不同產(chǎn)地5種中藥材安全限量研究——農(nóng)藥殘留分析

牛建均　劉春艷　李開斌　謝宇　龍立慧　姚元貴　王亮　張麗艷　羅君

【摘要】目的：考查不同產(chǎn)地的太子參、野菊花、三七、茯苓、魚腥草有機氯農(nóng)藥殘留情況，了解我國目前中藥材農(nóng)藥殘留存在的問題，為后續(xù)開發(fā)利用藥材資源提供理論依據(jù)和基礎(chǔ)。方法：采用氣相色譜-電子捕獲檢測（ GC-ECD） Rtx-1701彈性石英毛細管柱（0.25?mm×30?mm×0.25?μm），樣品經(jīng)丙酮，二氯甲烷與石油醚混合有機溶劑超聲提取，進樣口溫度230?℃，檢測器溫度300?℃;程序升溫，初始溫度100 ℃，先以10 ℃/min升至220?℃，再以8?℃/min升至250?℃保持10 min，外標法計算含量，應(yīng)用SPSS 22.0軟件對數(shù)據(jù)結(jié)果進行統(tǒng)計學分析。結(jié)果：9種有機氯的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均大于0.995;最低檢出限為0.00012～0.00057?μg/g;檢測儀器的精密度良好，RSD均小于5%;檢測方法重現(xiàn)性好，RSD均小于8%;回收率范圍為94.91～105.09%。5種中藥材中均含有滴滴涕，僅有三七中含有五氯硝基苯;參考2015版《中國藥典》和《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準》（WM-T2-2004）收載的品種項下“農(nóng)藥殘留量”部分檢查限度，50批中藥材檢出含有機氯農(nóng)藥殘留率占50%，但含量均較低，其中總六六和總滴滴涕超標率分別為10%和6%，50批中藥材合格率達84%，整體符合要求。結(jié)論：氣相色譜檢測法簡便快捷、分離效果好，能廣泛用于中藥材有機氯農(nóng)藥殘留的檢測。

【關(guān)鍵詞】中藥;農(nóng)殘;有機氯;氣相色譜法

【中圖分類號】R284.1【文獻標志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）9-0014-06

Study on Safety Limits of Five Chinese Medicinal Materials from Different

Producing Areas-Analysis of Pesticide Residues

NIU Jianjun1LIU Chunyan1LI Kaibin2XIE Yu3LONG Lihui1YAO Yuangui1WANG Liang1ZHANG Liyan1*LUO Jun4*

1. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China;

2. Anshun Institute for Food and Drug Control， Anshun 561000， China;

3. Guizhou Guangjitang Pharmaceutical Company Limited， Guiyang 550014， China;

4. The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine， Guiyang 550025， China

Abstract：Objective To investigate the residues of organochlorine pesticides in Radix Pseudostellariae， Wild Ch-rysanthemum， Sanqi， Poria and Houttuynia cordata from different producing areas， to understand the existing pro-blems of pesticide residues in Chinese herbal medicines， and to provide theoretical basis for the subsequent devel-opment and utilization of medicinal materials basis.Methods Gas chromatography-electron capture detection （GC-ECD） Rtx-1701 elastic quartz capillary column （0.25 mm×30 mm×0.25 μm） was used. The sample was ultraso-nically extracted with acetone， dichloromethane and petroleum ether mixed organic solvent to achieve splitless fl-ow. Mode injection， inlet temperature 230 ℃， detector temperature 300 ℃; programmed temperature， initial te-mperature 100 ℃， first 10 ℃/min rose to 220 ℃ then 8 ℃/min rose to 250 ℃ for 10 min， outside the contenttwas calculated by standard method， and the data were statistically analyzed using SPSS 22.0 software.ResultsThe linearrelationship of the nine organochlorines is good， the correlation coefficient is greater than 0.995;the minimum detection limit is 0.00012～0.00057 g/g; the precision of the detection instrument is good，the RSD is less than 5%; the reproducibility of the detection method is good， and the RSD is smallerthan 8%; recovery ranged from 94.91 to 105.09%. Drip sputum is contained in all five kinds of Chi-nese medicinal materials， but only hexachloride benzene is contained in Panaxnotoginseng; it is included in the 2015 edition of Chinese Pharmacopoeia and “Green Standards for Foreign Trade of Medicinal Pla-nts and Preparations”（WM-T2-2004）. According to the partial inspection limit of “Pesticide Residues” un-der the variety， 50 batches of Chinese herbal medicines detected 50% of organochlorine pesticide residu-es， but the content was low， and the total rate of total sixty-six and total DDT was 10% and 6% res-pectively. The qualified rat of 50 batches of Chinese herbal medicines reached 84%， and the overall re-quirements were met. Conclusion Gas chromatography detection method is simple， rapid， and has good separat-ion effect. It can be widely used in the detection of organochlorine pesticide residues in Chinese herbal medicines.

