不同品牌火腿腸中金黃色葡萄球菌的分離鑒定及耐藥性分析

陳蕊　趙克麗　雷佳麗　周利沙　周毅　林松　常向彩

摘 要：本文采用鑒別培養(yǎng)基、十六種葡萄球菌生化鑒定管、藥物敏感性試驗等方法，對七種不同品牌火腿腸中的金黃色葡萄球菌進行了分離鑒定和耐藥性分析，并通過PetrifilmTM測試片法對樣品中存在的金黃色葡萄球菌含量進行測定。試驗結果顯示，分離得到的金黃色葡萄球菌對克林霉素、呋喃唑酮、多粘霉素 B、萬古菌素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、麥迪霉素、米諾環(huán)素、多西環(huán)素、四環(huán)素、新霉素等12種抗生素具有較高的敏感性，而對氯霉素、復方新諾明、紅霉素等3種抗生素耐藥。本研究可對金黃色葡萄球菌中毒后的臨床合理用藥和保障火腿腸等肉制品的食品安全提供一定的參考。

關鍵詞：金黃色葡萄球菌;分離培養(yǎng);生化鑒定;耐藥性

火腿腸是人們生活中日常食品 [1]。有風險評估研究表明，火腿腸等肉制品從原料生產(chǎn)到消費者攝食過程中，被金黃色葡萄球菌及其腸毒素感染的概率都相對較高[2，3]，在中國，由金黃色葡萄球菌引起的食物中毒事件的報道屢有發(fā)生，僅次于副溶血性弧菌和變形桿菌，居第三位[4]。因此，火腿腸中加強金黃色葡萄球菌等病原微生物的檢測就顯得尤為重要。

1 材料與方法

1.1 試劑與設備

七種不同品牌種類的火腿腸購于安順市某大型超市，均在保質(zhì)期內(nèi)。

7.5%的氯化鈉肉湯培養(yǎng)基、Baird-Parker瓊脂培養(yǎng)基、血瓊脂平板培養(yǎng)基、十六種葡萄球菌生化鑒定管、PetrifilmTM測試片、革蘭氏染液、30種成套藥敏紙片、香柏油、75%的酒精，以上試劑均購于安順開發(fā)區(qū)沃凱化玻公司。

DNA223B型電子分析天平（南京佰尼塔科技儀器有限公司，中國）、超凈工作臺（天津市泰斯特儀器有限公司，中國）、恒溫培養(yǎng)箱（太倉市華美生化儀器公司，中國）、鼓風干燥箱（上海市博訊實業(yè)公司，中國）、立式壓力蒸汽滅菌鍋（上海市申安醫(yī)療器械廠，中國）、雙三目顯微鏡（上海市締倫光學儀器有限公司，中國）。

1.2 實驗方法

1.2.1 增菌與分離培養(yǎng)

在超凈臺中對7個待測樣品各取25 g并依次編號，37 ℃培養(yǎng)18～24 h，進行預增菌[5，6]。待增菌液呈渾濁生長后，分別劃線接種于Baird-Parke平板和血平板上，放置在37 ℃左右恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～48 h，觀察菌落特征和是否出現(xiàn)β-溶血[7-9]。挑取血平板上的典型菌落于7.5%氯化鈉肉湯培養(yǎng)基進行純培養(yǎng)后，再次接種于血平板。

1.2.2 細菌鑒定與藥敏試驗

在無菌操作下，挑取Baird-Parke平板和血平板上的典型菌落進行涂片，革蘭染色后鏡檢。挑取血平板上的典型菌落接種于生化鑒定管中[10-11]，恒溫培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)18～24 h。將純培養(yǎng)后的菌液均勻涂布于Baird-Parke平板上，于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h[12-14]。

1.2.3 PetrifilmTM測試片法

將樣品原液進行梯度稀釋，取稀釋后的樣品液均勻滴加至PetrifilmTM測試片中，于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18～24 h[15-16]。

2 結果與分析

2.1 金黃色葡萄球菌的分離培養(yǎng)

接種培養(yǎng)23 h后，在血平板上的菌落特征一致且表現(xiàn)為圓形，白色凸起，有β-溶血。接種培養(yǎng)36 h后，在Baird-Parke平板的菌落表現(xiàn)為圓形，表面柔滑，挑取時呈黏稠狀，顏色為灰黑色，凸起邊緣圍繞著乳灰色圈。兩種平板上的菌落特征與GB 4789.10-2016《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗金黃色葡萄球菌檢驗》中所描述的金黃色葡萄球菌的菌落形態(tài)一致，可初步推測該菌為金黃色葡萄球菌。

2.2 金黃色葡萄球菌的鏡檢

革蘭氏染色鏡檢結果顯示，細菌排列整齊，堆積在一起，呈葡萄串狀排列，與金黃色葡萄球菌在顯微鏡下的特點一致[17]?？沙醪脚袛嗥叻N不同品牌的火腿腸都含有金黃色葡萄球菌。鏡檢結果如圖1所示。

2.3 金黃色葡萄球菌的生化鑒定

用接種針將金黃色葡萄球菌的疑似菌落分別接種于16種生化鑒定管中，經(jīng)37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)23 h后，該菌能夠分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖，并且產(chǎn)酸不產(chǎn)氣、V-P試驗、精氨酸雙水解酶試驗呈陽性。

2.4 耐藥性分析

將培養(yǎng)皿置于37 ℃溫箱中培養(yǎng)24 h

后，分離得到的金黃色葡萄球菌對克林霉素、呋喃唑酮、多粘霉素 B、萬古菌素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、麥迪霉素、米諾環(huán)素、多西環(huán)素、四環(huán)素、新霉素等12種抗生素具有較高的敏感性，而對氯霉素、復方新諾明、紅霉素等3種抗生素耐藥（見表1）。

2.5 待測樣品中金黃色葡萄球菌的含量

經(jīng)檢測，統(tǒng)計PetrifilmTM金黃色葡萄球菌測試結果顯示，金黃色葡萄球菌最適稀釋濃度為10倍，所采集的七種樣本中均含有金黃色葡萄球菌，1-7號樣品中菌落數(shù)量分別為620 CFU/g、560 CFU/g、1 190 CFU/g、480 CFU/g、870 CFU/g、2 850 CFU/g、3 040 CFU/g。

3 結論

本文通過鑒別培養(yǎng)基、革蘭氏染色鏡檢和生化鑒定等方法對七種樣品中疑似金葡菌進行了鑒定，結果顯示，七種樣品中的疑似菌均為金黃色葡萄球菌，耐藥性試驗結果顯示，樣品中分離得到的金黃色葡萄球菌對克林霉素、呋喃唑酮、多粘霉素 B、萬古菌素、環(huán)丙沙星、氧氟沙星、諾氟沙星、麥迪霉素、米諾環(huán)素、多西環(huán)素、四環(huán)素、新霉素等12種抗生素具有較高的敏感性，而對氯霉素、復方新諾明、紅霉素等3種抗生素耐藥。因此，在臨床上如遇到由金黃色葡萄球菌所引起的食源性疾病，應減少對紅霉素、復方新諾明、氯霉素等3種抗生素的使用，而應該盡量使用金黃色葡萄球菌對其敏感的抗生素，如慶大霉素、苯唑西林等12種抗生素。本研究對金黃色葡萄球菌中毒后的臨床合理用藥和保障火腿腸等肉制品的食品安全提供一定的參考。

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