沈陽地區(qū)高血壓患者CYP3A5基因多態(tài)性與鈣離子通道阻滯劑氨氯地平的相關(guān)性研究

王玉紅，胡曉芳，劉 靜

(北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院檢驗醫(yī)學中心,遼寧沈陽 110016)

高血壓病是一種好發(fā)于中老年人、發(fā)病趨勢日益增高的一種心血管疾病。高血壓是心力衰竭、心肌梗死、慢性腎病、糖尿病等非傳染性疾病的重要危險因素，因此，預防和治療高血壓可使心血管疾病得發(fā)病率、病死率明顯下降[1-2]。 近幾十年來，我國人群高血壓患病率居高不下且呈持續(xù)上升的趨勢。調(diào)查表明，目前我國約有2億高血壓患者，即每10個成年人中就有2人患高血壓，約占全球高血壓人數(shù)的1/5[3]。氨氯地平是目前臨床上高血壓治療的首選藥物，但療效存在明顯的個體差異[4]。根據(jù)國內(nèi)外的研究表明，超過33%的人群服用該藥物療效不達標，且有20%左右的人群服用該藥物產(chǎn)生嚴重不良反應如面部潮紅、腳踝水腫及心悸等導致終止用藥。而國外多項研究證實此種個體化差異與患者的基因多態(tài)性是緊密相關(guān)的[5]。本文通過對沈陽地區(qū)1 182例高血壓患者進行CYP3A5基因多態(tài)性檢測結(jié)果，結(jié)合服用氨氯地平的療效進行數(shù)據(jù)分析，探討CYP3A5基因型對于氨氯地平降壓療效的預測，為今后高血壓患者的個體化診療做出新的嘗試。

1 資料與方法

1.1一般資料 本研究選取2016年1月至2017年12月就診于北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院的1 182例高血壓患者。其中男623例，女559例，平均年齡為(47.11±14.27)歲。納入標準：符合年高血壓防治指南的診斷標準即：收縮壓≥140 mm Hg和(或)舒張壓≥90 mm Hg；患者病情>3個月，所有患者均未行其他藥物治療。排除標準：通過詢問病史及血液生化、心電圖等其他輔助檢查排除的繼發(fā)性高血壓以及由于其他疾病引起的高血壓。本研究經(jīng)過北部戰(zhàn)區(qū)總醫(yī)院倫理委員會批準，所有納入患者均知情同意。采取患者清晨空腹外周靜脈全血5 mL，2% 乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝。

1.2儀器與試劑 Promega 全血DNA抽提試劑盒；湖南宏灝基因生物科技有限公司CYP3A5檢測試劑盒(基因芯片法)；杭州博日FQD-916A型熒光定量PCR儀；博奧生物有限公司BioMixerTMⅡ核酸快速雜交儀；博奧生物有限公司SlideWasherTM洗片機；博奧生物有限公司LuxScan-10K/B微陣列芯片掃描儀。

1.3方法

1.3.1核酸提取 使用Promega全血DNA抽提試劑盒嚴格按照操作作業(yè)書提取全血核酸樣本。300 μL全血樣本中加入1 mL的細胞裂解液，室溫孵育10 min后，2 000 ×g離心1 min，沉淀中加入核裂解液充分裂解后，加入蛋白沉淀液，清除溶液中的蛋白影響；2 000×g離心3 min，留取上清，加入至異丙醇溶液中抽提DNA樣本；沉淀經(jīng)洗滌后加入DNA溶液后留存。

1.3.2基因多態(tài)性檢測 使用湖南宏灝基因生物科技有限公司CYP3A5檢測試劑盒(基因芯片法)嚴格按照操作作業(yè)書依次進行目的片段擴增，雜交及芯片讀取一系列過程。擴增條件為95 ℃預變性 1 min； 95 ℃ 15 s,60 ℃ 退火40 s,40個循環(huán)。

