張倩 趙秀芳 高歡歡 朱心寧 殷金巖
摘要 近年來,由于工業(yè)和農(nóng)業(yè)的高速發(fā)展,土壤重金屬污染越來越嚴(yán)重,給動(dòng)植物生長(zhǎng)和人類生產(chǎn)生活產(chǎn)生了極大影響。生物修復(fù)技術(shù)作為一種低影響、高效益的修復(fù)方法,包括植物修復(fù)、動(dòng)物修復(fù)和微生物修復(fù),植物聯(lián)合固氮菌的修復(fù)方法屬生物修復(fù)中較為新型的一種技術(shù)手段。本文在概述了土壤重金屬污染特點(diǎn)、來源、危害以及對(duì)傳統(tǒng)修復(fù)技術(shù)評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上,闡述了植物聯(lián)合固氮菌修復(fù)土壤重金屬污染的研究進(jìn)展以及展望,以期為土壤重金屬修復(fù)方法的研究提供參考。
關(guān)鍵詞 植物;固氮菌;土壤重金屬污染;植物修復(fù)
中圖分類號(hào) X53
文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A
文章編號(hào) 1007-5739(2019)08-0180-04
土壤重金屬污染是指重金屬或其化合物通過各種途徑進(jìn)入土壤并且其含量超過了土壤自凈能力而造成的污染",重金屬是指密度≥5g/cm3的金屬,包括鉻(Cd)、鉛(Pb)、汞(Hg)、鉻(Cr)、銅(Cu)、鋅(Zn)、錫(Sn)等,砷(As)、銻(Sb)、硒(Se)雖不屬于重金屬,但因其來源以及危害都與重金屬相似,故通常列人重金屬類進(jìn)行研究討論2-31。近年來,工業(yè)上的采礦、冶煉、電鍍、化工等產(chǎn)生的“三廢”以及農(nóng)業(yè),上污灌、農(nóng)藥化肥的不合理施用等造成我國(guó)大面積耕地土壤遭受重金屬污染。這種污染不僅影響農(nóng)作物生產(chǎn),而且也影響大氣和水環(huán)境質(zhì)量,甚至通過食物鏈危害人類的健康。不僅在我國(guó),全世界范圍內(nèi)土壤重金屬污染也依舊是一個(gè)嚴(yán)峻的問題,并且隨著工業(yè)化的不斷發(fā)展和自然界生物的循環(huán),該問題會(huì)變得越來越嚴(yán)重",目前,土壤重金屬污染修復(fù)技術(shù)眾多,植物聯(lián)合固氮菌修復(fù)土壤重金屬污染不僅可以高效利用生物資源,而且可以起到作物增產(chǎn)和降低土壤重金屬污染的雙重效果,是一種綠色、低碳、環(huán)保并極具發(fā)展和應(yīng)用前景的土壤修復(fù)技術(shù)。
1土壤重金屬污染的特點(diǎn)、來源及危害
1.1土壤重金屬污染的特點(diǎn)
土壤重金屬污染由于其自身所具有的3個(gè)特點(diǎn)使其在眾多土壤污染中處于重要位置。一是復(fù)雜性。土壤中的重金屬離子形態(tài)變換較為復(fù)雜,多為過渡元素,有較多的價(jià)態(tài)變化,如土壤中的砷(As)以三價(jià)的亞砷酸鹽(AsO2)和五價(jià)的砷酸鹽(AsO3-)形態(tài)存在,土壤中的鉻(Cr)通常是以Cr(VI)和Cr(II)2種價(jià)態(tài)存在,土壤環(huán)境的pH值和配位體的不同會(huì)使土壤中的重金屬離子呈現(xiàn)出不同的價(jià)態(tài)、化合態(tài)和結(jié)合態(tài),根據(jù)重金屬在土壤中的存在形態(tài)可將其分為有機(jī)結(jié)合態(tài)殘留態(tài)、碳酸鹽結(jié)合態(tài)和可交換態(tài)等,而重金屬的毒性大小與其價(jià)態(tài)和化合物的種類密切相關(guān),有機(jī)態(tài)比無機(jī)態(tài)的毒性更大,不同價(jià)態(tài)的重金屬離子毒性不同,如As(II)的毒性遠(yuǎn)大于As(V),而Cr(VI)的毒性比Cr(II)大。二是隱蔽性。土壤中的重金屬大多數(shù)以化合物、聚合物等形式存在,不易被察覺,必須要利用一定的檢測(cè)技術(shù)才能測(cè)定其存在。三是長(zhǎng)期穩(wěn)定性。重金屬離子進(jìn)人土壤之后,通過物理、化學(xué)和生物等作用轉(zhuǎn)變?yōu)檩^穩(wěn)定的狀態(tài),一般情況下不會(huì)降解和消除,最多只能發(fā)生形態(tài)的變化,土壤污染相對(duì)于大氣污染和水體污染來說,比較固定,流動(dòng)性很小,擴(kuò)散速度較慢,如果不及時(shí)處理,會(huì)長(zhǎng)期存在于土壤中心。
