某規(guī)模化豬場偽狂犬病抗體檢測與分析

孫偉民

云霄縣農(nóng)業(yè)農(nóng)村局 福建云霄 363300

豬偽狂犬病是由偽狂犬病病毒（Pseudorabies virus，PRV）引起的一種高度接觸性傳染病，該病毒也是引起牛、羊、豬、犬和貓等多種家畜和野生動物發(fā)熱、奇癢(豬除外)及腦脊髓炎為主要癥狀的皰疹病毒。該病1813年發(fā)現(xiàn)于美國，之后匈牙利科學(xué)家Aujeszky首次認(rèn)定是一種獨(dú)特的病，在1910年和1935年被證明為病毒??；1947年，我國由劉永純從貓?bào)w內(nèi)分離出該病毒[1]。該病毒的傳播途徑多樣，如空氣傳播、經(jīng)皮膚傷口感染、垂直傳播、母乳傳播等。偽狂犬病對不同日齡的豬只影響情況是不同的，對于成年種豬，主要引起繁殖障礙；對小豬影響最為嚴(yán)重，15日齡以內(nèi)仔豬的病死率為100%[2]。對于斷乳后仔豬，可引起多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）及與偽狂犬病有關(guān)的豬呼吸道綜合征（PRDC）發(fā)生概率增加[3]。目前在臨床上常見豬偽狂犬病病毒與其他病毒混合感染，增加了疫情的復(fù)雜化以及發(fā)病率和病死率[4]，直接對養(yǎng)豬業(yè)造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失?？刂圃摬〉陌l(fā)生以及凈化該病毒成了規(guī)?；i場的重要任務(wù)。目前世界上有40多個(gè)國家都有該病報(bào)道，據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，中國已有30多個(gè)省、市的豬場流行過該病。在國外如加拿大、新西蘭、美國等，2004年起就未再有該病的報(bào)道，并已禁止免疫該病疫苗[5]，而近幾年P(guān)R在中國許多省 （市）種豬場呈暴發(fā)流行趨勢，嚴(yán)重影響?zhàn)B豬業(yè)的生產(chǎn)效率并造成較大的經(jīng)濟(jì)損失。

某規(guī)模化豬場存欄母豬8 000頭，出現(xiàn)3日齡小豬嚴(yán)重腹瀉與嘔吐，逐漸加重，6日齡開始出現(xiàn)死亡，母豬產(chǎn)死胎比例明顯上升，而保育舍的斷乳小豬出現(xiàn)食欲不振、呼吸困難等癥狀。與此同時(shí)周邊的養(yǎng)豬場，隨機(jī)抽查采血檢測，檢測出偽狂犬?。╣E）抗體呈陽性。該豬場的技術(shù)人員懷疑豬場也受到感染，因此隨機(jī)抽查后備母豬和經(jīng)產(chǎn)母豬并采集血液樣本，檢測其偽狂犬病（gE）抗體水平。通過解剖、診斷分析得出，偽狂犬病與其他病毒性疾病（如病毒性腹瀉）混合發(fā)生，導(dǎo)致懷孕母豬出現(xiàn)流產(chǎn)甚至死亡現(xiàn)象；后備母豬出現(xiàn)腹瀉、發(fā)燒、流鼻涕等，也有死亡現(xiàn)象；對于小豬影響甚大，病死率大幅度上升。之后該場采取了一系列措施，如補(bǔ)免疫苗、淘汰已感染種豬等，疫情及時(shí)得到控制。為了了解該豬場偽狂犬病野毒感染情況，連續(xù)抽查7～12月份不同豬群采集血液進(jìn)行檢測，根據(jù)該場的措施綜合分析，制定降低豬偽狂犬病造成損失的應(yīng)急預(yù)案。

1 材料與方法

1.1 血樣來源 2018年7～12月，采用前腔靜脈采血的方法隨機(jī)采集533份母豬血液，其中209份經(jīng)產(chǎn)母豬血液、324份后備母豬（7～8月齡）血液。分離血清，4℃冰箱保存?zhèn)溆?（數(shù)據(jù)來源于該豬場辦公室）。

