菊花水提物的質(zhì)量控制成分篩選及其網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用研究

韓星 李雪巖 楊海洋 江曉泉 溫浩然 冀艷華 汪國(guó)鵬 劉洋

中圖分類號(hào) R285 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2019）23-3258-08

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.23.16

摘 要 目的：基于多成分代謝篩選菊花的質(zhì)量控制成分，并研究其網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用。方法：制備菊花水提物樣品溶液。選取1只大鼠，腹腔麻醉后取其空腸段灌流菊花水提物，采用雙灌流采血法收集血漿樣品1;另選3只大鼠灌胃菊花水提物，采用腹主動(dòng)脈采血法收集血漿樣品2。采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法分析菊花水提物及血漿樣品成分，并鑒定菊花水提物經(jīng)代謝后的原型入血成分。采用中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)及分析平臺(tái)（TCMSP）和Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)檢索篩選原型入血成分的核心靶點(diǎn)，并利用DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)核心靶點(diǎn)的相關(guān)通路進(jìn)行富集，再根據(jù)拓?fù)鋮?shù)篩選出質(zhì)量控制成分，并采用Cytoscape 3.7.1 軟件分析菊花質(zhì)量控制成分的藥理作用。結(jié)果：經(jīng)UPLC-MS/MS分析后，菊花水提物中共鑒定27個(gè)化合物，其中鑒定出原型入血成分共12個(gè)。經(jīng)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析后共確定7個(gè)質(zhì)量控制成分，分別是大波斯菊苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素、田薊苷、芹菜素、橙皮素、金合歡素，其可通過(guò)作用于代謝通路、癌癥相關(guān)通路、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)通路、脂肪細(xì)胞脂解調(diào)控作用通路等治療癌癥、心腦血管疾病、神經(jīng)疾病等。結(jié)論：本研究篩選了菊花水提物的可能質(zhì)量控制成分，并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)初步明確其藥理作用，可為菊花藥材的利用提供新的思路。

關(guān)鍵詞 多成分代謝;網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué);質(zhì)量控制成分;菊花水提物;藥理作用

Study on Quality Control Components in Water Extract of Chrysanthemum morifolium and Network Pharmacology Effects

HAN Xing1，LI Xueyan1，YANG Haiyang1，JIANG Xiaoquan1，WEN Haoran1，JI Yanhua1，WANG Guopeng2，LIU Yang1（1.College of TCM， Beijing University of TCM， Beijing 102488， China;2.Zhongcai Health （Beijing） Biological Technology Development Co.， Ltd.， Beijing 101503， China）

ABSTRACT ? OBJECTIVE： To screen the quality control components of Chrysanthemum morifolium based multiple component metabolism， and study its network pharmacology effect. METHODS： The water extract of C. morifolium was prepared. A total of one rats were selected， water extract of C. morifolium was perfused in jejunum segment after abdominal anesthesia; plasma sample 1 was collected by double perfusion collection. Other 3 rats were given water extract of C. morifolium intragastrically， and plasma sample 2 was collected by abdominal aorta blood collection. UPLC-MS/MS was used to analyze water extract of C. morifolium and plasma sample component， and prototype blood-entry component in water extract of C. morifolium was identified after metabolism. TCMSP and Swiss Target Prediction database were used to screen the core target of prototype blood-entry component. DAVID database was used to enrich the related pathways of core target. The quality control components were screened according to topological parameters. Cytoscape software was used to analyze pharmacological effect of quality control components of C. morifolium. RESULTS： After UPLC-MS/MS analysis， 27 compounds were identified in water extract of C. morifolium， among which there were 12 prototype blood-entry components. After network pharmacology analysis， 7 quality control components were identified， i.e. cosmosiin， apigenin-7-O-glucuronide， luteolin， tilianin， apigenin， hesperetin， acacetin. It was possible to treat cancer， cardiovascular and cerebrovascular diseases， and neurological diseases by acting on metabolic pathway， cancer related pathway， signal transduction related pathway， adipocyte lipolysis regulatory pathway， etc. CONCLUSIONS： The study screen the possible quality control components of water extract of C. morifolium. The theoretical pharmacological effect of it can be clarified through network pharmacology， which can provide a new idea for the utilization of C. morifolium.

