不同年生野山參中總皂苷和總多糖的含量測(cè)定

楊懷雷，徐芳菲，李 蕾，韓士冬，曹志強(qiáng)*

（吉林人參研究院·吉林通化·134001）

人參為五加科 (Araliaceae)植物人參Panax ginsengC.A.Mey的干燥根。以生態(tài)不同區(qū)分為野山參、移山參和園參[1]。在山野天然生長(zhǎng)者被稱為野山參。野山參主要生長(zhǎng)在我國(guó)長(zhǎng)白山以及大興安嶺、小興安嶺區(qū)域，屬于人參的一種。所謂野山參，其實(shí)際上也指自然生長(zhǎng)在深山中的人參，是不摻雜任何人為干預(yù)與技術(shù)管理的。野山參在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)受到自然環(huán)境的影響，從而形成相應(yīng)的根莖、主根等特殊形態(tài)[2]。近年來(lái)，對(duì)于野山參的研究主要集中在培育、鑒別、指紋圖譜等方面[3～6]，其總皂苷和總多糖方面的研究報(bào)道較少。本文提取了野山參中的總皂苷和總多糖，并采用紫外分光光度法對(duì)兩者的含量進(jìn)行測(cè)定，為野山參的基礎(chǔ)成分研究提供了參考依據(jù)，為野山參的質(zhì)量控制奠定了基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（SP-1920），上海光譜儀器有限公司；電熱恒溫水浴鍋（HH-6），金壇市白塔金昌實(shí)驗(yàn)儀器廠；電子天平（SQP），賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；超聲波清洗器（KQ500-DE），昆山市超聲儀器有限公司；智能高速冷凍離心機(jī)（3H16RI），湖南赫西儀器裝備有限公司。

1.2 材料

野山參(1～18年生)；人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110754-201827)；葡萄糖(中國(guó)計(jì)量科學(xué)研究院，批號(hào)17001)；無(wú)水乙醇、甲醇、濃硫酸、苯酚(北京化工廠，分析純)；香草醛(天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，分析純)。

2 方法

2.1 對(duì)照品溶液的制備

2.1.1 人參皂苷Re對(duì)照品

精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品10.80mg，置10mL容量瓶中，加甲醇適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為1.080mg/mL的人參皂苷Re對(duì)照品溶液。

2.1.2 葡萄糖對(duì)照品

精密稱取葡萄糖對(duì)照品25.13mg，置25mL容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻，然后精密移取1mL置10mL量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.10052mg/mL的葡萄糖對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

2.2.1 總皂苷供試品

取不同年生野山參于烘箱中65℃烘干，粉碎，過(guò)80目篩。準(zhǔn)確稱取野山參粉末（1～18年）0.5g，加10mL（20倍量）75%乙醇加熱回流2h，重復(fù)提取3次，合并濾液，蒸干。殘?jiān)蛹状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，超聲處理30min使其充分溶解，搖勻，即為總皂苷供試品溶液。

2.2.2 總多糖供試品

準(zhǔn)確稱取野山參粉末1.0g，加入50mL蒸餾水，浸泡過(guò)夜；次日加熱回流提取3次，第1次2h，第2、3次均1h，合并濾液，水浴鍋蒸至粘稠掛壁。加入20mL 95%乙醇，靜置過(guò)夜；次日轉(zhuǎn)移至離心管中，10000r/min離心 30min，棄去上清液，干燥（70～80℃），得粗多糖。將粗多糖轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻，即得。測(cè)定前用蒸餾水稀釋3倍，即為人參多糖供試品溶液。

2.3 溶液的配制

2.3.1 8%香草醛乙醇試液：取香草醛0.8g，加無(wú)水乙醇使溶解成10ml，即得。

2.3.2 72%硫酸溶液：取硫酸72mL，緩緩注入適量水中，冷卻至室溫，加水稀釋至100mL，搖勻，即得。

2.3.3 5%苯酚溶液：取苯酚1g，加入蒸餾水20mL，搖勻，即得。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

2.4.1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取人參皂苷Re對(duì)照品溶液20、30、40、50、60、70、80、90μL， 置磨口帶塞試管中， 水浴蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇試液0.5mL，72%硫酸溶液5mL，充分振搖混勻后置60℃恒溫水浴上加熱10min，立即用冰水浴冷卻10min，搖勻。以試劑做空白，按照分光光度法于544nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，做回歸方程。

2.4.2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取葡萄糖對(duì)照品溶液 0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，置10mL試管中，加入5%苯酚溶液1.0mL，迅速加入濃硫酸7.0mL，混勻，室溫放置5min，沸水加熱30min，冷卻至室溫，以蒸餾水為空白對(duì)照，于492nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度。以吸光度A為縱坐標(biāo)，質(zhì)量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，做回歸方程。

