不同水平三酰甘油對血紅蛋白測定的影響及3種校正方法的研究*

歐財文，林馥嘉，周海濤，林海標，吳曉賓，鄭智明，柯培鋒

(廣州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院檢驗醫(yī)學部，廣東廣州 510120)

血紅蛋白(Hb)是全血細胞分析中的一項主要檢測指標，與其相關參數(shù)平均紅細胞血紅蛋白(MCH)、平均紅細胞血紅蛋白濃度(MCHC)對疾病的診斷均有較大幫助,因此,準確檢測以上指標顯得十分重要。氰化高鐵血紅蛋測定法(HiCN)為是國際血液學標準化委員會(ICSH)推薦的Hb檢測的首選方法，其原理為將全血樣本進行溶血處理后將Hb轉(zhuǎn)化為衍生物，并通過特定波長下對其吸光度的測定來計算Hb水平[1],但是黃疸、溶血與脂血會導致血漿渾濁,嚴重干擾Hb及其相關指標的檢測結果[2]。近年來,伴隨著高脂飲食和脂肪乳作為臨床常用的腸外營養(yǎng)輸入，使脂血標本出現(xiàn)逐年增加的趨勢[3-4]，而高脂血標本對血常規(guī)等檢驗結果的準確性有著不同程度的影響[5]。我國成年男女血清三酰甘油(TG) 異常的發(fā)生率分別高達13.8% 和8.6%[6]。因此,脂血標本對檢驗項目的干擾應引起足夠的重視。已有研究報道采用血漿置換的方法可明顯消除脂血對全血細胞分析儀結果測定的影響[7]。根據(jù)用于置換的材料種類，可分為生理鹽水置換、儀器稀釋液置換和健康人血漿置換。在臨床工作中前兩種方法較為常用，而健康人血漿置換受配型等條件的限制，一般只用于科研活動中。除此之外，也可根據(jù)臨床工作中較常使用的校正公式對Hb水平進行估算校正。故此，本研究對3種常用的校正方法準確性進行評價,為日常校正方法的選擇提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2017年4—5月廣東省中醫(yī)院體檢中心的體檢健康者80例，控制男女比例大致相等，年齡18～60歲，平均(30.5±6.9)歲。納入標準：(1)所有體檢健康者無器質(zhì)性疾?。?2)所有受試對象同一時間抽血所得標本檢測的各項生化與血常規(guī)指標均在正常參考范圍之內(nèi)，其中TG<1.70 mmol/L,Hb 120～170 g/L。排除標準：(1)經(jīng)診斷為疾病者；(2)血液標本存在黃疸、溶血、脂血等情況者。

1.2儀器與試劑 深圳邁瑞公司生產(chǎn)的Mindary BC-6800全血細胞分析儀、Roche Modular PPI全自動生化分析儀、TD24-WS臺式離心機，其中標本稀釋液、清洗液及溶血劑等均是儀器廠家原裝配套試劑，質(zhì)控品及校準品由廠家提供。中長鏈脂肪乳注射液(C8～24)250 mL由廣州百特僑光醫(yī)療用品有限公司提供，注射用生理鹽水由江西潤澤藥業(yè)有限公司提供，Mindary BC-6800全血細胞分析儀所配套的M-68DS稀釋液。

1.3方法

1.3.1人工脂血標本的配置與全血細胞計數(shù)(CBC)分析 測定的標本均用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管，靜脈采血2 mL，要求所有標本均無溶血、凝集等。混勻，進行全血細胞分析后，以轉(zhuǎn)速800 r/min低速離心10 min[8]，使血液中紅細胞(RBC)、白細胞(WBC)和血小板(PLT)與血漿分離，按表1配制不同TG水平的脂血標本，顛倒混勻8次以上，用相同方法進行CBC分析；分析后的標本以800 r/min再次離心10 min，在Roche Modular PPI全自動生化儀上對TG水平進行測定。所用的儀器在測試前進行室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測，各項指標在控后進行標本測定，記錄數(shù)據(jù)。

表1 不同TG人工脂血標本的配置

1.3.2不同Hb水平受TG的干擾程度的差別 將全血樣本按Hb分為120～<130、130～<140、140～<150、150～<160、160～<170 g/L 5組，每組16例，按照《廣東省中醫(yī)院血液檢測操作規(guī)程》的流程檢測加脂前后每組標本的Hb、MCH和MCHC的結果，并對每組加脂前后的Hb、MCH 和MCHC 參數(shù)結果進行差異顯著性分析，同時計算出差異百分率并進行比較。

