑菌考察，初步研究其抗菌范圍及所抗病原菌的最小濃度(MIC)，為鬼燈籠的進(jìn)一步研究和應(yīng)用提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

RE52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；電熱恒溫培養(yǎng)箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；GI54DWS型高壓蒸汽滅菌箱。

1.2 菌株及培養(yǎng)基

金黃色葡萄球菌、金黃色葡萄球耐藥菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希桿菌、表皮葡萄球菌、傷寒沙門氏菌、糞腸球菌、屎腸球菌、無乳鏈球菌和化膿性鏈球菌均為標(biāo)準(zhǔn)菌株，購自中國藥品生物制品檢定所；營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基(杭州濱和微生物試劑有限公司)。

1.3 藥材

采自廣西北流市，經(jīng)廣西植物所寧世江鑒定為馬鞭草科植物白花燈籠(ClerodendrumfortunatumL.)的全株。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品的制備

鬼燈籠水提物：稱取鬼燈籠藥材粗粉20 g，加入10倍量的水冷浸1 h，煎煮2次，每次1 h，過濾，合并2次濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，制成含藥量為1 g/mL的藥液，冷藏備用。

鬼燈籠70%乙醇提物：稱取鬼燈籠藥材粗粉20 g，加入10倍量的70%乙醇先冷浸1 h，然后回流提取2次，每次1 h，過濾，合并2次濾液，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行減壓濃縮，制成含藥量為1 g/mL的藥液，冷藏備用[3]。

將鬼燈籠水和70%乙醇提取物，各配制成含相當(dāng)于原藥材濃度為1 000 mg/mL， 500 mg/mL，250 mg/mL，125 mg/mL，62.5 mg/mL，31.3 mg/mL，15.6 mg/mL，7.8 mg/mL，3.9 mg/mL，1.9 mg/mL的濃度系列。

2.2 菌懸液的制備

將10種活化培養(yǎng)后的菌株接種于無選擇性的LB瓊脂培養(yǎng)基上，按照相應(yīng)培養(yǎng)條件培養(yǎng)[4]。挑選新鮮菌落，懸浮于生理鹽水中，振蕩混勻，以0.5號麥?zhǔn)媳葷峁転闃?biāo)準(zhǔn)，調(diào)整細(xì)菌濃度為1.5×106cfu/mL的菌量，備用[5]。

2.3 紙片藥敏實(shí)驗(yàn)

無菌條件下，將上述10種菌株混懸液分別接種到普通營養(yǎng)培養(yǎng)基表面，每種細(xì)菌平行接種3個平板，將藥敏片貼于平板上，每個平板貼4片，其中一片為陰性對照。37 ℃ 培養(yǎng) 24 h，24 h后觀察抑菌效果[6]。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)，測試菌的生長被抑制形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映了測試菌對鬼燈籠提取物的敏感程度[7]。

2.4 MIC實(shí)驗(yàn)

將定性濾紙制成的6 mm圓形紙片[8-9]，滅菌烘干后,分別取若干紙片浸泡于上述20份溶液中2 h，烘干后備用；浸泡于無菌蒸餾水中做陰性對照，其他處理?xiàng)l件同前。

3 結(jié)果

鬼燈籠的水提物和70%乙醇提取物對革蘭陽性菌如金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌顯著的抑制其生長，但對金黃色葡球耐藥菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、傷寒沙門氏菌、糞腸球菌、屎腸球菌、無乳鏈球菌和化膿性鏈球菌則無抑制其生長的作用；而70%乙醇提取物對化膿性鏈球菌有一定抑制生長。結(jié)果見表1～表4。

表1鬼燈籠水、70%乙醇提取物對細(xì)菌抑制生長的影響

菌種類型抑菌環(huán)直徑(mm)水提液濃度(1 000 mg/mL)70%乙醇提液濃度(1 000 mg/mL)無菌水金黃色葡萄球菌19.6522.080金黃色葡萄球耐藥菌000銅綠假單菌000大腸埃希桿菌000表皮葡萄球菌22.6624.440傷寒沙門氏菌000糞腸球菌000屎腸球菌000無乳鏈球菌000化膿性鏈球菌07.280

表2鬼燈籠水提物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌作用(mg/mL)

抑菌環(huán)直徑(mm)金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌1 00019.6522.6650019.4821.7525016.6119.8062.57.6917.6632.25010.9215.63007.81003.91001.9500000

表3鬼燈籠70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的抑菌作用(mg/mL)

抑菌環(huán)直徑(mm)金黃色葡萄球菌表皮葡萄球菌1 00022.0824.4450020.4123.8325011.4020.6262.510.6515.8532.25010.9215.6308.477.81003.91001.9500000

表4水和70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的最低抑菌濃度(MIC)

供試菌水提物(mg/mL)70%乙醇提取物(mg/mL)金黃色葡萄球菌125125表皮葡萄球菌62.532.25

4 小結(jié)

鬼燈籠有清熱止咳、解毒消腫的功效。體外抑菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鬼燈籠水和70%乙醇提取物均對金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌均具有明顯的抑菌作用，水和70%乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度均為125 mg/mL；而對表皮葡萄球菌的最小抑菌濃度上有差別，水提物的最小抑菌濃度為62.5 mg/mL，70%乙醇提取物的最小抑菌濃度為32.25 mg/mL。鬼燈籠的水和70%乙醇提取物所含成分比較復(fù)雜，至于何種成分起作用有待下一步研究，本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果將為鬼燈籠不同部位的抑菌能力考察提供一定依據(jù)。