KEYWORDS ? Multiple component metabolism; Network pharmacology; Quality control component; Water extract of Chrysanthemum morifolium; Pharmacological effect

中藥的化學(xué)成分復(fù)雜，具有多成分、多靶點(diǎn)的特點(diǎn)，其代謝產(chǎn)物豐富，故很難控制中藥的質(zhì)量。目前，為了保證中藥的安全性和有效性，指紋圖譜和篩選代表性成分是常用的兩種方法[1]?，F(xiàn)行的2015年版《中國(guó)藥典》中多以1種或幾種指標(biāo)成分含量的高低來(lái)評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的優(yōu)劣，但很多成分既缺乏專屬性，也沒(méi)有生物活性，無(wú)法應(yīng)用于實(shí)際臨床研究[2]。對(duì)于中藥的質(zhì)量評(píng)價(jià)來(lái)說(shuō)，最關(guān)鍵的是要找到與該中藥藥效相關(guān)聯(lián)的成分，才能從根本上控制中藥的質(zhì)量。中藥成分復(fù)雜，但并不是每種成分都能發(fā)揮藥效作用，藥物經(jīng)口服后，其活性成分或次級(jí)代謝物最終均會(huì)進(jìn)入血液，并作用于靶點(diǎn)，因此，進(jìn)入血液的成分才可能是潛在的藥效物質(zhì)。

菊花為菊科植物菊（Chrysanthemum morifolium Ramat.）的干燥頭狀花序，具有散風(fēng)清熱、平肝明目、清熱解毒的功效[3-4]。菊花中含有多種黃酮類化合物、多酚類化合物、揮發(fā)油、氨基酸等，現(xiàn)代藥理研究表明，菊花對(duì)心血管疾病具有較好的治療效果，同時(shí)還具有抗氧化、抑菌、抗腫瘤、抗炎等作用[5-6]。由于菊花的化學(xué)成分復(fù)雜，在不同標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)中對(duì)其質(zhì)量評(píng)價(jià)的指標(biāo)性成分選擇具有多樣化，有的選用總黃酮和總揮發(fā)油，有的選擇黃酮或酚酸類成分，但是卻沒(méi)有提及將入血成分作為質(zhì)量控制成分[7-8]。網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)從整體考慮藥物與疾病的相關(guān)性，強(qiáng)調(diào)從藥物、靶點(diǎn)、疾病間相互作用的系統(tǒng)性和整體性出發(fā)，反映中藥的多成分-多靶點(diǎn)作用關(guān)系[9-11]。由于中藥的代謝情況復(fù)雜，多成分代謝是動(dòng)物體內(nèi)代謝研究最理想的分析方法[12]。本研究以菊花為研究對(duì)象，采用多成分代謝方法和超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-MS/MS）法鑒定菊花原型入血成分，黃酮類化合物和有機(jī)酸類化合物是菊花的主要化學(xué)成分，且在臨床應(yīng)用中具有多種藥理活性[6]，故本研究選擇菊花中常見(jiàn)的黃酮類及有機(jī)酸類化合物作為對(duì)照品進(jìn)行分析，結(jié)合網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建“菊花原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，篩選出菊花的質(zhì)量控制成分，并進(jìn)行其網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用分析。

1 材料

1.1 儀器

UltiMate 3000超高效液相色譜儀（美國(guó)賽默飛世爾科技公司）;BT-100-1F蠕動(dòng)泵、LSP02-1B注射泵（保定蘭格恒流泵有限公司）;電熱恒溫水浴鍋（北京科偉永興儀器有限公司）;渦旋機(jī)（海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司）;BSA124S萬(wàn)分之一天平（德國(guó)賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