Key：words：Traditional Chinese Medicine; Agricultural Residues; Organochlorine; Gas Chromatography

隨著中藥的國際化發(fā)展，衡量中藥品質(zhì)標準除了自身有效性，還有安全性。其中影響中藥材品質(zhì)的原因包括缺乏規(guī)范性種植以及農(nóng)藥的濫用造成農(nóng)殘超標現(xiàn)象[1-2]。因此改善中藥材的外源性污染是保障中藥安全性，也是中醫(yī)藥國際化的基本要求[3]。有機氯類農(nóng)藥其化學性質(zhì)穩(wěn)定，在常規(guī)條件下具有不易揮發(fā)的特點，只能在環(huán)境中通過自身緩慢的降解。因此，在禁用10余年后，仍能在土壤和生物體內(nèi)找到殘留[4]。

2015版《中國藥典》[5]只規(guī)定4種藥材的有機氯農(nóng)藥殘留限度，具有農(nóng)殘限度規(guī)定的藥材品種較少，但農(nóng)殘超標現(xiàn)象普遍存在，嚴重影響中藥市場國際化的發(fā)展?！端幱弥参锛爸苿┩饨?jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準》[6]是中華人民共和國藥用植物及其制劑在對外經(jīng)濟貿(mào)易活動中重要的外經(jīng)貿(mào)質(zhì)量標準之一，適用于藥用植物原料及制劑的品質(zhì)檢驗，其中對農(nóng)藥殘留限度規(guī)定：六六六（BHC）≤0.1?μg/g;滴滴涕（DDT）≤0.1?μg/g;五氯硝基苯（PCNB）≤0.1?μg/g。氣相色譜法是農(nóng)藥殘留檢測的主要方法，該方法樣品前處理技術(shù)簡便易行，適用于大批量藥材的測定，方法快速、成本較低，結(jié)果良好，在檢測有機氯類農(nóng)藥中占主導(dǎo)地位[7-8]。有學者采用氣相色譜法對中藥三七中的農(nóng)藥殘留進行了測定，其結(jié)果顯示該方法可行[9]。本實驗所檢測的太子參、魚腥草、茯苓、野菊花等中藥材來源于全國各地，應(yīng)嚴格控制中藥材安全限量檢查。因此本實驗應(yīng)用2015版藥典氣相色譜法，同時選用Rtx-1701彈性石英毛細管進行檢查，結(jié)果顯示此條件下9種農(nóng)藥達到良好的基線分離。因此對不同產(chǎn)地5種中藥材總六六六、總滴滴涕和五氯硝基苯9 種有機氯農(nóng)藥殘留進行測定，提高傳統(tǒng)中藥材的用藥質(zhì)量，為建全和完善中藥材中有機氯農(nóng)藥殘留量檢測方法提供依據(jù)的同時，推進中藥材的規(guī)范化種植，加快中藥的國際化進程。

1儀器與材料

1.1實驗藥材實驗所用三七產(chǎn)于云南、廣西。野菊花產(chǎn)于湖北、四川、山西、貴州、安徽。茯苓產(chǎn)于貴州、安徽、云南。魚腥草產(chǎn)于貴州、四川、重慶。太子參產(chǎn)于貴州、江西、安徽、江蘇、陜西、福建。所有藥材經(jīng)貴陽中醫(yī)學院植物栽培教研室魏升華教授鑒定，均符合《中國藥典》2015版一部的要求。

1.2農(nóng)藥標準品α-BHC標準品、γ-BHC標準品、β-BHC標準品、δ-BHC標準品、p，p′-DDE標準品、p，p′-DDT標準品、p，p′-DDD標準品、p，p′-DDT標準品、PCNB五氯硝基苯標準品，標準值100 μg/mL;純度均為99%以上（購于：北京中科質(zhì)檢生物技術(shù)有限公司）。

1.3儀器2010PIΜS島津氣相色譜儀（島津公司）;TG16WS臺式高速離心機（湘儀離心機儀器有限公司）;KQ3200D.E數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;BSA224S電子天平（賽多利斯科學儀器有限公司）。