1.2 試劑 豬偽狂犬病gpI抗體檢測試劑盒，購自（美國IDEXX）北京愛德士生物科技有限公司。

1.3 主要器材 Thermo Scientific Varioskan Flash酶標(biāo)儀、Thermo Scientific Heraeus Pico 17微量離心機(jī)、Thermo Scientific Finnpipette F1單道移液器（HH39997，20～200 μL；HH39905，100～1 000 μL）、Thermo Scientific Finnpipette F1多通道移液器 （5～50μL）、海爾DW-4OL508冰箱、微型振蕩器、試管、EPPENDOF管、吸頭、容量瓶等。

1.4 檢測方法 將采集、分離的血清樣品用ELISA方法檢測偽狂犬病野毒抗體水平，具體操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.5 免疫情況 正常免疫程序：種豬群免疫豬偽狂犬病gE基因缺失苗，一年免疫3次；后備豬在4月齡和6月齡分別免疫1次（廠家：海博萊）；小豬出生24 h內(nèi)，滴鼻免疫豬偽狂犬病gE基因缺失苗 （廠家：海博萊）。10月中旬全場進(jìn)行偽狂犬病疫苗加強(qiáng)免疫。豬瘟、細(xì)小病毒病、乙型腦炎、藍(lán)耳病等免疫均按常規(guī)程序進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 不同月份種豬群偽狂犬?。╣E）抗體檢測結(jié)果7～12月對種豬群進(jìn)行隨機(jī)采血檢測，結(jié)果見表1。種豬群偽狂犬病 （gE）抗體的陽性率分別為0%、8.97%、16.70%、57.53%、32.22%、8.62%， 總陽性率為21.26%。

表1 不同月份偽狂犬病（gE）抗體檢測結(jié)果

2.2 不同月份經(jīng)產(chǎn)母豬和后備豬偽狂犬病 （gE）抗體陽性率情況 對送檢血樣的檢測結(jié)果按種群類別（經(jīng)產(chǎn)母豬和后備豬）進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，結(jié)果見表2。7月份經(jīng)產(chǎn)母豬和后備豬群都未感染偽狂犬病野毒，8～10月經(jīng)產(chǎn)母豬的陽性率迅速上升，11～12月有所降低。經(jīng)產(chǎn)母豬的總陽性率為6.70%，后備豬的總陽性率為25%。后備豬感染偽狂犬病野毒情況比經(jīng)產(chǎn)母豬嚴(yán)重。

表2 母豬和后備豬偽狂犬?。╣E）抗體陽性率

圖1 母豬和后備豬偽狂犬病野毒感染趨勢圖

由圖1可見，后備母豬偽狂犬?。╣E）抗體水平呈趨勢變化，7～9月呈增長趨勢；10月后逐漸降低，11～12月種豬群偽狂犬?。╣E）抗體水平明顯下降。

3 分析與討論

1）調(diào)查結(jié)果表明，該規(guī)?；i場是偽狂犬病野毒感染陽性場，且該場后備豬的偽狂犬病野毒感染率較經(jīng)產(chǎn)母豬高。該豬場在7月份監(jiān)測時(shí)，豬群未檢出偽狂犬病抗體陽性豬，但在8月份經(jīng)產(chǎn)母豬和后備豬均出現(xiàn)偽狂犬病野毒感染，9～11月處于較高的野毒抗體陽性水平，其中后備豬的陽性率在10月份達(dá)到97.5%，幾乎全部感染偽狂犬病野毒。之后陽性率開始下降，至12月份偽狂犬病野毒感染率降為8.62%，基本得到控制。經(jīng)產(chǎn)母豬雖然也感染偽狂犬病野毒，但感染程度總體低于后備豬，這可能與經(jīng)產(chǎn)母豬一年3次進(jìn)行偽狂犬病普免、免疫抗體水平較高有關(guān)。而后備豬只有在4月齡和6月齡分別免疫1次，免疫后未進(jìn)行偽狂犬病免疫抗體監(jiān)測，免疫效果不確切，這可能是導(dǎo)致后備豬偽狂犬病野毒感染比較嚴(yán)重的因素之一；其次，與豬舍環(huán)境有關(guān)，后備母豬舍離散養(yǎng)戶較近，而對豬舍四周環(huán)境的消毒沒有做到位，也是導(dǎo)致該次疫情的重要因素。

