西藏藏木香中主要活性成分研究

林長彬 白瑪玉珍 強巴卓嘎 歐珠 旦宗 陳建 夏陳 鄧俊琳

摘?要：對13份西藏藏木香中黃酮、多酚、土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯含量進行測定，結(jié)果表明：13份西藏藏木香中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯最高含量分別為44.22、45.45mg/g，不同藏木香樣品之間土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量均存在顯著差異，且土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量呈極顯著正相關(guān)（P<0.01）;13份西藏藏木香中多酚與黃酮含量均較高，最高含量分別為1 602.24、60.66mg/100g，且多酚含量均高于黃酮含量。

關(guān)鍵詞：西藏;藏木香;活性成分;產(chǎn)地;比較

本研究通過對13份西藏藏木香中土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯、黃酮、多酚等活性成分含量進行測定并分析，為西藏藏木香功能性食品的研究與開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?材料

通過對西藏藏木香種植現(xiàn)狀的考察調(diào)研，發(fā)現(xiàn)其種植主要集中在山南地區(qū)，林芝以及日喀則也部分種植，因此，本試驗主要以山南、林芝以及日喀則為采樣地，采集到13份西藏藏木香作為試驗樣品（表1）。樣品經(jīng)粉碎、過40目篩，于-18℃凍藏備用。

1.2?試劑

土木香內(nèi)酯、異土木香內(nèi)酯、蘆丁和沒食子酸對照品，北京索萊寶科技有限公司;福林酚，北京索萊寶科技有限公司;色譜純乙腈、甲醇（MREDA美國）、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉、無水乙醇、甲醇、磷酸等（均為分析純），成都市科龍化工試劑廠。

1.3?儀器與設(shè)備

FA2104型電子天平，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;FW-100高速萬能粉碎機，北京科偉永興儀器有限公司;TD-4Z型臺式低速離心機，四川蜀科儀器有限公司;KH2200DE型數(shù)控超聲波清洗器，昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司;ELX-800型號酶標(biāo)儀，美國伯騰儀器有限公司;1260型高效液相色譜儀，美國Agilent公司;UV-6100型號紫外分光光度計，上海元析儀器有限公司。

1.4?方法

1.4.1?總黃酮含量的測定?參照陳克克等[1]的方法，提取樣品中的黃酮，于510 nm波長處測定吸光值。以蘆丁溶液的質(zhì)量濃度（μg/mL）為橫坐標(biāo)（x）、吸光值為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。蘆丁線性回歸方程為：y=5.208x+0.041，R2=0.999。

1.4.2?多酚含量的測定?參照Okarter等[2]和Nuntla等[3]的方法，分別提取樣品中的游離多酚和結(jié)合多酚，參照Chu等[4]的方法，在10mL試管中，加入10μL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或適當(dāng)稀釋后的多酚樣品提取液，加入20μL福林酚試劑，混合均勻。放置5min后，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5% Na2CO3溶液160μL。室溫下避光反應(yīng)60min后，在765nm波長下測定混合液吸光值。以沒食子酸溶液的質(zhì)量濃度（mg/L）為橫坐標(biāo)（x）、吸光值為縱坐標(biāo)（y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。沒食子酸線性回歸方程為：y=0.004x+0.082，R2=0.999。

1.4.3?土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的含量測定?土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯的測定采用高效液相色譜法，參考肖遠(yuǎn)燦等[5]的方法稍作修改，取藏木香藥材粉末1.00g于100mL具塞三角瓶中，加80%甲醇溶液8mL，40℃超聲40min后，冷卻，在6 000r/min條件下離心10min，收集上清液，殘渣再提取2次，合并3次提取液并定容至25mL量瓶中，稀釋5倍后搖勻經(jīng)微孔濾膜過濾后進樣分析。色譜條件：色譜柱ZORBAX Eclipse XDB-C18（250mm×4.5mm，5.0μm），流動相：乙腈-0.04%磷酸溶液（55∶45）、檢測波長200nm、體積流量0.8mL/min、柱溫30℃，進樣量5μL。以峰面積為縱坐標(biāo)（y）、相應(yīng)異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量為橫坐標(biāo)（x），作回歸曲線，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。異土木香內(nèi)酯回歸曲線方程及相關(guān)系數(shù)為：y=22.597x-46.018，R2=0.999 6;土木香內(nèi)酯回歸曲線方程及相關(guān)系數(shù)為：y=21.981x-44.369，R2=0.999 6（附圖）。

1.5?數(shù)據(jù)處理

所有實驗結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，顯著性差異用多重比較法中的標(biāo)記字母法表示，采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)分析，顯著性水平為P<0.05。