1.2土壤重金屬的來源
土壤中重金屬的來源主要有2個(gè)方面:一方面是自然因素,主要指礦物的風(fēng)化、侵蝕和火山活動(dòng)等;另一方面是人類活動(dòng),這是造成土壤重金屬污染的最主要原因,主要包括工業(yè)上礦山開采、礦石冶煉、電鍍等過程中產(chǎn)生的富含重金屬的廢水、廢氣、廢渣等,煤和石油等能源物質(zhì)燃燒所釋放的大量含重金屬的有害氣體和粉塵等,農(nóng)業(yè)上殺蟲劑等農(nóng)藥和磷酸鹽類化肥的過度使用、農(nóng)業(yè)污水的灌溉,城市生活中含鉛(Pb)汽油的燃燒、汽車的粉塵燃料與潤(rùn)滑油的泄漏、城市生活污水排放等。在這些原因中,以工業(yè)來源與農(nóng)業(yè)來源污染對(duì)土壤的影響最為嚴(yán)重。
1.3土壤重金屬的危害
當(dāng)重金屬離子富集超過土壤自凈能力的時(shí)候,會(huì)對(duì)土壤的結(jié)構(gòu)與功能、農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)及人民生命安全產(chǎn)生較大威脅。重金屬離子可與土壤中的水羥基、氨以及一些有機(jī)質(zhì)中的某些分子形成螯合物,并在土壤中遷移轉(zhuǎn)化,被植物或微生物吸收利用。重金屬離子的富集會(huì)導(dǎo)致土壤中微生物的生物量降低、土壤微生物呼吸作用受到抑制、土壤中各種酶的活性降低、土壤微生物群落結(jié)構(gòu)被改變,繼而造成土壤肥力的下降,農(nóng)作物減產(chǎn)甚至絕收問。土壞重金屬離子也可以通過食物鏈的生物放大作用,成千百倍地富集,最終進(jìn)入人體,導(dǎo)致各種急性或者慢性疾病,如慢性中毒致癌和致畸等。
2傳統(tǒng)土壤重金屬污染修復(fù)技術(shù)及評(píng)價(jià)
2.1物理修復(fù)方法
物理修復(fù)方法包括客土法、深耕翻土、電動(dòng)修復(fù)、電熱修復(fù)、隔離法、淋濾法熱處理法、電化學(xué)法、吸附固定法等。該方法雖然在一定程度上對(duì)重金屬污染起到了控制作用,但是同時(shí)也面臨著成本高、費(fèi)時(shí)費(fèi)力、不適于大面積應(yīng)用的困境。
2.2化學(xué)修復(fù)方法
化學(xué)修復(fù)方法包括通過向土壤施用改良劑(如石灰、沸石、碳酸鈣、磷酸鹽、硅酸鹽)和促進(jìn)還原作用的有機(jī)物質(zhì),將重金屬吸附、氧化還原、拮抗或沉淀,降低重金屬的生物有效性"。該方法雖然減少了對(duì)植物的危害,并阻斷了其在食物鏈中的傳遞,但只改變了重金屬在土壤中的存在形態(tài),金屬元素仍保留在土壤中,容易再度活化而危害植物,破壞土壤物理、化學(xué)和生物特性,帶來二次污染。
3植物修復(fù)策略
植物修復(fù)是指利用植物來降解或去除污染土壤中的毒性物質(zhì)。植物修復(fù)的策略包括植物萃取、植物過濾、植物固定、植物揮發(fā)和植物降解5個(gè)方面。
植物萃取指利用超積累植物從土壤中吸收重金屬或有機(jī)毒物,并將其轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)存到該植株的可收割部分,從而達(dá)到降低或去除土壤重金屬污染的目的。
植物過濾指利用植物根部或種苗從污水中吸收、沉淀、富集重金屬或其他污染物。
植物固定指通過植物將重金屬吸附、沉淀或絡(luò)合在根部,阻止重金屬的遷移和向地下水的擴(kuò)散,通過降低重金屬生物活性,從而減少重金屬的毒害作用或者通過促進(jìn)土壤中重金屬離子發(fā)生價(jià)態(tài)和形態(tài)的改變,轉(zhuǎn)變?yōu)榈投拘螒B(tài),進(jìn)而防止其進(jìn)人地下水和食物鏈,從而減少其對(duì)環(huán)境和人類健康的危害4。