1.3.3治療方案及療效評價 高血壓病患的篩選，根據(jù)《中國高血壓防治指南(2017 年修訂版)》對待選病患進行3次非同日坐位血壓測量，每次重復兩次取均值作為用藥前血壓值及入選標準。用藥后血壓監(jiān)測，對患者采用氨氯地平5 mg每日1次，總療程4周每隔兩日按指南標準隨訪監(jiān)測血壓。療效評價：按照新指南標準根據(jù)原衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床藥物研究指導原則》，將療效分為顯效、有效、無效。顯效:舒張壓(DBP) 下降≥10 mm Hg 并達到正常范圍(≤90 mm Hg)，或雖未降到正常范圍，但已經(jīng)下降≥20 mm Hg;有效:DBP 下降≤10 mm Hg，但已達到正常范圍，或 DBP 下降10～19 mm Hg，但未達到正常范圍，或為單純收縮性高血壓，收縮壓(SBP)下降≥30 mm Hg;無效:未達到以上標準者[6]。

2 結(jié) 果

2.1CYP3A5基因多態(tài)性檢測結(jié)果及分組結(jié)果 根據(jù)多態(tài)性檢測結(jié)果分為AA型組、AG型組、GG型組，AA型組頻率為89例(7.53%);AG型組頻率為415例(35.11%);GG型組頻率為678例(57.36%);每組中根據(jù)年齡劃分為<65歲、65～<80歲和≥80歲，每組間男女比例及年齡比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.2血壓監(jiān)測結(jié)果及藥物療效評價 AA型組顯著有效11 例，有效37例，無效41例，總有效率54%;AG型組顯著有效50例，有效240例，無效125例，總有效率70%;GG型組顯著有效130例，有效487例，無效61例，總有效率91%。從表1中顯示出，無論什么年齡層次，在氨氯地平治療后，血壓均明顯下降，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1 氨氯地平治療前后收縮壓及舒張壓變化

注：與治療前比較，*P<0.05

3 討 論

高血壓嚴重威脅我國中老年人的身心健康。在臨床治療中，往往同種藥物同種劑量，療效存在較大差異，也就是說對于藥物患者存在個體差異性[3]。所以對于這種個體化差異的機制研究，成為近年來高血壓用藥研究的熱點，而隨著基因檢測及藥物代謝機制研究的快速發(fā)展，基因指導的高血壓個體化診療也日漸成熟起來[7]。

近年來越來越多的研究表明氨氯地平的藥物療效與P450(CYP)特別是CYP3A5的基因多態(tài)性緊密相關(guān)，P450(CYP) 是人體內(nèi)藥物代謝的主要酶，是一類主要存在于肝臟、腸道中的單加氧酶[8]。其中 CYP3A 為最大的一族，約占肝臟 CYP 總量的30%，參與大量內(nèi)源性和外源性化合物的代謝。CYP3A5 參與了臨床中 50% 以上常用藥物的氧化、還原反應[9]。而氨氯地平的藥物代謝及消除也正是和CYP3A5基因相關(guān)的，特別是CYP3A5多個突變等位基因中的第3個內(nèi)含子中的6986 A→G單核苷酸多態(tài)性所影響表達的酶類，顯著影響氨氯地平的代謝及血藥濃度[10]。研究表明CYP3A5*3突變純合子的mRNA表達水平顯著野生型等位基因攜帶者，致使該酶活性缺失或降低，故其突變純合子攜帶者有 CYP3A5 蛋白不表達個體的稱呼[11]。由于CYP3A5 蛋白酶的缺失影響攜帶者氨氯地平的血藥濃度致使攜帶CYP3A5*3*3突變純合子的高血壓患者服用氨氯地平的降壓療效顯著優(yōu)于野生型基因攜帶患者[12-13]。本研究選取沈陽地區(qū)1 182例高血壓患者有關(guān) CYP3A5 基因多態(tài)性與降壓藥療效的相關(guān)的研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在使用相同治療用藥方案的情況下患者經(jīng)過基因檢測分組GG基因型組降壓效果最好，AG組次之，AA組較差，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。說明CYP3A5基因多態(tài)性與氨氯地平的降壓療效有關(guān)。CYP3A5 基因多態(tài)性影響氨氯地平的血藥濃度，研究表明 GG 型 氨氯地平濃度和活性最高，AA型最低，AG型居中。CYP3A5*3 等位基因攜帶者在氨氯地平的代謝過程中比 CYP3A5*1 攜帶者具有更高的血藥濃度，氨氯地平可以充分發(fā)揮其降壓作用。因此，在臨床上對已經(jīng)確診的高血壓患者，應該盡早進行CYP3A5基因多態(tài)性檢測，以便選擇合適的藥物及藥物劑量以便提高高血壓患者的血壓達標率，提高患者的生存質(zhì)量。