雙藥聯(lián)合化療對耐藥性胃癌細胞的協(xié)同干預(yù)研究

李科

摘?要：目的：探索鹽酸阿霉素（DOX）和多西他賽（DOC）對于耐藥性胃癌細胞的協(xié)同干預(yù)效果。方法：通過MTT法檢測DOX和DOC在人胃癌細胞SGC-7901及其多藥耐藥株SGC-7901 ADR的IC50值，根據(jù)IC50值設(shè)置不同的雙藥配比，并利用CompuSyn軟件計算協(xié)同指數(shù)，以判斷雙藥是否具有協(xié)同效果。結(jié)果：耐藥性胃癌細胞SGC-7901 ADR 對DOX和DOC均有較強的耐藥性，相比之下，SGC-7901細胞對兩種藥物的敏感性較強。雙藥聯(lián)合使用可大大提高抑制效果。半數(shù)抑制效果下，雙藥聯(lián)合中的DOX劑量減少為單藥干預(yù)的1/10以下，DOC劑量也有一定程度的減少。而DOX和DOC比例為1∶8、1∶12和1∶16時表現(xiàn)出非常明顯的協(xié)同效果。結(jié)論 DOX和DOC聯(lián)合干預(yù)可有效抑制耐藥性胃癌細胞的增殖?？蔀檫M一步開發(fā)耐藥性胃癌治療的新方法提供理論依據(jù)。

關(guān)鍵詞：耐藥性胃癌;聯(lián)合化療;鹽酸阿霉素;多西他賽

1 研究背景

胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，預(yù)后較差，死亡率高居前列。化療是早期胃癌和手術(shù)后聯(lián)合治療的首選。但其對正常細胞也有損傷，毒副作用大。另外，隨著化療的進行，胃癌會產(chǎn)生多藥耐藥性。耐藥性的出現(xiàn)直接導(dǎo)致效果降低，造成治療失敗及腫瘤復(fù)發(fā)。因此，尋求更為有效的化療方案，提高治療效果就具有非常重要的臨床意義。

聯(lián)合化療通過發(fā)揮藥物協(xié)同作用來提高療效，減少耐藥的發(fā)生;減少劑量從而降低毒副作用。臨床上對于聯(lián)合化療的使用效果在多年前已得到了研究證實，臨床上聯(lián)合化療已經(jīng)逐漸替代單藥化療。本研究通過將兩種經(jīng)典抗腫瘤藥物——鹽酸阿霉素和多西他賽進行組合，用于干預(yù)多藥耐藥性胃癌細胞SGC-7901 ADR，探索更為有效的用藥配比。

2 研究方法

2.1 材料

DOX、DOC、MTT均購自上海阿拉丁生化科技股份有限公司。DMEM高糖培養(yǎng)基購自hyclone公司。胎牛血清（FBS）購買于杭州四季青生物工程系有限公司。人胃癌細胞SGC-7901及其多藥耐藥株SGC-7901 ADR由空軍軍醫(yī)大學(xué)提供。

2.2 MTT法檢測DOX和DOC對細胞增殖抑制效果

將SGC-7901及SGC-7901 ADR細胞在37℃，5%CO2條件下進行培養(yǎng)。再以5000細胞/孔的密度鋪96孔板內(nèi)，加入含有不同濃度梯度的DOX或DOC，培養(yǎng)96h后去除孔內(nèi)的培養(yǎng)基，每孔加入200μL含有濃度為100ng/mL MTT的完全培養(yǎng)基，培養(yǎng)4 h后去除培養(yǎng)基，每孔加入100μL DMSO，震蕩10min后利用酶標(biāo)儀測定每孔在495nm處的吸光值。根據(jù)所得數(shù)據(jù)計算藥物的IC50值。

2.3 檢測DOX和DOC對多藥耐藥性細胞的聯(lián)合干預(yù)效果

選用細胞為SGC-7901ADR，根據(jù)IC50值設(shè)置DOX和DOC的藥物濃度。DOX與DOC的摩爾比例為4∶1至1∶20，測算不同配比下的抑制率，應(yīng)用CompuSyn軟件計算聯(lián)合作用指數(shù)（combined index，CI），其中CI<1為協(xié)同作用，CI=1為相加作用，CI>1為拮抗作用。

3 結(jié)果

3.1 DOX與DOC對SGC-7901及SGC-7901ADR細胞的抑制效果

兩種藥物針對兩種細胞均顯示出了抑制效果。SGC-7901ADR細胞方面，DOX的IC50值為797nM，DOC的IC50值則為924nM。兩種藥物在野生型SGC-7901細胞的IC50值則非常小，DOX為88nM，DOC為107nM。該結(jié)果表明SGC-7901ADR細胞對兩種藥物的耐受程度遠遠高于野生型SGC-7901細胞。

3.2 DOX與DOC對SGC-7901ADR細胞的聯(lián)合干預(yù)效果

當(dāng)兩種藥物聯(lián)合使用后，對SGC-7901ADR細胞同等抑制率下劑量有顯著的降低。DOC在有效的聯(lián)合干預(yù)中占比雖然較高，但依然比單獨干預(yù)中有明顯的劑量降低。而DOX則顯示出非常明顯的降低，在低于1∶8的比例之后，其劑量降低僅有單用的1/10，甚至更低。CI值反映出兩種藥物具有非常好的協(xié)同作用。當(dāng)比例為1∶8、1∶12和1∶16時，其CI指數(shù)均小于1。結(jié)果表明此兩種藥物通過所試比例進行雙藥聯(lián)合干預(yù)，可有效抑制多藥耐藥性胃癌細胞SGC-7901ADR的增殖。

4 討論

胃癌的耐藥性是影響化療效果的主要因素之一。原因在于其發(fā)生發(fā)展是一個非常復(fù)雜的過程，具有因素多，途徑多等特點，當(dāng)腫瘤細胞長期暴露于某一種藥物之下，則會通過不同機制和通路對該藥物產(chǎn)生作用，降低其對細胞的損害。如果將兩種或多種具有不同機理的藥物聯(lián)合使用，則有可能起到協(xié)同增效的作用。本研究發(fā)現(xiàn)將兩種經(jīng)典的抗腫瘤藥物——DOX和DOC聯(lián)合使用后，可有效降低藥物的有效劑量，提高抑制效果。表明兩種藥物在所試比例和劑量下可有效抑制多藥耐藥性胃癌的發(fā)生和發(fā)展。該研究結(jié)果可為日后的胃癌臨床化療提供有效的參考。

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