常見肉制品中瘦肉精含量的快速檢測

摘要：本次實驗主要以克倫特羅為研究對象，用膠體金免疫層析法對市場上比較常見的肉制品進行克倫特羅含量的快速檢測，根據(jù)檢測結(jié)果互相對比來評估市售膠體金檢測卡的性能質(zhì)量，對它們的重復性、穩(wěn)定性、假陽性率、假陰性率等進行評價。

關鍵詞：克倫特羅;膠體金免疫層析法;快速檢測;質(zhì)量評估

克倫特羅于1964年在美國初次面世，而是一種人工合成的β2腎上腺素受體激動劑，作為一種呼吸系統(tǒng)藥物臨床用于治療哮喘。在20世紀80年代初，美國一家公司無意間發(fā)現(xiàn)當家禽攝取克倫特羅高出臨床5-10倍的用量時，能促進動物生長，強健肌肉，可顯著提高瘦肉率，于是盛行一時，被大量用作畜禽的促生長劑和飼料添加劑。但是人們很快發(fā)現(xiàn)，克倫特羅對人體有害。當人類大量或長期食用克倫特羅殘留超標的肉制品后，會出現(xiàn)頭發(fā)暈、心慌、四肢出現(xiàn)發(fā)麻、肌肉出現(xiàn)震顫等中毒癥狀，嚴重的會出現(xiàn)心臟驟停、昏迷甚至死亡。

目前，“瘦肉精”類藥物國家標準檢測方法主要包括氣相色譜-質(zhì)譜法（GC-MS）、高效液相色譜法（HPLC）、毛細管區(qū)帶電泳法（CE）和免疫分析法等。其中GC-MS法能夠在多種殘留物同時存在的情況下對某一種特定的殘留物進行定量檢測，且檢測靈敏度高、假陽性率低，被國家認定為檢測克倫特羅的確證性方法。但是這種方法也有一定的局限性，需要花費大量的時間處理樣品、檢測過程比較繁瑣且需要專業(yè)技術人員操作實驗儀器，不利于現(xiàn)場快速檢測。毛細管區(qū)帶電泳法（CE）重復性好、上樣量極少、操作簡單，能夠快速批量分離和分析離子化樣品，但該方法檢測時間長，儀器復雜，需要配套的儀器才可以檢測，現(xiàn)階段使用范圍不廣。膠體金免疫試紙條技術應用于檢測克倫特羅殘留量方面，耗時短，操作簡單，產(chǎn)品價廉，可以快速的檢測樣品。

1 材料與方法

1.1實驗材料

1.2克倫特羅含量的檢測

用電子天平準確稱取1g豬肝，用潔凈的剪刀將豬肝剪成碎塊，放入手動玻璃勻漿器中，加入2mL提取液，充分勻漿后，13000rmp離心4min，取上清;再加入2mL提取液，二次提取，13000rmp離心4min，合并兩次上清，用NaOH溶液調(diào)節(jié)PH至7.0，13000rmp離心4min，取上清液待檢。

待檢樣品準備好后，將膠體金檢測卡從包裝袋中取出，用記號筆分別為檢測卡編號。將檢測卡編號后，擺放于實驗臺面上，用微量移液槍吸取待檢上清液80uL加入益穗環(huán)保檢測卡S孔內(nèi)，5分鐘讀取實驗結(jié)果。用微量移液槍吸取待檢上清液100uL加入浩譜爾檢測卡和艾維德檢測卡S孔內(nèi)，10分鐘讀取實驗結(jié)果。

1.3 試紙條穩(wěn)定性測試

提前6個小時將三個公司的膠體金檢測卡分別在美的冰箱和數(shù)顯鼓風干燥箱各放入四張，并將數(shù)顯鼓風干燥箱溫度設置為37℃。待檢樣品準備好后也分別放入冰箱和烘箱內(nèi)一段時間，等待測樣品升溫至環(huán)境溫度時，將檢測卡取出，迅速編號，編號見表2.2。編號后，擺放于實驗臺面上，用微量移液槍吸取待檢上清液80uL加入益穗環(huán)保檢測卡S孔內(nèi)，5分鐘讀取實驗結(jié)果。用微量移液槍吸取待檢上清液100uL加入浩譜爾檢測卡和艾維德檢測卡S孔內(nèi)，10分鐘讀取實驗結(jié)果。

2 結(jié)果

通過實驗結(jié)果顯示武漢市大花嶺菜市場購買的豬肉、豬肝不含有克倫特羅;雙匯集團生產(chǎn)的雙匯肉花腸中也不曾檢測出克倫特羅。三種檢測卡的靈敏度都為3ug/kg（ppb），且都不曾檢測出陽性樣品，但也不能保證此次檢測的樣品中絕對不含克倫特羅，因為膠體金檢測卡只能定性分析，作為初次篩選的憑證，可能會存在假陰性樣品，對有疑問的樣品還需用氣相色譜-質(zhì)譜法進行確證。

益穗環(huán)保、浩譜爾、艾維德這三家生產(chǎn)克倫特羅膠體金檢測卡的公司生產(chǎn)的產(chǎn)品品質(zhì)穩(wěn)定，且抗逆性比較不錯，能在較為惡劣的環(huán)境溫度下正常使用。不同公司生產(chǎn)的膠體金檢測卡質(zhì)量參差不齊，在檢測時，檢測線和質(zhì)控線顯色的先后順序不同，益穗環(huán)保公司生產(chǎn)的膠體金檢測卡先顯C線再顯T線，而浩譜爾公司和艾維德公司生產(chǎn)的膠體金檢測卡先顯T線再顯C線。根據(jù)競爭抑制法原理，應是檢測線T線先顯色，然后質(zhì)控線C線才顯色。

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作者簡介：

韓端丹（1980-）女，研究方向：生物技術與生物制藥