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      食品中大腸桿菌生物檢測方法探討

      2019-10-21 21:58:02林庭庭周廣紅
      食品安全導(dǎo)刊·下旬刊 2019年4期
      關(guān)鍵詞:大腸桿菌檢測方法分子

      林庭庭 周廣紅

      摘 要:大腸桿菌是寄生在人和動物腸道中的正常菌群,也是國際公認(rèn)的食品安全指標(biāo)菌類。一旦食物中出現(xiàn)了大腸桿菌,就說明該食物直接或者間接地接觸過糞便,并且已經(jīng)被糞便污染。沾染上大腸桿菌的食物是絕對不能入口的,近幾年食品安全事故頻頻發(fā)生,其中一部分就是大腸桿菌致病甚至致死的事例。所以,要想保證人民的食品安全首先應(yīng)該從大腸桿菌的檢測和控制入手。

      關(guān)鍵詞:大腸桿菌;檢測方法;生物檢測;分子;傳感器

      1 免疫檢測技術(shù)

      1.1 免疫膠體金試紙檢測法

      該種檢測方法主要是利用抗原抗體的免疫標(biāo)記技術(shù)來實現(xiàn)對大腸桿菌的檢測。首先,免疫膠體金層是把硝酸纖維素膜作為載體,將樣品滴入微孔之后,通過毛細(xì)作用,利用膠體金顏色反應(yīng),再觀察膠體金顏色,就可以看出該樣品是否已經(jīng)被大腸桿菌污染。這種檢測方法成本比較低,速度也很快,但是有一個缺點是容易出現(xiàn)差錯[1]。

      1.2 免疫熒光法

      免疫熒光法,顧名思義是利用熒光物質(zhì)來體現(xiàn)大腸桿菌感染的位置所在。將蛋白A涂在磁珠表面作為觀察平臺,這些蛋白特異性地與Ab結(jié)合??梢允褂卯惲蚯杷釤晒馑貥?biāo)記,在Ab形成固定化的時候,在顯微鏡下可以觀察到熒光物質(zhì)。這種方法靈敏度比較高[2]。

      1.3 電化學(xué)免疫傳感器檢測法

      這種檢測技術(shù)主要是利用高靈敏度的電化學(xué)傳感器,這種方法穩(wěn)定性高,檢測起來也比較節(jié)省時間。在特定的培養(yǎng)液中培養(yǎng)大腸桿菌,電極能在該培養(yǎng)液中形成一個特殊結(jié)構(gòu),然后在雙氧水的檢測底液中顯示出強(qiáng)電流。人們可以通過電流的強(qiáng)弱來判定大腸桿菌的多少。

      2 分子生物學(xué)檢測技術(shù)

      2.1 常規(guī)PCR

      PCR技術(shù)可以在短時間內(nèi)對特定的DNA序列進(jìn)行大量擴(kuò)增。這種檢測技術(shù)靈敏度比較高,也是現(xiàn)在被廣泛使用的一種檢測技術(shù),但是這一檢測技術(shù)容易出現(xiàn)假陽性的錯誤判定。只有對大腸桿菌基因之間的序列進(jìn)行重新設(shè)計,改進(jìn)檢測方法才能避免這一現(xiàn)象。

      2.2 實時熒光定量PCR

      實時熒光定量PCR就是在化學(xué)反應(yīng)中加入特定的熒光物質(zhì),這樣不但可以對大腸桿菌進(jìn)行監(jiān)測,還可以對其擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行跟蹤。實時熒光定量PCR比常規(guī)PCR更加靈敏,也更加準(zhǔn)確,現(xiàn)在使用較廣泛的是染料法熒光定量PCR和探針法熒光定量PCR。

      2.3 多重PCR

      多重PCR可以檢測到更多的目標(biāo)菌和基因,也就是說在同一反應(yīng)中加入特異性引導(dǎo)物,就可以檢測出多種DNA。這種方法不但節(jié)約了時間,還將復(fù)雜的檢測操作變得簡便,幫助提高了檢測效率[3]。但是這種方法也飽受爭議,因為引導(dǎo)物是否存在互相影響和干擾的問題是不得而知的。

      2.4 基因芯片

      基因芯片技術(shù)是實時熒光定量PCR的一種擴(kuò)展檢測方法,該技術(shù)是將含有待測樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光標(biāo)記探針與芯片結(jié)合起來,然后通過掃描儀分析芯片上熒光標(biāo)記分布的狀態(tài)。這種檢測方法的優(yōu)點是準(zhǔn)確度較高,風(fēng)險較小。

      3 紅外光譜技術(shù)

      紅外光譜技術(shù)主要是依靠紅外光譜技術(shù)來甄別微生物及其生物大分子的結(jié)構(gòu),再由此得出微生物的種類和狀態(tài)信息。這種鑒別技術(shù)可以快速地檢測出食品中的大腸桿菌。

      4 傳感器技術(shù)

      傳感器技術(shù)可以將物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)變?yōu)殡娮有盘枺@是一種電子化學(xué)工程的實用科技,主要將電化學(xué)和生物科學(xué)結(jié)合在一起,有科學(xué)家發(fā)明了一種采用電化學(xué)阻扛譜技術(shù)的生物傳感器,通過石英晶體金電極表面附著的蛋白A膜來固定抗體,從而檢測出待測物體中是否存在著大腸桿菌以及存在數(shù)量。

      5 結(jié)語

      現(xiàn)階段,檢測大腸桿菌的技術(shù)手段隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展也得到了飛速發(fā)展。更多的先進(jìn)技術(shù)和先進(jìn)設(shè)備被開發(fā)用以檢測大腸桿菌。同時,各部門更加關(guān)注食品安全問題,這也給擴(kuò)展大腸桿菌的檢測手段提供了一個便利條件。雖然目前我國應(yīng)用的大腸桿菌檢測方法還是較傳統(tǒng)的檢測方法,它存在著很多不足之處,比如準(zhǔn)確率有限、效率不高等,但是隨著各種新技術(shù)的不斷開發(fā),電化學(xué)技術(shù)、生物工程技術(shù)等都被引入大腸桿菌的檢測當(dāng)中,這大大提高了大腸桿菌檢測的效率。

      參考文獻(xiàn)

      [1]郝江燕,胡文忠,馮敘橋,等.食品中大腸桿菌生物檢測方法的研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)科技,2013,34(15):

      370-375.

      [2]葉青,史明坤,劉波,等.河北省大腸桿菌 O157∶H7 病原學(xué)和流行病學(xué)研究[J].中國公共衛(wèi)生,2000,16

      (7):613-614.

      [3]劉慧玲,呂敬章,朱智壕,等.生物傳感器檢測食源性大腸桿菌O157∶H7

      研究新進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報,

      2013,4(6):1828-1834.

      作者簡介:林庭庭(1990—),女,福建惠安人,本科,包材組副經(jīng)理。研究方向:食品中大腸桿菌,食品接觸材料。

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