血清Ang-2、VEGF、PCDGF在非小細(xì)胞肺癌中的診斷價(jià)值

孟凡亮 陳亞新 高建榮

摘要：目的? 探討血清血管生成素2（Ang-2）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）、 畸胎瘤細(xì)胞衍生生長(zhǎng)因子（PCDGF）及癌胚抗原（CEA）、鱗狀細(xì)胞癌抗原（SCC）與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，判斷其在非小細(xì)胞肺癌聯(lián)合診斷中的價(jià)值。方法? 收集2017年9月～2018年4月就診于安醫(yī)大附屬巢湖醫(yī)院呼吸內(nèi)科，經(jīng)病理確診的48例原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌患者，收集患者臨床病理資料，年齡、性別、吸煙、病理、分期、轉(zhuǎn)移程度，并采用ELISA 法檢測(cè)48例非小細(xì)胞肺癌患者血清中Ang-2、VEGF、PCDGF含量及電化學(xué)發(fā)光檢測(cè)CEA、SCC的含量。診斷效能評(píng)價(jià)指標(biāo)用ROC曲線分析，以敏感度、特異度、正確率表示。結(jié)果在鱗癌患者中Ang-2含量高于腺癌患者（P<0.05）;PCDGF在年齡≤60歲的患者中的水平低于年齡>60歲的患者（P<0.01）;對(duì)于局部轉(zhuǎn)移的非小細(xì)胞肺癌患者血清VEGF含量高于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者（P<0.05）;Ang-2+PCDGF聯(lián)合檢測(cè)診斷肺鱗癌靈敏度和正確率均為最高，分別為82.76%和75.00%。結(jié)論? Ang-2、PCDGF聯(lián)合檢測(cè)對(duì)于肺鱗癌的診斷價(jià)值最高，VEGF能夠更好預(yù)測(cè)非小細(xì)胞肺癌局部轉(zhuǎn)移，CEA仍然是腺癌的最敏感的標(biāo)記物。

關(guān)鍵詞：血清血管生成素2;血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子;畸胎瘤細(xì)胞衍生生長(zhǎng)因子;非小細(xì)胞肺癌

中圖分類號(hào)：R734.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.15.021

文章編號(hào)：1006-1959（2019）15-0066-04

Abstract：Objective? To investigate serum angiopoietin 2 （Ang-2）， vascular endothelial growth factor （VEGF）， teratoma cell-derived growth factor （PCDGF） and carcinoembryonic antigen （CEA）， squamous cell carcinoma antigen （SCC） and non-small The relationship between clinical pathological parameters of lung cancer and its value in the combined diagnosis of non-small cell lung cancer.Methods? From September 2017 to April 2018， we received 48 patients with primary non-small cell lung cancer diagnosed by pathology in the Department of Respiratory Medicine， Chaohu Hospital， Anyang University. The clinical and pathological data were collected. Age， sex， smoking， pathology， The levels of Ang-2， VEGF and PCDGF in serum of 48 patients with non-small cell lung cancer were detected by ELISA. The contents of CEA and SCC were detected by electrochemiluminescence. The diagnostic efficacy evaluation index was analyzed by ROC curve and expressed by sensitivity， specificity and correct rate.Results? The level of Ang-2 was higher in patients with squamous cell carcinoma than in adenocarcinoma patients（P<0.05）; the level of PCDGF in patients aged ≤60 years was lower than that in patients >60 years old （P<0.01）; the serum VEGF level in patients with locally metastatic non-small cell lung cancer was higher than patients with distant metastasis （P<0.05）; the sensitivity and correct rate of Ang-2+PCDGF combined detection for lung squamous cell carcinoma were the highest， 82.76% and 75.00%， respectively.Conclusion? The combined detection of Ang-2 and PCDGF has the highest diagnostic value for lung squamous cell carcinoma. VEGF can better predict the local metastasis of non-small cell lung cancer. CEA is still the most sensitive marker for adenocarcinoma.