2?結(jié)果與分析

2.1?黃酮含量

由表2可知，黃酮含量在27.60～60.66mg/100g內(nèi)，與楊月琴等[6]所采集的青海省藏木香中黃酮含量（28.00mg/100g）以及趙永明等[7]通過優(yōu)化土木香根中總黃酮提取工藝，在最佳工藝條件下可得到的總黃酮浸出量（14.41mg/g）相比，本試驗所采集到的13份西藏藏木香中均含有較高的黃酮，最高可達(dá)到60.66mg/100g。此外，13份藏木香中黃酮含量變異系數(shù)為22.92%，較大的變異系數(shù)說明不同地區(qū)藏木香中黃酮含量差異較大，結(jié)合表3可以看出，不同區(qū)域的藏木香中黃酮含量可能是由于不同地域品種在不同生態(tài)條件下合成存在差異所致。這可能是由于地域差異所導(dǎo)致的生長條件對藏木香中黃酮含量具有顯著的影響[8]。

2.2?多酚含量

多酚含量的高低對于藏木香的保健價值同樣具有重要的意義[9]。目前尚未有文獻(xiàn)對藏木香中多酚含量進行測定分析，由表2可知，13份藏木香中多酚含量在461.11～1 602.24mg/100g之間，并且其含量的變異系數(shù)為37.02%，說明多酚含量較受地域條件影響更大。與黃酮含量表現(xiàn)相一致的是，西藏不同區(qū)域的藏木香中多酚含量之間同樣存在顯著差異，其中，山南地區(qū)的藏木香中多酚含量普遍較高，此外，還發(fā)現(xiàn)西藏藏木香中多酚含量均高于黃酮含量。

2.3?土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯含量

不同的生長條件對藏木香中有效成分的含量有明顯的影響[10]。由表4可知，利用高效液相色譜法對西藏不同區(qū)域的13份藏木香進行測定，發(fā)現(xiàn)土木香內(nèi)酯的含量在13.57～44.22mg/g內(nèi)，而異土木香內(nèi)酯含量在12.21～45.45mg/g內(nèi)，這與文獻(xiàn)所報道的范圍基本一致[5，11-13]，但其含量普遍較高，這可能是由于測定方法之間的差異所造成的。陳曉紅[14]利用GC法測定了不同產(chǎn)地的藏木香中異土木香內(nèi)酯含量為28mg/g。趙永明等[15]利用HPLC法優(yōu)化工藝測定土木香根中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯提取量分別為30.53、19.67mg/g，同時較高的含量也可能是西藏藏木香品種優(yōu)良所造成的。不同區(qū)域的藏木香中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量之間表現(xiàn)出顯著差異，這說明環(huán)境因素對藏木香中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量有著較大的影響，因而有研究認(rèn)為，可以試圖通過嚴(yán)格控制和調(diào)整種植條件來提高藏木香中有效成分的含量[13]。對不同生長年份的藏木香中土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯含量進行比對分析，發(fā)現(xiàn)這2種物質(zhì)含量在藏木香中呈現(xiàn)如下規(guī)律：1年生的藏木香（山南拉康，Z4）>2年生的藏木香>3年生藏木香（山南日當(dāng)，Z6），即藏木香生長越久，其土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯含量可能越少，這與續(xù)艷麗等[16]的研究結(jié)果相反（隨著生長年份的增加，藏木香中土木香內(nèi)酯和異土木香內(nèi)酯逐漸增加）。由于本試驗中1年、3年生藏木香采樣量太小，對于藏木香生長年份對其土木香內(nèi)酯與異土木香內(nèi)酯的影響，還有待進一步研究。此外，除了編號為Z3、Z6、Z7、Z8、Z10、Z11的藏木香外，其余藏木香中異土木香內(nèi)酯含量均高于土木香內(nèi)酯含量，這與文獻(xiàn)所報道的藏木香中異土木香內(nèi)酯含量高于土木香內(nèi)酯含量相一致[16-17]。通過相關(guān)性分析還發(fā)現(xiàn)，藏木香中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量之間呈現(xiàn)極顯著正相關(guān)（P<0.01），相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.907 1，這說明異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯具有較強的關(guān)聯(lián)性，這為藏木香中有效成分的開發(fā)利用研究提供了科學(xué)依據(jù)。

3?結(jié)論與展望

本研究結(jié)合目前對藏木香中主要活性成分的研究現(xiàn)狀，對13份西藏藏木香中的黃酮、多酚、異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯的含量測定分析發(fā)現(xiàn)，西藏藏木香中多酚、黃酮含量普遍較高，其中異土木香內(nèi)酯和土木香內(nèi)酯含量與文獻(xiàn)報道的基本一致，但其含量普遍高于其他產(chǎn)地藏木香，表現(xiàn)極高的藥用價值與保健價值，這為今后西藏藏木香作為保健食品的開發(fā)與利用提供了科學(xué)依據(jù)。

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（責(zé)任編輯?李婷婷）