淺談生物傳感器法檢測(cè)嬰幼兒米粉中黃曲霉毒素B1含量

□ 林 佳 廣東亨盛維嘉食品工業(yè)有限公司

黃曲霉毒素屬于一種生物類毒素，這種毒素在奶、蛋、肉等農(nóng)產(chǎn)品中較為常見。尤其是黃曲霉毒素B1（AFB1），研究表明這種毒素給人體造成的危害性是最大的。而黃曲霉毒素B1主要污染糧油及其制品，嬰幼兒米粉主要原料是大米，如果使用了被AFB1污染的大米原料就會(huì)被污染。為了有效控制這種危害性，針對(duì)嬰幼兒輔食品中AFB1的量實(shí)施了規(guī)定，其范圍在0.5 μg/kg以內(nèi)[1]。為了保障嬰幼兒的健康，必須針對(duì)米粉中的黃曲霉毒素實(shí)施全面詳細(xì)的檢測(cè)，進(jìn)而提升國(guó)內(nèi)嬰幼兒米粉產(chǎn)品的食品安全性。

1 生物傳感器法檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的材料與方法

1.1 檢測(cè)所需的材料與試劑

①黃曲霉毒素氧化酶；②牛血清白蛋白、戊二醛；③“O”型圈、稀釋水、SBA專用緩沖液；④核微孔膜，該孔膜的直徑為0.2 mm；⑤鉑絲、銀，這兩種金屬的純度要求非常高，必須達(dá)到99.999%；某品牌的米粉以及其余試劑和實(shí)驗(yàn)用的蒸餾水。這些材料與試劑都是具備生產(chǎn)資格的研究院或正規(guī)途徑所提供，保證了試驗(yàn)過程的有效性。

1.2 檢測(cè)所需的儀器與設(shè)備

相關(guān)檢測(cè)的儀器只要是有以下幾個(gè)方面：①黃曲霉毒素測(cè)定儀，該儀器的型號(hào)為SBA-70，研發(fā)機(jī)構(gòu)為山東省科學(xué)院生物研究所，在性能方面具有絕對(duì)的保證；②水浴鍋，其型號(hào)為 HH-4/HH-（S）， 具 有 4數(shù) 顯 恒溫的功能，研發(fā)機(jī)構(gòu)為金壇市友聯(lián)儀器研究所；③天平，其型號(hào)為PT-2004/405，屬于微量分析型天平。以上這些設(shè)備均具有極為良好的性能高，符合檢測(cè)試驗(yàn)的要求[2]。

1.3 檢測(cè)的具體方法

1.3.1 原理

黃曲霉毒素與其氧化酶發(fā)生酶促反應(yīng)產(chǎn)生H202，H202在鉑金電極表面被還原成H2O,電極獲得電子產(chǎn)生電流信號(hào)，該電流信號(hào)與H202成比例關(guān)系，而H202與黃曲霉毒素濃度成線性關(guān)系。

1.3.2 黃曲霉毒素氧化酶膜的制備

在進(jìn)行黃曲霉素氧化酶膜制備的過程中，先把10單位的黃曲霉素氧化酶、2 μL含量為2.5%的戊二醛溶液以及含有3%牛血清蛋白的溶液進(jìn)行混合并搖勻，將這混合溶液涂于核微孔膜的表面上，然后再將涂抹好的核微孔膜放置于38 ℃的溫度環(huán)境下烘干，烘干的時(shí)間約為20 min，最后將烘干好的核微孔膜放進(jìn)恒溫為4 ℃的冰箱中保存、備用。

1.3.3 黃曲霉毒素氧化酶?jìng)鞲衅鞯闹苽溥^程

在實(shí)施檢測(cè)之前，必須制備出黃曲霉毒素氧化酶?jìng)鞲衅鳎唧w制備的過程體現(xiàn)在以下環(huán)節(jié)。①制作一個(gè)直徑為20 mm的圓柱體，材料為H2O2電極，電極的陰陽極材料分別采用了鉑金絲、銀，鉑金為陽、銀為陰，將環(huán)氧樹脂材料填入其中作為圓柱體的填充材料，該材料具有絕緣性能。②在電極兩極表面滴加緩沖液，并覆蓋黃曲霉毒素氧化酶膜。

1.3.4 黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備過程

取1 mL標(biāo)準(zhǔn)品（3 mg/L）用乙腈定容到100 mL容量瓶中，配制成濃度為30 ng/mL。于4 ℃冰箱避光保存，備用。

1.3.5 黃曲霉毒素B1樣品溶液的制備過程

在進(jìn)行樣品溶液制備的時(shí)候，需要先稱取2 g米粉于50 mL離心管作為待測(cè)樣品，加入10 mL 50%的甲醇，振蕩混勻。于超聲波中超聲10 min，再置于離心機(jī)中用5 000 r離心10 min。取上清液加入樣品溶液試管中，置于4 ℃的冰箱中保存、備用。

1.3.6 黃曲霉毒素B1樣品的測(cè)定過程

選用相應(yīng)的緩沖劑作為流動(dòng)相，選取的緩沖劑為pH值為7.2的磷酸鹽，流動(dòng)相完成之后啟動(dòng)型號(hào)為SBA-70的測(cè)定儀，使其保持運(yùn)行狀態(tài)以便于黃曲霉毒素的檢測(cè)。儀器開機(jī)預(yù)熱30 min， 配 制 0、1、2、4、8、20 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，向反應(yīng)池注入25 μL的標(biāo)樣和樣品，啟動(dòng)檢測(cè)按鈕，即可獲得檢測(cè)結(jié)果。

2 黃曲霉毒素B1檢測(cè)的結(jié)果分析

通過試驗(yàn)的方式采用生物傳感器法對(duì)嬰幼兒米粉中黃曲霉毒素B1含量進(jìn)行檢測(cè)，曲線和10次平行樣品結(jié)果見圖1、表1。

圖1 黃曲霉毒素 B1測(cè)定線性圖

表1 黃曲霉毒素B1檢測(cè)結(jié)果分析表

同時(shí)采用合適的方法對(duì)米粉樣品待測(cè)液進(jìn)行測(cè)定，比較常見的有酶聯(lián)免疫法、高效液相色譜法兩種方法，通過對(duì)這三種方法測(cè)定所得的結(jié)果比較，可以得出通過SBA-70黃生物傳感器測(cè)定的米粉樣品中，黃曲霉毒素B1的含量無顯著差異，并且穩(wěn)定性良好。

3 結(jié)語

本文以實(shí)驗(yàn)測(cè)試證明的方式，驗(yàn)證了生物傳感器法在黃曲霉毒素檢測(cè)過程中具有較大的優(yōu)勢(shì)，尤其是在準(zhǔn)確度、樣品分析速度、樣品處理等方面，均具有良好的效果，在米粉黃曲霉毒素B1含量檢測(cè)流程中，其是一種較為理想的檢測(cè)方法，對(duì)于嬰幼兒米粉而言，該檢測(cè)技術(shù)的應(yīng)用是具有較高價(jià)值的。