實時熒光定量RT-PcR在麻疹和風疹病毒檢測中的應(yīng)用

周唯

[摘要]目的：探究實時熒光定量RT-PCR在麻疹和風疹病毒檢測當中的應(yīng)用。方法：以我地區(qū)2018年1月-2019年1月的108例疑似麻疹、風疹患者作為研究對象，采集血清標本與咽拭子標本，分別用ELISA法（酶聯(lián)免疫吸附試驗）檢測免疫球蛋白（IgM）抗體，RT-PCR法檢測核酸。結(jié)果：108例疑似麻疹、風疹患者的血液標本、咽拭子標本當中，其中血清標本中IgM抗體呈陽性的有40例，陽性率是37.0%;在108份咽拭子標本中RT-PCR呈陽性的有64例，陽性率為59.3%。兩種方法檢驗結(jié)果有顯著性差異存在，RT-PCR檢測陽性率要更高于IgM陽性率（x=10.681，P<0.05）。結(jié)論：實時熒光定量RT-PCR可快速診斷麻疹、風疹病毒的病原學，對初診初期麻疹、風疹呈IgM陰性患者還能做進一步的確診，應(yīng)用可靠且有效。

[關(guān)鍵詞]實時熒光定量PCR;麻疹病毒;風疹病毒;酶聯(lián)免疫吸附試驗

[中圖分類號]R440 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2019）15-0223-01

麻疹、風疹是由麻疹病毒和風疹病毒感染引起的急性呼吸道傳染疾病，在實驗室診斷技術(shù)上，主要是使用ELISA法（酶聯(lián)免疫吸附試驗）檢測血清當中麻疹、風疹的特異性IgM抗體，但該方法存在一定的漏檢缺陷。所以，本次實驗我們采用對比分析的方法，采用實時熒光定量PT-PCR技術(shù)檢測麻醉、風疹病毒，匯報其應(yīng)用價值。

1臨床資料和方法

1.1臨床資料：以我地區(qū)2018年1月～2019年1月的108例疑似麻疹、風疹患者作為研究對象，其中男性70例、女性38例，年齡均值是10.7±0.6歲。患者皆有發(fā)熱、皮疹等感染癥狀表現(xiàn)。

1.2方法

1.2.1ELISA法檢測血清IgM抗體：①血清標本的處理：采用無菌注射器抽取患者的靜脈血，并在4℃的條件下以每分鐘2000轉(zhuǎn)的速度做離心處理，10分鐘后，提取血清;②ELISA法檢測：嚴格依據(jù)麻疹、風疹病毒IgM抗體檢測試劑盒說明書進行操作，完成后以空白調(diào)零，經(jīng)酶標儀讀出450nm處吸光度值，依據(jù)于此判斷最終的檢測結(jié)果。

1.2.2RT-PCR檢測核酸：①采集咽拭子：取無菌棉簽，蘸取患者咽部的分泌物，過程當中避免碰觸到口腔黏膜、舌頭和唾液，將3～5ml的病毒標本保存液加入其中，并于接近頂端處將棉簽折斷，在試劑盒當中提取RNA，以用后續(xù)的擴增;②RT-PCR法檢測：規(guī)范依據(jù)麻疹、風疹病毒RNA檢測試劑盒的說明書進行各項操作，在完成反應(yīng)體系配置后，在PCR儀做擴增。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計學處理：所有計數(shù)數(shù)據(jù)皆以例（n）、率（%）的模式闡述，并采用卡方（x）檢驗方法。統(tǒng)計學軟件使用SPSS19.0，P<0.05認定為差異存在顯著性。

2結(jié)果

在本次實驗研究當中共收集的108例疑似麻疹、風疹患者的血液標本、咽拭子標本當中，其中血清標本中IgM抗體呈陽性的有40例，陽性率是37.0%;在108份咽拭子標本中RT-PCR呈陽性的有64例，陽性率為59.3%。兩種方法檢驗結(jié)果有顯著性差異存在，RT-PCR檢測陽性率要更高于IgM陽性率（x=10.681，P<0.05）。

3討論

臨床對麻疹、風疹病毒樣本通常是通過血液或者是鼻咽分泌物進行采集的，以往已有臨床實驗結(jié)果提示，在麻疹、風疹前驅(qū)期或者是患者機體已經(jīng)有皮疹表現(xiàn)的第一天，患者血液或者是呼吸道分泌物當中便能夠分理出麻疹、風疹病毒了。此次實驗研究當中，我們對108例疑似麻疹、風疹患者，對其采集靜脈血或者是咽拭子，分別經(jīng)ELISA法檢測其血清樣本當中的IgM抗體，經(jīng)實時熒光RT-PCR法檢測咽拭子樣本當中麻疹、風疹病毒核酸，所得實驗數(shù)據(jù)結(jié)果提示：108例疑似麻疹、風疹患者的血液標本、咽拭子標本當中，其中血清標本中IgM抗體呈陽性的有40例，陽性率是37.0%;在108份咽拭子標本中RT-PCR呈陽性的有64例，陽性率為59.3%。兩種方法檢驗結(jié)果有顯著性差異存在，RT-PCR檢測陽性率要更高于Ie3V～陽性率（x=10.681，P<0.05）。經(jīng)RT-PCR檢測為陽性結(jié)果的64例患者當中，有26例患者麻疹、風疹病毒IgM抗體檢測結(jié)果提示為陰性，對其原因分析來看，麻疹、風疹I(lǐng)gM抗體在病發(fā)的早期僅有較少的產(chǎn)生甚至是不產(chǎn)生，同時抗體產(chǎn)生伴隨有個體的差異性。可見若是患者正處于發(fā)病的早期，借助血清樣本檢測風疹、麻疹I(lǐng)gM抗體予以確診的方法并不確切可靠，會有漏檢的可能性。如果臨床還是通過麻疹、風疹I(lǐng)gM抗體來做最終的確診的話，就需要在患者初診之后4～28天再做麻疹、風疹I(lǐng)gM抗體檢測，而這也就決定了抗體檢測需要跨越一段較長的時間，由此提示ELISA法對麻疹、風疹的確診有一定局限性存在，具體表現(xiàn)在早期檢測結(jié)果并不理想上，同時又具有耗時長的缺點，因抽血是創(chuàng)傷性操作，所以不排除患者對此很是排斥。

而采用RT-PCR的方法檢測麻疹、風疹病毒核酸簡便且易行，檢測的特異性、靈敏度均要比ELISA檢測方法佳。RT-PCR法將其用于麻疹、風疹病毒核酸的早期快速診斷，若患者為陽性，那么就無需再檢測IgM抗體便能夠予以確診，而且對于那些患者血清IgM抗體呈陰性的，則還可以經(jīng)RT-PCR檢測予以漏檢的彌補。

總結(jié)全文來看，實時熒光定量RT-PCR可快速診斷麻疹、風疹病毒的病原學，對初診初期麻疹、風疹呈IgM陰性患者還能做進一步的確診，應(yīng)用可靠且有效。