Key words：Serum angiopoietin 2;Vascular endothelial growth factor;Teratoma cell-derived growth factor;Non-small cell lung cancer

肺癌（lung cancer，LC）是全球癌癥和與癌癥相關(guān)的死亡的主要原因。非小細(xì)胞肺癌（Non-small cell lung cancer，NSCLC）占大多數(shù)，約85%[1]，其余大部分為小細(xì)胞肺癌，LC的早期診斷和適當(dāng)?shù)闹委煂?duì)預(yù)后的改善至關(guān)重要，治療的關(guān)鍵問(wèn)題是病理組織學(xué)診斷和分期[2]。新的生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)不僅可以作為新療法的一部分，而且可以了解和評(píng)估哪些患者可以從哪些治療中受益[3]，腫瘤標(biāo)志物在許多惡性腫瘤的患者管理中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。血清腫瘤標(biāo)志物的潛在用途包括幫助早期診斷、確定預(yù)后、前瞻性地預(yù)測(cè)對(duì)特定治療的反應(yīng)或耐藥性、初級(jí)手術(shù)后的監(jiān)測(cè)以及監(jiān)測(cè)晚期疾病患者的治療。目前血管生成素-2（angiopoietin-2，Ang-2）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）和畸胎瘤源性細(xì)胞生長(zhǎng)因子（PC cell-derived growth factor，PCDGF）都是機(jī)體內(nèi)重要的細(xì)胞因子，Ang-2 是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)新型的與腫瘤血管生成相關(guān)一種細(xì)胞因子，促進(jìn)新生血管的形成[4];VEGF是血管生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子，可以調(diào)控腫瘤細(xì)胞組織周圍血管的增生過(guò)程[5];PCDGF 是一種分泌型糖蛋白，具有促進(jìn)細(xì)胞增殖、發(fā)育的能力[6]。已有研究證實(shí)Ang-2及VEGF、PCDGF在NSCLC組織、血清中異常表達(dá)，然而其表達(dá)與肺癌細(xì)胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系仍有待探究，對(duì)尋找NSCLC早期診斷及治療的新靶點(diǎn)有重要指導(dǎo)意義。本研究分析了48例非小細(xì)胞肺癌患者血Ang-2、VEGF、PCDGF 、CEA、SCC水平，及其與肺癌的分期及病理類型相關(guān)性，擬探尋一組對(duì)非小細(xì)胞肺癌診斷及預(yù)后最佳的腫瘤標(biāo)記物。

1資料與方法

1.1一般資料? 收集2017年9月～2018年4月就診于安醫(yī)大附屬巢湖醫(yī)院呼吸內(nèi)科，經(jīng)病理確診的48例原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌患者，研究標(biāo)本采集前均未抗腫瘤治療。本研究經(jīng)安醫(yī)大附屬巢湖醫(yī)院倫理委員會(huì)同意進(jìn)行，患者在首次就診時(shí)均簽署書面知情同意書?；颊咧心?7例，女11例，年齡47～87歲，平均年齡67.63歲，鱗癌29例，腺癌19例。臨床分期依據(jù)國(guó)際癌癥控制聯(lián)盟和國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)于2017年的《國(guó)際肺癌分期指南》第八版進(jìn)行評(píng)估。

1.2方法

1.2.1資料收集? 收集患者臨床病理資料，包括年齡、性別、吸煙、病理、分期、轉(zhuǎn)移程度。

1.2.2指標(biāo)檢測(cè)? Ang-2、VEGF、 PCDGF含量檢測(cè)采取固相夾心ELISA法，具體步驟按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行，用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)測(cè)量各孔的吸光度（A）值，通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中Ang-2、VEGF、 PCDGF的實(shí)際濃度。CEA、SCC采用羅氏Elecsys2010免疫測(cè)定分析儀并用電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定試劑，按照檢測(cè)系統(tǒng)操作步驟執(zhí)行。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析? 用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)不符合正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以M（P25，P75）表示，兩組間比較采用非參數(shù)檢驗(yàn)，多組間比較用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)分析。診斷效能評(píng)價(jià)指標(biāo)用ROC曲線分析，以敏感度、特異度、正確率表示。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0.01表示統(tǒng)計(jì)學(xué)意義顯著。