植物揮發(fā)指利用植物吸收:土壤中的污染物并將其轉(zhuǎn)化為可揮發(fā)的物質(zhì)釋放到大氣中。這種方法只限于具有揮發(fā)性的污染物,應(yīng)用范圍較小,同時(shí)該方法僅僅是將污染物從土壤轉(zhuǎn)移到大氣,對(duì)生態(tài)環(huán)境仍有一定影響,是最具爭(zhēng)議的植物修復(fù)策略5。目前這方面研究最多的是汞(Hg)和硒(Se)。例如細(xì)菌的汞(Hg)還原酶,能夠在擬南芥體內(nèi)將含汞(Hg)的污染物轉(zhuǎn)化為可揮發(fā)的汞(Hg)元素。微生物和藻類也可以吸收硒(Se),并將其轉(zhuǎn)化為二甲基硒揮發(fā)到大氣中心。
植物降解是指植物利用酶(如脫鹵素酶和過氧化物酶等)降解有機(jī)污染物,這種機(jī)制只限于有機(jī)污染物的去除,基于土壤一微生物一植物的共存關(guān)系,植物可利用根際微生物分解土壤中的有機(jī)污染物,植物修復(fù)與微生物修復(fù)技術(shù)可優(yōu)勢(shì)互補(bǔ),提高土壤中重金屬污染物的修復(fù)效率7。植物通過含有碳水化合物氨基酸、黃酮類化合物的根際分泌物的滲出液,使微生物的活性增強(qiáng)10~100倍。
4固氮菌在植物修復(fù)土壤重金屬污染中的作用機(jī)理4.1固氮菌可促進(jìn)植物生物量的增加
4.1.1通過生物固氮促進(jìn)植物生長(zhǎng)。生物固氮作用被認(rèn)為是固氮根瘤菌最重要、最獨(dú)特的特征,氮是植物生長(zhǎng)所必需的重要元素,是蛋白質(zhì)和核酸的一個(gè)組成部分,是植物生長(zhǎng)至關(guān)重要的元素之一。固氮菌是一種很重要的改善植物生長(zhǎng)的植物促生細(xì)菌,在固定植物所需氮元素方面發(fā)揮了重要作用。
4.1.2釋放植物激素等促進(jìn)植物生長(zhǎng)。固氮菌還可以釋放如吲哚乙酸(IAA)、赤霉素(GA)、脫落酸(ABA)、ACC脫氨酶等物質(zhì),來促進(jìn)植物的萌發(fā)和成長(zhǎng)9。IAA是植物生長(zhǎng)過程中一種重要的植物激素,主要與細(xì)胞分裂和分化相關(guān),在豆科植物和根瘤菌共生過程中,低濃度IAA可刺激植物的生長(zhǎng).根瘤的形成、植物根系的發(fā)展、礦物質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)元素的吸收等。根據(jù)目前的研究報(bào)道,在根瘤菌中存在3種IAA產(chǎn)生途徑,即色胺途徑、吲哚乙酰胺途徑以及吲哚丙酮酸途徑。在植物三羧酸循環(huán)途徑中IAA也發(fā)揮了重要作用,在Ronson等的研究中發(fā)現(xiàn),三羧酸循環(huán)可為類菌體固氮作用提供必需的能量,三羧酸循環(huán)中某些關(guān)鍵酶的缺失,均會(huì)導(dǎo)致根瘤菌固氮能力的消失,IAA可誘導(dǎo)三羧酸循環(huán)中一些關(guān)鍵酶的活性,間接地促進(jìn)了根瘤菌的固氮能力叫。ACC脫氨酶可以通過降低植物生長(zhǎng)的乙烯水平來達(dá)到促進(jìn)作物生長(zhǎng)發(fā)育的作用。植物體內(nèi)大量的IAA會(huì)誘發(fā)乙烯前體物質(zhì)ACC的合成,使植物體內(nèi)乙烯濃度增加,進(jìn)而抑制植物根系的生長(zhǎng)。在根瘤菌中,ACC脫氨酶的產(chǎn)生可分解植物體內(nèi)的ACC進(jìn)而阻斷乙烯的合成,是克服乙烯抑制作用的一種調(diào)控機(jī)制,一些含有ACC脫氨酶活性的根際細(xì)菌還可以輔助根瘤菌的結(jié)瘤過程,這些對(duì)植物生長(zhǎng)和修復(fù)作用也具有促進(jìn)和輔助作用2。