菊花藥材（產(chǎn)地：河南安陽(yáng)，批號(hào)：2017110657）購(gòu)自河北林生生物科技有限公司，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院鑒定教研室王晶娟副教授鑒定為真品;1，3-O-二咖啡奎寧酸（批號(hào)：111717-201402，純度：94.5%）、4，5-O-二咖啡奎寧酸（批號(hào)：111894- 201102，純度：94.1%）、木犀草素（批號(hào)：111520-201605，純度：99.6%）、田薊苷（批號(hào)：18081445，純度：98.0%）、芹菜素（批號(hào)：111901- 201603，純度：99.2%）、咖啡酸（批號(hào)：110885-201703，純度：99.7%）、綠原酸（批號(hào)：110753-201817，純度：96.8%）、槲皮苷（批號(hào)：111538-201606，純度：90.6%）、香葉木素（批號(hào)：111788-200801，純度：95.7%），上述對(duì)照品均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院;3，5-O-二咖啡?？鼘幩幔ㄅ?hào)：Y24N8Y49009，純度：≥98.0%）、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷（批號(hào)：Z18A7Z13273，純度：≥98.0%）、圣草酚（批號(hào)：Y19S9H70757，純度：≥98.0%）、橙皮素（批號(hào)：C03F6Y1，純度：≥98.0%）、金合歡素（批號(hào)：C12O8Q45551，純度：≥98.0%），上述對(duì)照品均購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司;大波斯菊苷（批號(hào)：18081541，純度：≥98.0%）、香葉木素-7-O-葡萄糖苷（批號(hào)：Y25D6H8203，純度：≥96.0%），上述對(duì)照品均購(gòu)自上海同田生物技術(shù)股份有限公司;乙腈、甲醇、甲酸為色譜純，水為純凈水。

1.3 動(dòng)物

SD大鼠，♂，SPF級(jí)，體質(zhì)量200～250 g，購(gòu)自斯貝福（北京）生物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可合格證號(hào)：SCXF（京）20150015。本研究已通過(guò)北京中醫(yī)藥大學(xué)倫理部的倫理審批。實(shí)驗(yàn)前將大鼠置于晝夜節(jié)律光照條件下，自由進(jìn)食進(jìn)水，適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d。

2 方法

2.1 菊花水提物與菊花對(duì)照品的制備

2.1.1 菊花水提物的制備 取菊花藥材1 g，加入100 mL蒸餾水回流1 h，放冷后過(guò)0.22 μm濾膜，棄粗濾液，即得菊花水提物供試品溶液。

2.1.2 菊花各成分對(duì)照品溶液的制備 分別取“1.2”項(xiàng)下菊花的對(duì)照品適量，分別用甲醇超聲（功率：200 W，頻率：40 kHz）溶解，再用0.22 μm濾膜過(guò)濾，即得相應(yīng)對(duì)照品溶液。

2.2 色譜與質(zhì)譜條件

2.2.1 色譜條件 色譜柱：CORTECS UPLC T3（100 ?mm×2.1 mm，1.6 μm）;流速：0.3 mL/min;流動(dòng)相：0.1%甲酸（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～1 min，95%→95%A;1～20 min，95%→5%A;20～21 min，5%A;21～21.1 min，5%→95%A;21.1～22 min，95%A）;進(jìn)樣量：5 μL;檢測(cè)波長(zhǎng)：190～400 nm[二極管陣列檢測(cè)器（DAD）];柱溫：40 ℃。

2.2.2 質(zhì)譜條件 電噴霧電離源;正、負(fù)離子檢測(cè)模式;掃描范圍：質(zhì)荷比（m/z）100～1 500;噴霧電壓： +3.5 kV（正離子模式），+3.0 kV（負(fù)離子模式）;鞘氣體積流量：35 arb;輔助氣體積流量：10 arb;輔助氣溫度：250 ℃;離子傳輸管溫度：300 ℃;掃描模式：Full MS/dd-MS2，F(xiàn)ull MS分辨率：70 000，dd-MS2分辨率：17 500;碰撞能：20、30、40 eV。

2.3 菊花成分分析

取“2.1”項(xiàng)下菊花水提物和對(duì)照品溶液，按“2.2”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣，采用Xcalibur軟件（網(wǎng)址為https：//thermo-xcalibur.updatestar.com/）分析各成分峰的分子離子和碎片離子信息，結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)以及對(duì)照品對(duì)菊花水提物的化學(xué)成分進(jìn)行鑒定。

