高中生物酶切質(zhì)粒連接實(shí)驗(yàn)的驗(yàn)證及分析

勞佳麗

[摘 ?要：本文以高中生物酶切質(zhì)粒連接實(shí)驗(yàn)為主來進(jìn)行分析，在整體的分析過程中，需要堅(jiān)持以酶切質(zhì)粒連接為標(biāo)準(zhǔn)，通過生物的基礎(chǔ)知識來拓展思路設(shè)計(jì)，把酶切和在連接的實(shí)驗(yàn)完善的更加合理，驗(yàn)證高中生物教學(xué)中關(guān)于酶切質(zhì)粒后再連接的關(guān)鍵問題。在整體驗(yàn)證方法上，要以生物學(xué)科中的基礎(chǔ)知識為主，以常見的多聚體和聚合物及其空間結(jié)構(gòu)來實(shí)現(xiàn)粒連接的發(fā)展變化，通過實(shí)驗(yàn)和再實(shí)驗(yàn)來完善結(jié)構(gòu)的最終意義，為學(xué)習(xí)和延伸實(shí)驗(yàn)知識調(diào)整奠定基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞：高中生物;酶切;連接;實(shí)驗(yàn)分析]

對于高中生物學(xué)習(xí)中，最主要的學(xué)習(xí)重點(diǎn)是以基因工程學(xué)為主也是比較難學(xué)一門，但是任何學(xué)科的學(xué)習(xí)都是建立在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)之上，通過實(shí)驗(yàn)的結(jié)論來得出應(yīng)用和分析，但是就目前來說，很多高中學(xué)校在生物學(xué)習(xí)中，過于固化，對操作實(shí)驗(yàn)的條件相對有限，對于生物酶切質(zhì)粒連接實(shí)驗(yàn)上，需要以教學(xué)內(nèi)容為主，通過相關(guān)理論和實(shí)驗(yàn)來完善該技術(shù)的需求，從中對學(xué)生在基因、專業(yè)知識點(diǎn)及其工作原理上的熟悉程度，為實(shí)驗(yàn)的學(xué)習(xí)和應(yīng)用也展開了很大提升空間。

1質(zhì)粒酶切、連接例題解析

1.1以案例為主來進(jìn)行分析

在生物酶案例上，主要從實(shí)驗(yàn)學(xué)生物為主，來完善生物實(shí)驗(yàn)的基本方法，同時(shí)還要結(jié)合混合物的分離和提取為主，進(jìn)行轉(zhuǎn)換或者連接為主要內(nèi)容，在生物酶切質(zhì)粒連接實(shí)驗(yàn)上，主要以基因?qū)W為主展開教學(xué)，我們需要先對教學(xué)設(shè)計(jì)前進(jìn)行合理的分析。首先，在前期的準(zhǔn)備工作中，分析基因?qū)W中的轉(zhuǎn)換和連接對于學(xué)生來說，學(xué)習(xí)難度不大，通過分析教學(xué)的基礎(chǔ)知識，來對什么是基因轉(zhuǎn)換，轉(zhuǎn)換過程中需要結(jié)合限制酶屬于單獨(dú)還是聯(lián)合，所需要的儀器是什么，及其在整個(gè)轉(zhuǎn)化過程中需要注意的事項(xiàng);其次，還要分析每個(gè)酶切質(zhì)中堿基對的成分，最主要的是完全在操作上切割時(shí)，需要得到很長的DNA片段長度和每個(gè)酶切位點(diǎn)的位置，保證每個(gè)DNA分子成為環(huán)狀分子，保證每個(gè)環(huán)節(jié)上不同的長度的線性，一旦發(fā)現(xiàn)各個(gè)電位出現(xiàn)誤差，就要通過聯(lián)合切割進(jìn)行分子，使得DNA連接酶處理酶切產(chǎn)物，最終實(shí)現(xiàn)環(huán)形重組的現(xiàn)象，這一系的循環(huán)都是為后面的解析做鋪墊。

1.2結(jié)合案例進(jìn)行細(xì)節(jié)解析

由上述分析可知，需要以教學(xué)設(shè)計(jì)流程為主，來對生物酶設(shè)計(jì)流程進(jìn)行研究和線索分析，還要結(jié)合轉(zhuǎn)換和連接在對探討生物酶切質(zhì)的過程中，進(jìn)行解析，在解析中需要結(jié)合每個(gè)酶切位點(diǎn)的切割情況來分析，一般這種會選擇兩個(gè)以上的切位點(diǎn)，保證不同的長度中線性不一樣，每個(gè)段位上都會對各個(gè)切割的位置進(jìn)行標(biāo)記，同時(shí)每個(gè)DNA分子來進(jìn)行切割上所產(chǎn)生的連接，也需要進(jìn)行分割，產(chǎn)生一種比較長的DNA片段。在解析的結(jié)果中，發(fā)現(xiàn)基因?qū)W的知識不是只是從書本上去學(xué)習(xí)的，需要通過實(shí)驗(yàn)將酶切質(zhì)的粒連接分析的更加徹底，在酶切除雜的順序時(shí)，會以多種交流和分析及其總結(jié)，找到合適的匹配方案。