2.5 含量測(cè)定

2.5.1 總皂苷含量測(cè)定

精密吸取供試品溶液20μL，置具塞刻度試管中，蒸干甲醇后，加入8%香草醛乙醇試液0.5mL，72%硫酸溶液5mL，充分振搖混勻后置60℃恒溫水浴上將熱10min，立即用冰水浴冷卻10min，搖勻。以試劑做空白，按照分光光度法于544nm波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)樣品中總皂苷的質(zhì)量m。野山參中總皂苷含量(%)(m為總皂苷的質(zhì)量，V1為供試品溶液取樣體積，V2為供試品溶液定容體積，M為樣品質(zhì)量)。

2.5.2 總多糖含量測(cè)定

精密量取供試品溶液0.1mL，置10mL具塞試管中，加入5%苯酚溶液1.0mL，迅速加入濃硫酸7.0mL，混勻，室溫放置5min，沸水加熱30min，冷卻至室溫，以蒸餾水為空白對(duì)照，于波長(zhǎng)492nm處測(cè)定吸光度，由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出待測(cè)樣品中總多糖的質(zhì)量m。野山參中總多糖含量(%)(m為總多糖的質(zhì)量，V1為供試品溶液取樣體積，V2為供試品溶液定容體積，M為樣品質(zhì)量，f為稀釋倍數(shù))。

3 結(jié)果

3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

按照“2.4”項(xiàng)下的方法分別對(duì)人參皂苷Re和葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行繪制，得出回歸方程。人參皂苷Re的回歸方程為y=0.0062x-0.0269，R2=0.9995，表明總皂苷質(zhì)量在21.60-97.20μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖1。葡萄糖的回歸方程為y=0.0062x-0.0099，R2=0.9918，表明在總多糖質(zhì)量在10.052～80.416μg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好，標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖2.

圖1 人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖2 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線

3.2 含量測(cè)定

3.2.1 總皂苷含量測(cè)定

不同年生野山參中人參總皂苷含量測(cè)定結(jié)果為3.24%～6.37%，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 不同年生野山參中人參總皂苷含量測(cè)定結(jié)果

3.2.2 總多糖含量測(cè)定

不同年生野山參中總多糖含量測(cè)定結(jié)果為17.50%～22.92%，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 不同年生野山參中總多糖含量測(cè)定結(jié)果

4 討論

本文對(duì)不同年生野山參中的人參總皂苷和總多糖含量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)野山參中二者含量均較高，但不同年限野山參中二者的含量無(wú)顯著規(guī)律。由于野山參為自然生長(zhǎng)在深山中的人參，并未經(jīng)過(guò)任何人工干預(yù)，不同年限的野山參的樣品采集很難集中在某一固定區(qū)域，導(dǎo)致不同年限野山參生長(zhǎng)環(huán)境也不盡相同，可能對(duì)二者的含量有一定影響，同時(shí)還應(yīng)增加野山參樣品量，避免檢測(cè)數(shù)據(jù)存在個(gè)體差異，確保測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確、穩(wěn)定、可靠。此外，本次測(cè)定未進(jìn)行多區(qū)域平行樣本的采集及測(cè)定，不同地域、不同環(huán)境生長(zhǎng)的野山參質(zhì)量、品質(zhì)以及內(nèi)在成分的含量也會(huì)略有不同，可能會(huì)有未知因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，在進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)研究時(shí)，應(yīng)進(jìn)行多個(gè)地域野山參平行樣本的采集及測(cè)定，使測(cè)定結(jié)果具代表性。

本文對(duì)于野山參中人參總皂苷及總多糖的測(cè)定僅僅是初步探索，還需進(jìn)一步的研究和完善。在樣品采集時(shí)應(yīng)盡可能均勻，盡可能在同一區(qū)域進(jìn)行不同年生樣品的采樣。實(shí)驗(yàn)還需進(jìn)行多地域平行樣本的采集，對(duì)野山參的質(zhì)量和品質(zhì)進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。本文未對(duì)18年以上的野山參進(jìn)行測(cè)定，應(yīng)覆蓋更廣的野山參生長(zhǎng)年限，探索不同年限野山參中二者含量的內(nèi)在規(guī)律。本文僅對(duì)野山參中的人參總皂苷進(jìn)行測(cè)定，未對(duì)人參單體皂苷成分進(jìn)行研究，可對(duì)不同年限野山參中單體皂苷含量進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)一步完善和豐富野山參的有效成分基礎(chǔ)研究工作，為野山參的藥理研究、質(zhì)量評(píng)價(jià)和質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。