2結(jié)果

2.1血清Ang-2、VEGF、PCDGF含量與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系? 鱗癌患者中血管生成素2高于腺癌患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），但與年齡、吸煙、性別均無(wú)關(guān);在非小細(xì)胞肺癌患者中對(duì)于年齡≤60歲的患者中的PCDGF水平明顯低于年齡>60歲的患者（P<0.01）;局部轉(zhuǎn)移的患者血清VEGF含量高于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者（Z=2.070，P<0.05），見(jiàn)表1。

2.2 Ang-2、PCDGF、VEGF、SCC在鱗癌診斷中的價(jià)值分析? Ang-2、PCDGF、SCC對(duì)于鱗癌有一定診斷價(jià)值，但VEGF在鱗癌中的診斷價(jià)值不高;Ang-2、PCDGF、VEGF、SCC對(duì)應(yīng)的ROC曲線下面積 分別為0.68（95%CI：0.53，0.83），0.62（95%CI：0.46，0.79），0.46（95%CI：0.28，0.63），0.77（95%CI：0.63，0.91）。Ang-2、PCDGF、VEGF、SCC的cutoff 值分別為559.52 pg/ml，553.12 μg/ml，234.17 μg/ml，1.76 μg/ml。Ang-2+PCDGF靈敏度和正確率均為最高，Ang-2在單個(gè)指標(biāo)中的正確率低于SCC，高于PCDGF和VEGF，見(jiàn)表2。

2.3 CEA對(duì)腺癌的診斷效能比較? CEA對(duì)應(yīng)的ROC曲線下面積為0.73（95%CI：0.57，0.88），cutoff 值為3.38 ng/ml，靈敏度為0.84，特異度為0.59，正確率為68.90%。

3討論

隨著對(duì)血清學(xué)腫瘤標(biāo)志物的深入研究，Ang-2、PCDGF及VEGF及受到越來(lái)越多的研究者們的廣泛關(guān)注。本研究中，非小細(xì)胞肺癌患者外周血清中Ang-2、PCDGF及VEGF的表達(dá)水平與非小細(xì)胞肺癌臨床病理參數(shù)具有相關(guān)性，且聯(lián)合檢測(cè)肺鱗癌的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確性均較高，說(shuō)明此3項(xiàng)指標(biāo)對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者具有重要的臨床價(jià)值。

PCDGF又稱上皮素-顆粒素前體，是生長(zhǎng)調(diào)節(jié)因子家族中的成員之一，具有很強(qiáng)的致癌作用，通過(guò)參與體內(nèi)多種信號(hào)通路在腫瘤細(xì)胞的粘附、增殖、血管形成和細(xì)胞外基質(zhì)降解中都發(fā)揮重要作用，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移[7]。在正常機(jī)體中，PCDGF主要促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和創(chuàng)傷口愈合等，表達(dá)水平較低，但其在腫瘤患者體內(nèi)為高表達(dá)水平[8]。PCDGF在惡性腫瘤性疾病包括肺癌中異常表達(dá)，參與了肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移以及血管生成過(guò)程[9]。趙玉澤等[10]報(bào)道，PCDGF在老年肺鱗癌中的表達(dá)量較其余各組比較顯著高表達(dá)，且陽(yáng)性表達(dá)率在不典型增生組、鱗狀上皮化生組、炎癥對(duì)照組的表達(dá)依次下降。本研究中年齡≤60歲的NSCLC 患者其PCDGF水平低于>60歲的患者（P<0.01），在鱗癌中ROC曲線下面積為0.62（95%CI：0.46，0.79），單獨(dú)診斷鱗癌的特異度為63.16%，靈敏度62.07%，正確率62.50%，對(duì)肺鱗癌的診斷有一定的臨床價(jià)值，聯(lián)合血管生成素檢測(cè)可以避免單項(xiàng)檢測(cè)的漏診率。這些研究結(jié)果都表明PCDGF在腫瘤形成中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，或許可作為肺癌診斷一個(gè)新的血清學(xué)輔助檢測(cè)指標(biāo)。