1.4試劑氮氣純度>99.99%（安順光大氣廠），氯化鈉、無水硫酸鈉、石油醚、二氯甲烷、濃硫酸、丙酮均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1氣相色譜條件參照2015版《中國藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測定法第一法項下“9種有機氯類農(nóng)藥殘留量測定法”，以Rtx-1701彈性石英毛細管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），Ni～ECD電子捕獲檢測器。進樣口溫度230?℃，檢測器溫度300?℃，不分流進樣。程序升溫：初始100?℃，每分鐘10?℃升至220?℃;每分鐘8?℃，升至250?℃，保持10 min。

2.2混合對照品制備精密稱取六六六 （α-BHC，β-BHC，γ- BHC，δ-BHC）、滴滴涕（p，p′-DDE，p，p′-DDD，o，p′-DDT，p，p′-DDT） 及五氯硝基苯（PCNB）農(nóng)藥對照1 mL，標準值100?μg/mL。用石油醚（60～90 ℃）分別制成每1?mL約含2～3?μg的溶液，即得各對照品貯備溶液;精密量取上述各對照品貯備液1 mL，置25 mL量瓶中，用石油醚（60～90 ℃）稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.3供試品制備參照2015版《中國藥典》第四部農(nóng)藥殘留量測定法第一法項下“9種有機氯類農(nóng)藥殘留量測定法”，同法制備樣品，即得。具體操作如下所述：取供試品，粉碎成粉末（過3號篩），取約2 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加水20 mL浸泡過夜，精密加丙酮40 mL，稱定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱定重量，用丙酮補足減失的重量，再加氯化鈉約6 g，精密加二氯甲烷30 mL，稱定重量，超聲15 min，再稱定重量，用二氯甲烷補足減失的重量，靜置分層后，取有機相移入100 mL裝有適量無水硫酸鈉的錐形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，在40 ℃水浴上減壓濃縮至近干，加少量石油醚（60～90 ℃）如前反復(fù)操作3次將二氯甲烷及丙酮除凈，用石油醚（60～90 ℃）溶解并轉(zhuǎn)移至10 mL具塞刻度離心管中，精密稀釋至5 mL，小心加入硫酸l mL，振搖1 min，離心（3000 rpm）10 minn，精密量取上清液2 mL，置具刻度的1 mL容量瓶中，用氮氣將溶液濃縮至適量，并精密稀釋至l mL，即得。

2.4方法學考察

2.4.1專屬性實驗分別精密吸取各對照品貯備溶液1 μL，進行分析得到9種有機氯保留時間如下表1所示，色譜圖如圖1、2所示。

2.4.2精密度試驗按“2.1”項色譜條件，精密吸取混合對照品溶液1?μL，連續(xù)進樣6次，測定各有機氯峰面積，并記錄結(jié)果。通過統(tǒng)計顯示9種有機氯的RSD為2.26%～4.52% ，表明儀器精密度良好，符合要求。

2.4.3重復(fù)性試驗參照“2.3”項下的供試品溶液的制備方法，平行制備6份樣品溶液，將樣品溶液進行檢測并計算其 RSD在6.45%～7.82%，表明該方法重復(fù)性良好，符合要求。

2.4.4線性考察吸取混合對照品儲備液，制成濃度為0、1、5、10、50、100?μg/L的溶液，進樣1μL，按“2.1”項色譜條件測定，得到9種有機氯的線性R2均大于0.995，符合要求。最低檢測限在0.00012～0.00057。線性關(guān)系方程見表2。

2.4.5空白加樣回收實驗通過檢測發(fā)現(xiàn)中藥中有機氯含量均低，且有些農(nóng)殘成分未被檢出，通過精密度實驗得知實驗穩(wěn)定性良好。因此本實驗采用空白溶劑加標準品后，按“2.2”項制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1?μL，按“2.1”項色譜條件，得到實驗的回收率：總六六六為94.35%～105.09%;總滴滴涕為93.18%～101.44%;五氯硝基苯為77.90%～117.83%;表明該方法合理，可用于有機氯農(nóng)藥殘留量的測定，實驗結(jié)果見表3。

2.5樣品的測定按“2.2”項制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液1?μL，按“2.1”項色譜條件測定，結(jié)果顯示三七中農(nóng)殘含量最高是p，p′-DDT為0.775?μg/g，野菊花中農(nóng)殘含量最高是p，p′-DDE為0.2?μg/g，茯苓中農(nóng)殘含量最高是β-BHC為0.057?μg/g，其中不同產(chǎn)地的太子參中只含o，p′-DDT農(nóng)殘最高為0.325?μg/g，魚腥草中農(nóng)殘含量最高是δ-BHC為0.264?μg/g，詳見表4。