2）該豬場經(jīng)產(chǎn)母豬和后備母豬偽狂犬病疫情能得到及時(shí)有效的控制，一方面與該豬場有定期監(jiān)測制度、及時(shí)發(fā)現(xiàn)疫情有關(guān)；另一方面，該豬場發(fā)現(xiàn)疫情后，采取迅速淘汰已感染種豬、切斷病毒傳播途徑、全場緊急免疫偽狂犬病疫苗、母豬飼料添加多維等保健產(chǎn)品以提高抵抗力及加強(qiáng)消毒等工作有關(guān)；并且與減少外界接觸、加強(qiáng)外來人員與車輛的消毒工作有一定的關(guān)系；之后，對于引進(jìn)的種豬進(jìn)行隔離消毒、觀察、檢測嚴(yán)格把關(guān)，防止種豬群之間的交叉感染。

3）豬偽狂犬病病毒屬于皰疹病毒，潛伏感染是皰疹病毒的共性之一。主要潛伏在豬的神經(jīng)組織中，此時(shí)在豬體內(nèi)檢測不到病毒，但在應(yīng)激因子的刺激下潛伏感染的基因被激活，重新產(chǎn)生感染性的病毒粒子，導(dǎo)致動物發(fā)病，并傳播給其他動物。疫苗免疫只能阻止豬發(fā)病和出現(xiàn)臨床癥狀，但不能控制PRV潛伏感染與重新激活[6]。且目前對偽狂犬病還沒有特效藥，只能通過自身的免疫系統(tǒng)對其產(chǎn)生保護(hù)作用。因此，規(guī)?；i場偽狂犬病野毒的控制與凈化是一個(gè)系統(tǒng)工程，須通過對本場的跟蹤觀察，制定針對本場有效的凈化計(jì)劃及防控措施。

對于偽狂犬病陽性場，首先應(yīng)當(dāng)對已感染并呈gE抗體為陽性的公豬進(jìn)行淘汰，要不定時(shí)檢測、跟蹤陰性公豬的抗體水平；其次，對于已感染母豬的凈化，應(yīng)當(dāng)是個(gè)循序漸進(jìn)的過程。為了降低損失，建議根據(jù)母豬情況進(jìn)行淘汰，但對于檢測抗體呈陽性與呈陰性的豬要分開飼養(yǎng)與管理。針對于后備豬，檢測結(jié)果呈陽性的豬只建議當(dāng)作商品豬處理，檢測結(jié)果呈陰性的豬只應(yīng)當(dāng)隔離觀察，并再次采血檢測，之后要加強(qiáng)消毒。

對于偽狂犬病陰性場，要通過疫苗免疫并配合血樣檢測gE抗體水平，及時(shí)跟蹤與觀察。加強(qiáng)豬舍四周的消毒工作，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，飼料中適當(dāng)添加多維或微量元素，增強(qiáng)豬本身的體質(zhì)。對于后備豬或引種豬，嚴(yán)格把關(guān)，做好疫苗免疫工作，做好隔離飼養(yǎng)管理，采血檢測抗體水平并保證疫苗的有效性。

4）控制傳染源和免疫接種是防控豬偽狂犬病流行的有效措施[7]。對于規(guī)模化種豬場最好能自繁自養(yǎng)，并且豬場應(yīng)當(dāng)執(zhí)行嚴(yán)格的安全制度，把控好人員和車輛的進(jìn)出與流動，這樣可以減少不必要的交叉感染。定期做好滅鼠工作，禁止飼養(yǎng)貓科及犬科動物等能攜帶病毒的動物。定期做好疫苗免疫及補(bǔ)免，并要保證疫苗的有效性；定期監(jiān)測，有利于了解豬群的抗體水平和免疫效果；豬群最好能做到全進(jìn)全出，用不同的消毒藥進(jìn)行消毒，并且留有一定的空欄時(shí)間。建立淘汰機(jī)制，應(yīng)當(dāng)根據(jù)種群的年齡、胎次、產(chǎn)仔率以及檢測結(jié)果等綜合因素考慮篩選。平時(shí)消毒應(yīng)當(dāng)重視，保證有多重消毒藥輪流使用。時(shí)刻監(jiān)視周邊疫情的情況，做好預(yù)案及應(yīng)對措施。