食品中大腸桿菌生物檢測方法探討

林庭庭　周廣紅

摘 要：大腸桿菌是寄生在人和動物腸道中的正常菌群，也是國際公認(rèn)的食品安全指標(biāo)菌類。一旦食物中出現(xiàn)了大腸桿菌，就說明該食物直接或者間接地接觸過糞便，并且已經(jīng)被糞便污染。沾染上大腸桿菌的食物是絕對不能入口的，近幾年食品安全事故頻頻發(fā)生，其中一部分就是大腸桿菌致病甚至致死的事例。所以，要想保證人民的食品安全首先應(yīng)該從大腸桿菌的檢測和控制入手。

關(guān)鍵詞：大腸桿菌;檢測方法;生物檢測;分子;傳感器

1 免疫檢測技術(shù)

1.1 免疫膠體金試紙檢測法

該種檢測方法主要是利用抗原抗體的免疫標(biāo)記技術(shù)來實現(xiàn)對大腸桿菌的檢測。首先，免疫膠體金層是把硝酸纖維素膜作為載體，將樣品滴入微孔之后，通過毛細(xì)作用，利用膠體金顏色反應(yīng)，再觀察膠體金顏色，就可以看出該樣品是否已經(jīng)被大腸桿菌污染。這種檢測方法成本比較低，速度也很快，但是有一個缺點是容易出現(xiàn)差錯[1]。

1.2 免疫熒光法

免疫熒光法，顧名思義是利用熒光物質(zhì)來體現(xiàn)大腸桿菌感染的位置所在。將蛋白A涂在磁珠表面作為觀察平臺，這些蛋白特異性地與Ab結(jié)合?？梢允褂卯惲蚯杷釤晒馑貥?biāo)記，在Ab形成固定化的時候，在顯微鏡下可以觀察到熒光物質(zhì)。這種方法靈敏度比較高[2]。

1.3 電化學(xué)免疫傳感器檢測法

這種檢測技術(shù)主要是利用高靈敏度的電化學(xué)傳感器，這種方法穩(wěn)定性高，檢測起來也比較節(jié)省時間。在特定的培養(yǎng)液中培養(yǎng)大腸桿菌，電極能在該培養(yǎng)液中形成一個特殊結(jié)構(gòu)，然后在雙氧水的檢測底液中顯示出強(qiáng)電流。人們可以通過電流的強(qiáng)弱來判定大腸桿菌的多少。

2 分子生物學(xué)檢測技術(shù)

2.1 常規(guī)PCR

PCR技術(shù)可以在短時間內(nèi)對特定的DNA序列進(jìn)行大量擴(kuò)增。這種檢測技術(shù)靈敏度比較高，也是現(xiàn)在被廣泛使用的一種檢測技術(shù)，但是這一檢測技術(shù)容易出現(xiàn)假陽性的錯誤判定。只有對大腸桿菌基因之間的序列進(jìn)行重新設(shè)計，改進(jìn)檢測方法才能避免這一現(xiàn)象。

2.2 實時熒光定量PCR

實時熒光定量PCR就是在化學(xué)反應(yīng)中加入特定的熒光物質(zhì)，這樣不但可以對大腸桿菌進(jìn)行監(jiān)測，還可以對其擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行跟蹤。實時熒光定量PCR比常規(guī)PCR更加靈敏，也更加準(zhǔn)確，現(xiàn)在使用較廣泛的是染料法熒光定量PCR和探針法熒光定量PCR。

2.3 多重PCR

多重PCR可以檢測到更多的目標(biāo)菌和基因，也就是說在同一反應(yīng)中加入特異性引導(dǎo)物，就可以檢測出多種DNA。這種方法不但節(jié)約了時間，還將復(fù)雜的檢測操作變得簡便，幫助提高了檢測效率[3]。但是這種方法也飽受爭議，因為引導(dǎo)物是否存在互相影響和干擾的問題是不得而知的。

2.4 基因芯片

基因芯片技術(shù)是實時熒光定量PCR的一種擴(kuò)展檢測方法，該技術(shù)是將含有待測樣品PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光標(biāo)記探針與芯片結(jié)合起來，然后通過掃描儀分析芯片上熒光標(biāo)記分布的狀態(tài)。這種檢測方法的優(yōu)點是準(zhǔn)確度較高，風(fēng)險較小。

3 紅外光譜技術(shù)

紅外光譜技術(shù)主要是依靠紅外光譜技術(shù)來甄別微生物及其生物大分子的結(jié)構(gòu)，再由此得出微生物的種類和狀態(tài)信息。這種鑒別技術(shù)可以快速地檢測出食品中的大腸桿菌。

4 傳感器技術(shù)

傳感器技術(shù)可以將物質(zhì)的濃度轉(zhuǎn)變?yōu)殡娮有盘枺@是一種電子化學(xué)工程的實用科技，主要將電化學(xué)和生物科學(xué)結(jié)合在一起，有科學(xué)家發(fā)明了一種采用電化學(xué)阻扛譜技術(shù)的生物傳感器，通過石英晶體金電極表面附著的蛋白A膜來固定抗體，從而檢測出待測物體中是否存在著大腸桿菌以及存在數(shù)量。

5 結(jié)語

現(xiàn)階段，檢測大腸桿菌的技術(shù)手段隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展也得到了飛速發(fā)展。更多的先進(jìn)技術(shù)和先進(jìn)設(shè)備被開發(fā)用以檢測大腸桿菌。同時，各部門更加關(guān)注食品安全問題，這也給擴(kuò)展大腸桿菌的檢測手段提供了一個便利條件。雖然目前我國應(yīng)用的大腸桿菌檢測方法還是較傳統(tǒng)的檢測方法，它存在著很多不足之處，比如準(zhǔn)確率有限、效率不高等，但是隨著各種新技術(shù)的不斷開發(fā)，電化學(xué)技術(shù)、生物工程技術(shù)等都被引入大腸桿菌的檢測當(dāng)中，這大大提高了大腸桿菌檢測的效率。

參考文獻(xiàn)

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[3]劉慧玲，呂敬章，朱智壕，等.生物傳感器檢測食源性大腸桿菌O157∶H7

研究新進(jìn)展[J].食品安全質(zhì)量檢測學(xué)報，

2013，4（6）：1828-1834.

作者簡介：林庭庭（1990—），女，福建惠安人，本科，包材組副經(jīng)理。研究方向：食品中大腸桿菌，食品接觸材料。