目前，VEGF是一種重要的促血管內(nèi)皮生長(zhǎng)的細(xì)胞因子，其不僅能夠促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，還可以促進(jìn)血管滲漏。近年研究發(fā)現(xiàn)，PCDGF可以上調(diào)VEGF的表達(dá)，因此PCDGF可能作為上游蛋白通過(guò)促進(jìn)VEGF的表達(dá)調(diào)節(jié)血管生成[11]。有研究發(fā)現(xiàn)[12]與肺部良性病變及健康者比較，肺癌患者VEGF表達(dá)量顯著升高，且肺癌臨床TNM分期越高，其表達(dá)量越高;淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的表達(dá)量高于未轉(zhuǎn)移者，提示VEGF或許在肺癌患者早期診斷及預(yù)后判斷中發(fā)揮重要作用。體外動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)表明[13]，通過(guò)抑制腫瘤中VEGF的表達(dá)，能夠明顯抑制肺癌癌細(xì)胞組織血管形成、減少腫瘤體積和提高裸鼠的生存時(shí)間。此研究結(jié)果與既往報(bào)道基本相符合。本研究中肺癌局部轉(zhuǎn)移的患者VEGF含量高于遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺癌患者，VEGF對(duì)于判斷非小細(xì)胞肺癌預(yù)后有一定價(jià)值。在鱗癌中ROC曲線下面積為0.46（95%CI：0.28，0.63），單獨(dú)診斷鱗癌的特異度為42.11%，靈敏度79.31%，正確率64.59%。VEGF單獨(dú)診斷肺鱗癌的準(zhǔn)確率不是很高，聯(lián)合PCDGF及血管生成素檢測(cè)顯著提高了診斷肺鱗癌的準(zhǔn)確率、特異度及靈敏度。

Ang-2是一種與腫瘤血管生成相關(guān)的細(xì)胞因子，能特異性地與內(nèi)皮細(xì)胞特異的酪氨酸激酶受體（Tie-2）相結(jié)合從而促進(jìn)新血管的生成[14]。目前研究發(fā)現(xiàn)，Ang-2和VEGF相互協(xié)同作用共同調(diào)節(jié)腫瘤組織周圍新生血管的生成，Ang-2可以上調(diào)VEGF的表達(dá)，而VEGF亦可反過(guò)來(lái)影響Ang-2的分泌[15]。2017年Xu Y等[16]報(bào)道的一項(xiàng)薈萃分析納入了1911例肺癌病例，結(jié)果顯示血清高Ang-2水平與較晚的臨床分期（Ⅲ期、Ⅳ期）、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與組織學(xué)類型、年齡、吸煙、性別均無(wú)關(guān)，并且高表達(dá)的患者預(yù)后顯著較差，這表明Ang-2在腫瘤侵襲、淋巴性轉(zhuǎn)移方面起到重要作用，Ang-2的表達(dá)水平或許可作為肺癌預(yù)后預(yù)測(cè)因子。本研究結(jié)果顯示肺鱗癌患者中血管生成素顯著高于腺癌患者（P<0.05）。在鱗癌中ROC曲線下面積為0.68（95%CI：0.53，0.83），單獨(dú)診斷鱗癌的特異度為73.68%，靈敏度65.52，正確率68.75%，聯(lián)合PCDGF檢測(cè)可以減少單項(xiàng)檢測(cè)的漏診率。

本研究中由ROC曲線分析得出PCDGF、VEGF和Ang-2三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)，對(duì)肺鱗癌診斷的敏感度和正確率分別為82.76%和72.92%，顯著高于任一單項(xiàng)指標(biāo)的敏感度和正確率。因此，此三項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)可以彌補(bǔ)單項(xiàng)指標(biāo)的漏診率。ROC曲線分析得出CEA對(duì)于肺腺癌的診斷，其 AUC為0.73（95%CI：0.57，0.88），靈敏度為0.84，特異度為0.59，正確率為68.90%。CEA對(duì)肺腺癌診斷的正確性中等，具有一定的臨床價(jià)值。