1.3結(jié)合實(shí)驗(yàn)來體現(xiàn)生物學(xué)習(xí)的價(jià)值

在上述操作上，教師需要帶著學(xué)生去了解每個(gè)DNA的分組情況，提供足夠的實(shí)驗(yàn)儀器，讓學(xué)生自己去體會基因?qū)W的轉(zhuǎn)化過程，對于高中生新課程改革來說，提出要充分發(fā)揮學(xué)生的主體作用，要讓學(xué)生親身參與實(shí)驗(yàn)探究的過程，通過具體實(shí)踐達(dá)到提升學(xué)生素質(zhì)的目的。在操作過程學(xué)生需要結(jié)合相關(guān)儀器和操作步驟來進(jìn)行解析，在實(shí)驗(yàn)中，每個(gè)聯(lián)合切割DNA分子是否會出現(xiàn)一種酶來發(fā)揮或者產(chǎn)生情況，同時(shí)還要選擇各個(gè)片段進(jìn)行兩個(gè)連接，或者看是否有三片連接，實(shí)現(xiàn)多聚體的結(jié)構(gòu)。

2限制性酶切與連接的實(shí)驗(yàn)

2.1結(jié)合生物實(shí)驗(yàn)來完善酶切質(zhì)粒連接的思路

在進(jìn)行驗(yàn)證限過程中，制酶切質(zhì)連接主要通過酶切中DNA的顆粒和片段再進(jìn)行催化連接，需要通過自我多片段進(jìn)行重新連接，實(shí)現(xiàn)各種可能性。在制定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)前期，需要結(jié)合特定的大腸桿菌質(zhì)粒來進(jìn)行限制酶的切割，每次切割中，先對各個(gè)混合物進(jìn)行綜合，再用DNA連接酶進(jìn)行再次連接，這兩組需要以完整質(zhì)粒進(jìn)行對照電泳，把實(shí)驗(yàn)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，并分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，把所得出的實(shí)驗(yàn)結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，保證各個(gè)酶切質(zhì)中的思路按照正常程序進(jìn)行。

2.2結(jié)合酶切質(zhì)的實(shí)驗(yàn)來分析材料

在這個(gè)過程中會采用大腸桿菌質(zhì)粒，每個(gè)切入點(diǎn)都是以個(gè)酶為單位還有一個(gè)三級切割位點(diǎn)為主，進(jìn)行限制內(nèi)切酶，同時(shí)還要保證DNA在進(jìn)行連接過程中，實(shí)現(xiàn)酶的連接，保證DNA在實(shí)際操作上為實(shí)驗(yàn)的過程奠定基礎(chǔ)。

2.3結(jié)合前期準(zhǔn)備來完善實(shí)驗(yàn)過程

第一，先采用一支的離心管來進(jìn)行對照，在分配比例上需要結(jié)合對照管來進(jìn)行酶切反應(yīng)，還要在每個(gè)管上進(jìn)行標(biāo)簽進(jìn)行，分別采取各個(gè)管進(jìn)行反應(yīng)，對于離心階段上還需要結(jié)合溫度，來控制好速度，選擇一個(gè)合適的管對中質(zhì)粒進(jìn)行限制，避免在切酶過程中出現(xiàn)催化剪切的效果。第二，在每個(gè)離心管上，需要對每個(gè)標(biāo)簽進(jìn)行標(biāo)記，放置在指定的溫度上進(jìn)行合理的分析，保證中間的管內(nèi)進(jìn)行限制酶的失活。在最后的管內(nèi)，需要放入適當(dāng)?shù)腄NA進(jìn)行活性連接酶緩沖混合液，并且合理的構(gòu)建切割產(chǎn)物酶接反。

3總結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果并進(jìn)行合理的分析

主要是通過多組凝膠電泳分析得出以下結(jié)論：對于實(shí)驗(yàn)中比較電泳大的一部分，結(jié)合片段集中進(jìn)行采集，對于部分片段需要控制在指定的區(qū)域內(nèi)，這樣可以完整的保證質(zhì)粒的空間構(gòu)象結(jié)構(gòu)，還以環(huán)狀為主進(jìn)行超螺旋結(jié)構(gòu)。因此在這個(gè)過程中會發(fā)現(xiàn)超螺旋結(jié)構(gòu)的優(yōu)勢，可以通過凝膠來控制酶切成的兩段距離;其次，在進(jìn)行連接酶的作用下，通過理論進(jìn)行連接的過程中，對多聚體和片段進(jìn)行現(xiàn)象分析，對于少許片段來說，需要通過表明在進(jìn)行恢復(fù)連接，保證每個(gè)片段聚合多恢復(fù)原有大分子的趨勢。然而這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果都是建立在需要調(diào)整的狀態(tài)下，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果是有教學(xué)依據(jù)的。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果和分析上，來提高酶切質(zhì)粒連接的實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)，和依據(jù)。

4總結(jié)

綜上所述，本文針對高中生物酶切質(zhì)粒連接實(shí)驗(yàn)來進(jìn)行分析，需要堅(jiān)持以基礎(chǔ)知識為依據(jù)，通過實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)來保證驗(yàn)證結(jié)果，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)來重點(diǎn)加強(qiáng)分析依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1]張玉林.基因工程中限制酶切割的幾個(gè)問題[J].中學(xué)生物學(xué)，2012，4.

[2]朱旭芬.基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（第三版）[M].高等教育出版社，2016：33-36.

[3]朱旭芬.基因工程實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)（第三版）[M].高等教育出版社，2016：30-33.