1.3.3等量置換測定 將上述已測定TG水平的標本小心顛倒混勻8次以上，均分為兩份，以800 r/min離心10 min后吸掉上層渾濁血漿部分，一管用等量生理鹽水進行置換(生理鹽水置換組)，另一管用等量儀器配套稀釋液進行置換(稀釋液置換組)，混勻后分別再次進行CBC分析，記錄數(shù)據(jù)。

1.3.4估算公式校正 根據(jù)《廣東省中醫(yī)院血液檢測操作規(guī)程》文件所列Hb估算公式進行校正。

Hb修正值=Hb修正前-(Hb脂血血漿-Hb脂血血漿×HCT修正前)，其中“Hb脂血血漿×HCT修正前”為RBC所占比例部分；MCH修正值=Hb修正值/RBC修正前；MCHC修正值=Hb修正值/HCT修正前，Hb脂血血漿由前一步驟收集所置換的渾濁血漿進行CBC計數(shù)得到，計算并記錄結果。

2 結 果

2.1脂血水平對Hb及其相關參數(shù)測定的影響 正常血標本加入不同水平TG后，Hb、MCH和MCHC的測定值增高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。干擾程度由差異百分率表示，差異百分率(%)=(脂血值或校正值-真實值)/真實值×100%。正常血標本隨著加入TG水平增高，Hb、MCH和MCHC的結果差異百分率增高，Hb、MCH和MCHC結果隨著TG水平增高受干擾程度越大，見表3。

表2 不同水平TG對Hb及其相關參數(shù)的影響

續(xù)表2 不同水平TG對Hb及其相關參數(shù)的影響

注：與加脂前比較，*P<0.05

表3 不同TG水平對Hb、MCH、MCHC的干擾程度的差異百分率(%)

2.2不同Hb水平受TG的干擾程度的差別 其中各組加脂前后Hb、MCH、MCHC參數(shù)比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表4。Hb受干擾的程度與Hb 水平呈負相關(r=-0.77，P<0.05)，MCH 受干擾的程度與Hb 水平呈負相關(r=-0.92，P<0.05)。Hb水平越高，受干擾的程度越小，其真實值與加脂后脂血的Hb、MCH的差異百分率，隨著Hb水平增大而減小。MCHC受干擾的程度與Hb 水平呈正相關(r=0.70，P<0.5)，Hb水平越高，受影響的程度越大，見表5。

表4 不同Hb水平組的Hb及相關參數(shù)受TG的影響

注：與加脂前比較，*P<0.05

2.3各組不同校正方法Hb、MCH與MCHC參數(shù)比較 對加脂后Hb結果在140～<160 g/L的每個標本充分混勻后平均分成3份樣本，1份通過生理鹽水置換血漿方法檢測其Hb、MCH和MCHC結果，另1份通過稀釋液置換血漿的方法檢測其Hb、MCH和MCHC結果，最后1份則通過公式估算法計算其Hb、MCH和MCHC結果。經(jīng)統(tǒng)計分析，生理鹽水置換組、稀釋液置換組和公式估算組的Hb、MCH與MCHC參數(shù)測定結果均明顯低于人工脂血組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。生理鹽水置換組Hb、MCH與MCHC測定結果與直接測定組相比較，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；稀釋液置換組與公式估算組除MCHC外，其余參數(shù)與直接測定組比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；生理鹽水置換組、稀釋液置換組和公式估算組之間Hb、MCH與MCHC的結果進行兩兩比較，除MCHC外，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表6。

表5 不同Hb水平組的Hb及相關參數(shù)受TG的干擾程度(%)