綜上所述，PCDGF、VEGF、Ang-2作為新發(fā)現(xiàn)的生物分子，在肺癌中與多項(xiàng)臨床病理參數(shù)密切相關(guān)，提示PCDGF可能通過(guò)調(diào)控VEGF、Ang-2的表達(dá)而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞新生血管生成，從而在NSCLC的發(fā)生發(fā)展及侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。故聯(lián)合檢測(cè)PCDGF、VEGF、Ang-2的表達(dá)對(duì)NSCLC的早期診斷、病情的進(jìn)展評(píng)估提供依據(jù)。本研究尚存不足之處：樣本量偏小，后續(xù)工作需要進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量。PCDGF、VEGF、Ang-2之間通過(guò)怎樣的生物信號(hào)通路相互作用參與NSCLC的發(fā)生發(fā)展、侵襲轉(zhuǎn)移過(guò)程仍需要更加深入的探究。但是，PCDGF、VEGF、Ang-2的聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肺鱗癌的早期診斷、病情進(jìn)展的評(píng)估仍具有一定的臨床價(jià)值。

參考文獻(xiàn)：

[1]Siegel RL，Miller KD，Jemal A，et al.Cancer statistics，2017[J].CA Cancer J Clin，2017，67（3）：104-117.

[2]Fang B，Mehran RJ，Heymach JV，et al.Predictive biomarkers in precision medicine and drug development against lung cancer[J].Chin J Cancer，2015，34（7）：295-309.

[3]Ollier W，Muir KR，Lophatananon A，et al.Risk biomarkers enable precision in public health[J].2018，15（4）：329-342.

[4]Xu X，Yan Y，Xun Q，et al.Combined silencing of VEGF-A and angiopoietin-2，a more effective way to inhibit the Ishikawa endometrial cancer cell line[J].Onco Targets Ther，2019（12）：1215-1223.

[5]Lai Y，Wang X，Zeng T，et al.Serum VEGF levels in the early diagnosis and severity assessment of non-small cell lung cancer[J].Journal of Cancer，2018，9（9）：1538-1547.

[6]Xu CH，Wang Y，Qian LH，et al.Serum Cripto-1 is anovel biomarker for non-small cell lung cancer diagnosis and prognosis[J].Clin Resp J，2015，11（6）：765-771.

[7]Pilgaard L，Mortensen JH， Henriksen M，et al.Cripto-1 expression in glio-blastomamultiforme[J].Brain Pathol，2014，24（4）：360-370.

[8]王鵬鯤.血清CCL20、PCDGF含量與非小細(xì)胞肺癌胸腔鏡根治術(shù)后復(fù)發(fā)的關(guān)系[J].海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2016，22（18）：2108-2111.

[9]Shan Y，Li S.Expression of Cripto-1 gene protein and Activin-A in human lung adenocarcinoma tissue[J].Pak J Pharm Sci，2015，28（2 Suppl）：739-743.

[10]趙玉澤，杜毓鋒，錢力，等.畸胎瘤源性生長(zhǎng)因子和血管內(nèi)皮因子在老年男性肺鱗癌中的表達(dá)及臨床意義[J].中國(guó)藥物與臨床，2014，14（11）：1480-1483.

[11]Psatha A，Makris D，Kerenidi T，et al.A potential role for VEGF in thediagnostic approach of pleural effusions[J].J Thorac Dis，2016，8（7）：1681-1687.

[12]余立勇，胡麗慶，魯玲.血清PCDGF、VEGF、TK1在肺癌中的診斷價(jià)值[J].中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2015（5）：680-682.

[13]Huang H，Salavaggione O， Rivera L，et al.Woodchuck VEGF（wVEGF）characteristics：Model for angiogenesis and human hepatocellular carcinoma directed therapies[J].Archives of Biochemistry and Biophysics，2019，661（1）：97-106.

[14]Fawzy A，Gaafar R，Kasem F，et al.Importance of serum levels of angiopoietin-2 and survivinbiomarkers in non-small cell lung cancer[J].Journal of the Egyptian National Cancer Institute，2012，24（1）：41-45.

[15]華欣，朱曉莉.非小細(xì)胞肺癌中Ang-2相關(guān)研究進(jìn)展[J].中國(guó)肺癌雜志，2018，21（11）：70-76.

[16]Xu Y，Zhang Y，Wang Z，et al.The role of serum angiopoietin-2 levels in progression and prognosis of lung cancer：A meta-analysis[J].Medicine，2017，96（37）：e8063.

收稿日期：2019-5-23;修回日期：2019-6-3

編輯/肖婷婷