2.4 菊花多成分代謝分析

取禁食12 h大鼠（不禁水）4只，腹腔麻醉，腹主動(dòng)脈采血用于補(bǔ)充手術(shù)過(guò)程中損失的血液。另取1只同樣禁食大鼠腹腔麻醉，選取約10 cm空腸段作為供試腸段，結(jié)扎肝門(mén)靜脈和實(shí)驗(yàn)用腸段以外的血管;用生理鹽水沖洗腸段后，在腸段灌流250 mL菊花水提物;小心剖離頸靜脈后插入靜脈留置針，進(jìn)行頸靜脈輸血腸系膜靜脈采血，連續(xù)采血2 h，作為血漿樣品1[12]。同時(shí)用傳統(tǒng)方法進(jìn)行佐證，取3只大鼠進(jìn)行菊花水提物灌胃（4 mL）處理，0.5 h后于腹主動(dòng)脈采集血液，作為血漿樣品2。收集后的血液經(jīng)離心（4 000 r/min）后取上清液1.5 mL，分別加3倍甲醇沉淀蛋白，渦旋1 min，再放置5 min后10 000 r/min離心10 min，取上清液用氮?dú)夤薮蹈珊笤儆?.5 mL甲醇復(fù)溶，過(guò)0.22 μm濾膜，按“2.2”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣，分析菊花原型入血成分。

2.5 原型入血成分核心靶點(diǎn)的收集

將“2.4”項(xiàng)下得到的菊花原型入血成分代入中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)與分析平臺(tái)（TCMSP）數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）和Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為http：//www.swisstargetprediction.ch/），收集并整理原型入血成分所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息。TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)是一個(gè)全面的中藥成分系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)，用于查詢作用靶點(diǎn)等信息[13];Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)是根據(jù)反向藥效團(tuán)匹配方法來(lái)預(yù)測(cè)原型入血成分的活性成分靶標(biāo)[14-15];基于此，筆者將每個(gè)成分對(duì)應(yīng)靶點(diǎn)排名前20的作為關(guān)鍵靶點(diǎn)，再將原型入血成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)通過(guò)Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建“原型入血成分-關(guān)鍵靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)圖，再以度值的2倍中位數(shù)為卡值，將符合條件的關(guān)鍵靶點(diǎn)作為核心靶點(diǎn)。

2.6 “原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)（網(wǎng)址為https：//david.ncifcrf.gov/）是一個(gè)生物信息數(shù)據(jù)庫(kù)，將生物學(xué)數(shù)據(jù)和分析工具整合為一體，可用于京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）和基因功能（GO）的通路富集分析[16]。將“2.5”項(xiàng)下篩選的核心靶點(diǎn)帶入到DAVID數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行通路富集分析，選擇滿足P<0.01的通路進(jìn)行分析[17]，并用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建“原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖。在網(wǎng)絡(luò)中，節(jié)點(diǎn)表示化合物、靶點(diǎn)或通路，每條邊表示不同節(jié)點(diǎn)之間的相互作用關(guān)系，一個(gè)節(jié)點(diǎn)的度值表示網(wǎng)絡(luò)中和節(jié)點(diǎn)相連的路線的條數(shù)，度值越大表明該節(jié)點(diǎn)越重要;介度中心數(shù)考慮了節(jié)點(diǎn)對(duì)信息流的控制力，該參數(shù)表示經(jīng)過(guò)一個(gè)節(jié)點(diǎn)的最短路徑數(shù)越多，這個(gè)節(jié)點(diǎn)越重要;接近中心性表示節(jié)點(diǎn)與網(wǎng)絡(luò)中其他所有節(jié)點(diǎn)聯(lián)系的密切程度的最短路徑距離平均值的倒數(shù)，該值越大則與其他節(jié)點(diǎn)聯(lián)系越緊密[18-19]。