表6 3種校正方法Hb、MCH與MCHC參數(shù)比較

注：*與直接測定組相比，P<0.05

3 討 論

本研究利用Mindary BC-6800全血細胞分析儀，以十二烷基磺酸鈉比色法(SLS-Hb)對Hb進行測定。全血細胞分析儀對干擾物質(zhì)的存在較為敏感,易產(chǎn)生系統(tǒng)誤差，如血液中膽紅素水平增高使測定的本底改變及脂血標本中的乳糜微粒(CM)和極低密度脂蛋白(VLDL)等產(chǎn)生的散射光均可影響Hb測量結果的準確性：在高脂蛋白血癥患者標本中,CM和VLDL由大量的TG(CM中的TG占80%～90%，VLDL中的TG占50%～70%)與較少的載脂蛋白(CM中的載脂蛋白占1%，VLDL中的載脂蛋白占5%～7%)組成懸浮顆粒,它們在血漿中以混懸的狀態(tài)存在，造成類似于牛奶中見到的霧狀渾濁,能夠產(chǎn)生較強的散射光，而SLS-Hb法采用光傳導傳輸信號變化，故高脂血可使由Hb比色方法獲得的Hb結果假性升高[9]。MCH和MCHC是基于Hb、HCT和RBC結果計算出的參數(shù)，Hb假性升高時MCH和MCHC也會隨之假性升高。而作為貧血鑒別診斷指標的MCH和MCHC檢測對缺鐵性貧血、巨幼紅細胞性貧血、珠蛋白生成障礙性貧血、溶血性貧血的診斷和鑒別診斷十分重要[10]。

本研究結果表明，當血液中TG>4.14 mmol/L時，加脂后的Hb、MCH和MCHC數(shù)值較加脂前升高，且受干擾的程度隨著TG 水平的增高而增大，這與國內(nèi)外報道一致[11-13],因此,對于脂血液標本的血常規(guī)檢查,相關參數(shù)的校正十分必要。研究者發(fā)現(xiàn)3種校正方法均可對不同程度地消除TG對測量結果的影響，對結果進行校正。但與稀釋液置換法和公式估算法相比，生理鹽水置換法僅可在一定程度上消除TG對Hb及其參數(shù)測定地影響，無法對結果進行準確校正，與正常血標本之間比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。稀釋液置換與公式估算法可對Hb及MCH兩個參數(shù)進行較準確的校正，但無法對MCHC進行校正，從實驗結果可以發(fā)現(xiàn)，MCHC經(jīng)校正后，數(shù)值較正常標本測定結果高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，這與預料的不一致，可能因為MCHC是基于紅細胞平均體積(MCV)、RBC、Hb的數(shù)值計算所得。在對脂濁血漿進行置換時雖然置換的體積相同，但生理鹽水和儀器稀釋液的滲透壓、張力與樣本中血漿有所差別，這樣使得置換之后紅細胞體積變小，即MCV數(shù)值減小，導致了MCHC的計算結果增高。

相對來說，儀器稀釋液置換的校正效果優(yōu)于生理鹽水置換與公式矯正法，因為儀器稀釋液中所添加的表面活性劑以及pH緩沖劑可使血細胞維持在正常的酸堿度與滲透壓環(huán)境中，所以血液樣本中的各細胞組分更加穩(wěn)定，這一點在實驗過程(溶血發(fā)生率)及數(shù)據(jù)分析得出的結論中也有所體現(xiàn)，而同樣作為校正方法之一的公式估算法，則需要收集被置換的上層脂濁血漿進行CBC分析，雖降低了滲透壓差異所造成的細胞體積改變甚至溶血的發(fā)生率，但步驟較為復雜，還應注意在吸取血漿時避免混入少量紅細胞影響校正結果，因此，從操作的簡便性來看，儀器稀釋液置換的校正方法也比較可取。

值得一提的是，在探究不同Hb水平受TG影響程度的過程中，發(fā)現(xiàn)Hb受TG影響的程度與其自身的水平呈負相關(r=-0.77，P<0.05)，即Hb水平越低，受影響的程度越大。這使得在臨床工作中對待貧血患者的標本需慎重處理，尤其是本身營養(yǎng)狀況不佳同時有脂肪乳作為腸外營養(yǎng)輸注情況的住院患者，其Hb水平可能在貧血診斷或分度數(shù)值附近，較低水平TG干擾就會造成Hb假性增高，特別是可能對危急值漏檢，掩蓋病情，延誤醫(yī)生的診療時機甚至造成醫(yī)療事故[14]。因此，建議在日常工作中如發(fā)現(xiàn)此次檢測結果與歷史結果有出入或與臨床診斷與表現(xiàn)不符者，可對標本進行低速離心或自然沉降后觀察上層血漿是否渾濁來判斷是否需要進行置換處理，以得到較準確的檢驗結果。

4 結 論

根據(jù)本研究實驗數(shù)據(jù)結果分析，當血液中TG>4.14 mmol/L時，Hb及其相關參數(shù)會假性增高，需要進行校正，且干擾隨TG水平的增高而增強。通過生理鹽水、儀器稀釋液置換與公式估算可消除高脂血的干擾，并對受干擾結果進行校正。