2.6箱型圖統(tǒng)計分析由于測定樣品數(shù)量較大，數(shù)據(jù)結(jié)果較為分散，為更好地統(tǒng)計數(shù)據(jù)結(jié)果，采用SPSS 22.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析，可看出5種藥材的不同有機氯農(nóng)殘數(shù)據(jù)分布較集中，少數(shù)出現(xiàn)異常值，其中有8個極端異常值大于0.1?μg/g，為農(nóng)藥殘留超標。不同中藥品種同種農(nóng)殘的箱型圖，如圖3所示。

2.7樣品各元素超標現(xiàn)象現(xiàn)行《藥用植物及制劑進出口綠色行業(yè)標準》和《中國藥典》2015版限量指標綜合為：總六六不得超過0.1?μg/g;總滴滴涕不得超過0.1?μg/g;五氯硝基苯不得超過0.1?μg/g。對9種中藥材中總六六六（α-BHC、β-BHC、γ-BHC、δ-BHC）、總滴滴涕（p，p′-DDE、p，p′-DDD、o，p′-DDT、p，p′-DDT）和五氯硝基苯（PCNB）的9種有機氯農(nóng)藥殘留量進行測定，進行統(tǒng)計，從藥材品種分析，其中全草類藥材魚腥草3批，花類藥材野菊花有2批，根莖類藥材三七、太子參共2批超標;所有樣品超標情況及對相應(yīng)樣品種類見表5。

3討論

中藥農(nóng)藥殘留具有普遍性，其中農(nóng)藥有機氯在中藥材中超標率和檢出率較高[10]。本研究采用氣相色譜法對9 種有機氯農(nóng)殘進行測定，結(jié)果顯示：5種藥材都不同程度的存在有機氯農(nóng)藥殘留，參考《中國藥典》和《藥用植物及制劑外經(jīng)貿(mào)綠色行業(yè)標準》收載的品種項下“農(nóng)藥殘留量”部分檢查限度，50批中藥材有機氯農(nóng)藥檢出率為50%，但普遍含量低，其中總六六和總滴滴涕超標率分別為10%和6%，50批中藥材整體合格率達84%。從藥材品種上分析，花類藥材如野菊花，全草類藥材如魚腥草，多年生根和根莖類藥材如三七農(nóng)藥殘留污染比較其他藥材嚴重。其中茯苓農(nóng)藥殘留只有痕量檢出，并無超標;野菊花有批2超標，魚腥草有3批超標，可能在種植過程中，農(nóng)藥直接噴灑于植株的花，葉上造成污染，且花類和全草類中藥炮制簡單、貯藏期短，使農(nóng)藥殘留沒有得到代謝;太子參只有1批藥材檢出農(nóng)殘，由農(nóng)戶幫忙于野生太子參采收，再按2015版藥典標準炮制成符合要求飲片，采收加工無明顯接觸農(nóng)殘過程，因此農(nóng)藥殘留幾乎沒有;三七1批超標，農(nóng)殘含量最高是p，p′-DDT為0.775μg/g，在不同藥用部位的農(nóng)藥污染程度不同，三七由于栽培年限長（2～3年），且又生長于蔭蔽高濕的栽培環(huán)境下，三七病害較多且蔓延迅速，因此農(nóng)殘污染相對嚴重。綜上所述，發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥在藥用植物體內(nèi)的分布隨藥材種類、產(chǎn)地和藥用部位不同而各異。由于中藥材使用前多經(jīng)復(fù)雜炮制、貯藏，很多農(nóng)藥已大部分代謝，因此殘留水平并不高。在中藥種植和生產(chǎn)過程中，如土壤、水源、大氣等污染，在中藥材采收、加工、保存、運輸過程中也會造成的農(nóng)藥污染。

對中藥材農(nóng)藥殘留量進行監(jiān)測是較復(fù)雜的技術(shù)，因此制訂科學、有效的檢測技術(shù)平臺是控制中藥外源性有害殘留物首要措施。研究對有關(guān)中藥農(nóng)殘控制中的應(yīng)用進行了簡要概述，對中藥農(nóng)藥殘留分析中的應(yīng)用做了有益的探討，從而為構(gòu)建中藥質(zhì)量體系提供參考，并提升中藥材的國際形象。

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