2.7 菊花質(zhì)量控制成分的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用分析

基于“2.6”項(xiàng)下得到的“原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，用Analyze Network功能計(jì)算該網(wǎng)絡(luò)圖各節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)，以節(jié)點(diǎn)連接度、接近中心性和介度中心數(shù)的中位數(shù)為卡值，選取同時(shí)滿足3個(gè)卡值的成分作為菊花的質(zhì)量控制成分，再采用Cytoscape 3.7.1軟件進(jìn)一步構(gòu)建“質(zhì)量控制成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)，并研究菊花質(zhì)量控制成分的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用。

3 結(jié)果

3.1 菊花成分分析結(jié)果

經(jīng)UPLC-MS/MS分析后，菊花對(duì)照品的總離子流圖見(jiàn)圖1。菊花水提物在正、負(fù)離子模式下的總離子流圖見(jiàn)圖2。

結(jié)合圖1和圖2及相關(guān)參考文獻(xiàn)[12，20-22]，共鑒定出27個(gè)化合物，其中有23個(gè)黃酮類化合物和4個(gè)有機(jī)酸類化合物。其中，化合物2、4、5、12～14、16～19、21～23、25～27是通過(guò)與菊花對(duì)照品對(duì)比鑒定得出，其余化合物均與參考文獻(xiàn)對(duì)比鑒定得出，其他未知成分還有待進(jìn)一步鑒別。菊花水提物中各化合物的具體信息見(jiàn)表1。

3.2 菊花水提物的多成分藥物代謝分析

將血漿樣品1和血漿樣品2與菊花水提物中成分進(jìn)行對(duì)比分析，明確原型入血成分。血漿樣品1中共鑒定得到5個(gè)原型入血成分;血漿樣品2中共得到10個(gè)原型入血成分。結(jié)合這2種代謝方法分析后確定，菊花水提物經(jīng)各部位代謝后共有12個(gè)原型入血成分，分別為咖啡酸、1，3-O-二咖啡奎寧酸、3，5-O-二咖啡奎寧酸、大波斯菊苷、4，5-O-二咖啡奎寧酸、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、圣草酚、木犀草素、田薊苷、芹菜素、橙皮素和金合歡素。菊花水提物中原型入血成分的總離子流圖見(jiàn)圖3。

3.3 菊花水提物中原型入血成分的核心靶點(diǎn)分析

將菊花水提物經(jīng)代謝后的12個(gè)原型入血成分帶入TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)和Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)后，收集并整理原型入血成分所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)信息，去重后共計(jì)獲得154個(gè)靶點(diǎn)。用Cytoscape 3.7.1軟件構(gòu)建原型入血成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，再以度值的2倍中位數(shù)為卡值，共篩選到23個(gè)核心靶點(diǎn)，如腫瘤壞死因子（TNF）、白細(xì)胞介素2（IL-2）、前列腺素環(huán)氧合酶2（PTGS2）。

3.4 “原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖構(gòu)建

在“原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖中，共110個(gè)節(jié)點(diǎn)、290條邊?！霸腿胙煞?核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖見(jiàn)圖4。

3.5 菊花質(zhì)量控制成分的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)作用分析

采用Cytoscape 3.7.1 軟件中的Analyze Network功能計(jì)算“原型入血成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖中110個(gè)節(jié)點(diǎn)的拓?fù)鋮?shù)，以節(jié)點(diǎn)連接度、接近中心性和介度中心數(shù)的中位數(shù)3、0.385 2、0.002 5為卡值選取同時(shí)滿足3個(gè)卡值的化合物作為菊花的質(zhì)量控制成分，結(jié)果，共篩選出大波斯菊苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素、田薊苷、芹菜素、橙皮素、金合歡素7個(gè)化合物作為菊花的質(zhì)量控制成分。

