HPLC法測(cè)定乙肝解毒膠囊中鹽酸小檗堿的含量

周妍　李巖

摘要：目的：建立以HPLC法檢測(cè)乙肝解毒膠囊中鹽酸小檗堿的含量測(cè)定。方法： 色譜柱為迪馬C18柱;流動(dòng)相為乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液（24：76）;流速為0.8mL/min;柱溫：25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm。結(jié)果：鹽酸小檗堿濃度在0.0240～0.2160?g/mL范圍內(nèi)與其峰面積線性關(guān)系良好，r=1.0000;平均回收率為100.33%，RSD=0.57%（n=6）。結(jié)論：本法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于乙肝解毒膠囊質(zhì)量控制的方法。

關(guān)鍵詞：乙肝解毒膠囊;鹽酸小檗堿;高效液相色譜法

【中圖分類(lèi)號(hào)】R821.4+2???? 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A?????? 【文章編號(hào)】1004-7484（2019）10-0072-02

Determination of Berberine in Yiganjiedu Capsules by HPLC

Zhang jin，Li wenjun

Tonghua Institute for Food and Drug Control，Jilin Province，Tonghua 134000

ABSTRACT：Objective To establish an HPLC method for determination of berberine in Yiganjiedu Capsules.Methods? HPLC analysis was carried out on a Diamonsil C18 column;Using acetonitrile-0.05mol·L-1 potassium dihydrogen phosphate solution（24：76）; the flow rate was 0.8 mL·min-1;the column temperature was set at 25℃;the detection wavelength was 265nm.Results A good linear correlation of berberine was observed within the range of 0.0240～0.2160?g·mL-1，r=1.0000;The average recovery was 100.33%，RSD =0.57%（n=6）.Conclusion The method is rapid，simple and accurate，which can be used for the quality control of Yiganjiedu Capsules.

KEY WORDS： Yiganjiedu Capsules;berberine;HPLC

乙肝解毒膠囊是由黃柏、拳參、黃芩等八味藥材組成，具有清熱解毒，疏肝利膽的功效，用于治療乙型肝炎[1-8]。黃柏為方中主藥，主要含有鹽酸小檗堿、巴馬亭（palmatine）、藥根堿（jatrorrhizine）、黃柏堿（phellodendrine）等。具有清熱燥濕，瀉火除蒸，解毒療瘡與本品的功能主治有密切關(guān)系[9-12]。為了有效地控制乙肝解毒膠囊的內(nèi)在質(zhì)量，我們以黃柏中的鹽酸小檗堿作為指標(biāo)性成分，采用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，方法易于操作，結(jié)果準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，專(zhuān)屬性強(qiáng)[13-16]。

1? 儀器與試藥

日本島津LC-2010AHT高效液相色譜儀;賽多利斯電子分析天平;日本島津UV1700型紫外分光光度計(jì)。

鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)： 110713-201814）;乙肝解毒膠囊（市售，批號(hào)：20180920.20181102。181101）乙腈為色譜純，水為純化水，其它試劑均為分析純。

2? 方法與結(jié)果

2.1? 色譜條件：色譜柱為迪馬C18（4.6×250mm，5?m）;流動(dòng)相為乙腈-0.05 mol/L磷酸二氫鉀溶液（24：76）;流速為0.8mL/min;柱溫為25℃;檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm;進(jìn)樣量為10?l，理論板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算應(yīng)不低于4000。

2.2? 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加1%鹽酸甲醇溶液制成每1ml含10?g的溶液，即得。

2.3? 供試品溶液的制備：取本品裝量差異項(xiàng)下的內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約1g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，加入1%鹽酸甲醇溶液80ml，超聲處理40分鐘，濾過(guò)，濾液置100ml容量瓶中，用少量1%鹽酸甲醇溶液洗滌容器及殘?jiān)?，洗液濾于同一容量瓶中，加1%鹽酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4? 陰性對(duì)照溶液的制備：按處方比例配成不含黃柏的陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法，制成陰性對(duì)照溶液。按上述液相色譜條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明，陰性對(duì)照溶液色譜圖中與對(duì)照品相同保留時(shí)間處無(wú)干擾見(jiàn)圖1。

2.5? 線性關(guān)系考察：精密稱(chēng)取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，加1%鹽酸甲醇溶液溶解并稀釋?zhuān)频脻舛葹?2.0?g/ml的對(duì)照品溶液，分別精密吸取2、6、10、14、18?l測(cè)定（平行兩次），以峰面積對(duì)鹽酸小檗堿濃度回歸，得回歸方程：Y=4843052.083x-4404.05? （r=1.0000），結(jié)果表明鹽酸小檗堿在0.0240～0.2160?g/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6? 精密度試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液10?l，注入液相色譜儀，重復(fù)進(jìn)樣6次，結(jié)果鹽酸小檗堿峰面積平均值為576525，RSD為0.25%（n=6）。

2.7? 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品，按“2.3”項(xiàng)下操作方法獨(dú)立測(cè)定六次，用外標(biāo)法計(jì)算鹽酸小檗堿含量，平均值為0.3mg/粒;RSD為0.31%（n=6）。

2.8? 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一批樣品的供試品溶液，分別于0、2、4、8、12h，按上述色譜條件測(cè)定，鹽酸小檗堿峰面積平均值為576867，RSD為0.17%。結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.9? 回收率試驗(yàn)：精密稱(chēng)取已知含量為0.30mg/粒的樣品適量（6份），分別精密加入對(duì)照品溶液（0.0131mg/ml）20ml，按“2.3”項(xiàng)下操作，作為試驗(yàn)溶液;按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1

2.10? 樣品測(cè)定：取3批樣品，按“2.3” 項(xiàng)下操作，進(jìn)樣10?l，按外標(biāo)法計(jì)算鹽酸小檗堿含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

3? 討論

3.1? 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

取鹽酸小檗堿對(duì)照品的甲醇溶液，經(jīng)UV-1700紫外分光光度計(jì)200～400nm范圍內(nèi)掃描，結(jié)果鹽酸小檗堿在265.0nm波長(zhǎng)處，有最大吸收，故選擇265nm作為測(cè)試波長(zhǎng)。

3.2? 提取時(shí)間的考察

參照有關(guān)資料對(duì)提取方法、時(shí)間進(jìn)行考察，先采用取本品加1%鹽酸甲醇溶液超聲30，40，60min，結(jié)果表明超聲40min時(shí)的含量比30min時(shí)高，與60min時(shí)含量相近。又采用加熱回流的40，60min，結(jié)果其含量與超聲40min相近。因此采用加1%鹽酸甲醇溶液超聲40min制備供試品溶液。

3.3 樣品提取方法的考察：我們采用了三氯甲烷50ml與濃氨試液1ml，密塞，輕輕振搖，稱(chēng)定重量，放置24小時(shí)及精密加入氫氧化鈉試液3ml，放置30分鐘，再精密加入三氯甲烷20ml，稱(chēng)定重量，加熱回流2小時(shí)。結(jié)果后者提取方法即節(jié)省時(shí)間又提取充分，因此我們采用正文所述的供試品溶液的制備方法。

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作者簡(jiǎn)介：張進(jìn)，男，副主任藥師，研究方向：藥品檢驗(yàn)。