利用Cytoscape 3.7.1軟件對(duì)7個(gè)質(zhì)量控制成分對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)與通路進(jìn)行整合，構(gòu)建“質(zhì)量控制成分-核心靶點(diǎn)-通路”網(wǎng)絡(luò)圖，見(jiàn)圖5。7個(gè)質(zhì)量控制成分可作用于21個(gè)核心靶點(diǎn)（23個(gè)核心靶點(diǎn)中有2個(gè)靶點(diǎn)與質(zhì)量控制成分不相關(guān)，故剔除），涉及相關(guān)通路75條。度值排名前5的靶點(diǎn)有磷脂醇-3-激酶（PIK3CG）、表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR）、TNF、PTGS2和IL-2，度值越大說(shuō)明該節(jié)點(diǎn)越關(guān)鍵。將上述核心靶點(diǎn)進(jìn)行文獻(xiàn)驗(yàn)證，結(jié)果表明，PIK3CG編碼蛋白屬于磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K） 的亞型，可用于治療慢性支氣管炎和冠心病等[23-24];EGFR、TNF、IL-2、PTGS2均可參與炎癥反應(yīng)，可發(fā)揮抗炎、抑菌、抗腫瘤等作用[25-27]。通路的富集結(jié)果顯示，質(zhì)量控制成分的關(guān)鍵靶點(diǎn)主要與代謝通路（如氮素代謝）、癌癥相關(guān)通路（如前列腺癌）、細(xì)胞生長(zhǎng)分化增殖通路（如T細(xì)胞受體信號(hào)通路、PI3K信號(hào)通路）、脂肪調(diào)控作用通路（如脂肪細(xì)胞脂解調(diào)節(jié)信號(hào)通路）、神經(jīng)調(diào)節(jié)相關(guān)通路（如蛋白酪氨酸激酶受體信號(hào)通路）等有關(guān)。由此推測(cè)菊花中的質(zhì)量控制成分理論上在治療癌癥、心腦血管疾病、神經(jīng)疾病等方面有一定的功效，同時(shí)會(huì)發(fā)揮抗炎、促進(jìn)代謝等作用。

4 討論

目前，多數(shù)研究中藥或中藥復(fù)方的代謝情況，僅反映了藥物在血漿、膽汁、尿液及糞便的最終代謝情況，未能反映藥物在每個(gè)部位的代謝情況。而多成分代謝的在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)代謝研究是最理想的具體代謝部位研究方法[12]，本研究以在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)為基礎(chǔ)，將在體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)合灌流和輸血技術(shù)，在代謝部位長(zhǎng)時(shí)間、高含量獲得多成分代謝樣品，探究了多成分體內(nèi)動(dòng)態(tài)代謝情況，更加真實(shí)地反映了其在體內(nèi)的吸收代謝輪廓。該方法基于原型入血成分是潛在的藥效物質(zhì)，不僅可以排除中藥中大量無(wú)效成分的干擾，鎖定絕大部分藥效成分，而且能夠明確各成分的代謝變化規(guī)律。

關(guān)鍵靶點(diǎn)的通路富集分析發(fā)現(xiàn)，菊花能影響不同功能的通路。信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)通路如PI3K/蛋白激酶信號(hào)通路與心腦血管疾病和細(xì)胞分化功能有關(guān)，經(jīng)文獻(xiàn)[6]驗(yàn)證菊花具有舒張血管、改善心肌缺血及心肌缺血再灌注、抗心律失常和降血壓、降血脂等作用。關(guān)鍵靶點(diǎn)作用于脂肪細(xì)胞脂解通路和代謝通路，其機(jī)制可能與通過(guò)增加肝中的過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體（PPAR），調(diào)節(jié)與脂代謝相關(guān)的靶基因肝細(xì)胞固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SREBP-1c）、脂肪酸合成酶（FAS）、脂蛋白脂肪酶（LPL）等的表達(dá)以及增加肝的抗氧化作用有關(guān)[28]。菊花對(duì)前列腺癌有一定的抑制作用，研究表明菊花中的抗癌物質(zhì)主要為木犀草素和芹菜素等，主要通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞增長(zhǎng)和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡來(lái)抑制癌癥[29]。

綜上所述，本文最終確定大波斯菊苷、芹菜素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素、田薊苷、芹菜素、橙皮素、金合歡素7個(gè)成分為菊花質(zhì)量控制成分，并基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析其藥理作用，以期為菊花藥材的利用提供新的思路。

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（收稿日期：2019-07-01 修回日期：2019-09-15）

（編輯：唐曉蓮）