4.1.3通過磷酸鹽的溶磷作用促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。磷是植物生長(zhǎng)必需的大量元素,土壤中有大量的磷是屬于不溶性的,植物不能直接利用。固氮菌的存在可使不溶性的磷溶解,固氮菌的溶磷機(jī)制主要是通過釋放各種有機(jī)酸,如葡糖酸、琥珀酸及延胡索酸等絡(luò)合磷酸鹽上的陽離子,從而提高植物對(duì)磷的利用率。溶磷作用在ATP合成與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞膜的生物合成、成瘤作用中起重要作用,可以加速土壤中無效磷的有效化,從而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。
4.2固氮菌可促進(jìn)植物對(duì)重金屬的吸收和固定
固氮菌在自身生理機(jī)制和抗氧化酶的協(xié)助下可增強(qiáng)植物對(duì)非生物脅迫如干旱、重金屬、滲透脅迫、氧化應(yīng)激等的耐受能力。
固氮菌可依靠植物根瘤促進(jìn)對(duì)重金屬的吸收和固定。固氮菌在根瘤里可以自由移動(dòng),可作為吸附劑儲(chǔ)存和固定重金屬離子,增加植物根瘤內(nèi)金屬的積累量。根瘤可作為金屬緩沖區(qū),提供植物進(jìn)一步對(duì)抗人侵的有害離子所需的蛋白質(zhì),擴(kuò)大了植物吸收儲(chǔ)存金屬的區(qū)域,從而降低了重金屬離子對(duì)植物的直接毒害作用。
固氮菌可通過甲基化、代謝產(chǎn)物的鰲合作用等方式改變土壤中重金屬離子的生物活性,促進(jìn)植物對(duì)重金屬的吸收和固定。固氮菌通過甲基化酶的作用與重金屬離子結(jié)合,甲基化如Hg、Se、Te和Pb等重金屬離子,從而改變土壤中重金屬離子的溶解度。固氮菌具有分泌Fe載體、有機(jī)酸等物質(zhì)的能力,這些物質(zhì)可以與重金屬形成絡(luò)合物,活化土壤中的重金屬,從而提高重金屬的生物有效性,減輕重金屬對(duì)植物體的毒害作用。Fe載體是固氮菌在低鐵條件下產(chǎn)生的一種能夠高效率結(jié)合Fe+的小分子量有機(jī)化合物。土壤中的物質(zhì)和金屬Fe載體都帶有電荷,帶相同電荷的離子會(huì)產(chǎn)生排斥作用,可以活化和調(diào)動(dòng)金屬離子;帶不同電荷的離子相互吸引,使金屬離子得到了固定叨。Fe載體不僅可以與Fe離子結(jié)合,還可以與Zn、Cu、Cd等重金屬離子絡(luò)合形成穩(wěn)定的復(fù)合物28。在Fe載體作用下,許多植物會(huì)利用土壤中中微量可利用鐵,獲得生長(zhǎng)所需的Fe元素,固氮菌也可以釋放有機(jī)酸,例如葡萄糖酸.草酸、檸檬酸等。有機(jī)酸的產(chǎn)生造成了土壤環(huán)境的酸化,在重金屬的絡(luò)合反應(yīng)中也發(fā)揮了重要作用,它們可以與土壤中重金屬離子結(jié)合,增強(qiáng)了重金屬離子的可溶性和移動(dòng)性,使土壤中的重金屬得到活化,在一定程度上提高了土壤重金屬的生物有效性9。
4.3固氮菌在植物修復(fù)中的應(yīng)用
根瘤菌是目前研究較多的一種共生固氮菌,常與豆科植物共生結(jié)瘤。根瘤菌聯(lián)合豆科植物在修復(fù)重金屬污染中作用明顯,豆科植物黃花羽扇豆和根瘤菌Bradyrhizobiumsp.共生系統(tǒng)對(duì)土壤中銅、鋅、鉻、鉛的固定量較高,并且隨著土壤污染程度的增加,植物根和莖對(duì)重金屬離子的積累量會(huì)大幅度增加80。土壤中重金屬離子Pb對(duì)玉米根和植株的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生較大影響。然而,當(dāng)接種了固氮菌如圓褐固氮菌或者豌豆根瘤菌后,與對(duì)照組相比,接種后的植株生長(zhǎng)量顯著增加口,并且與接種其中某一單一菌種相比,同時(shí)接種圓褐固氛菌和豌豆根瘤菌2種固氨菌的植株長(zhǎng)勢(shì)更好121。相關(guān)學(xué)者在研究向日葵與固氮菌對(duì)重金屬鉻的修復(fù)時(shí),將固氮菌P.putida06909接種進(jìn)向日葵根部中,發(fā)現(xiàn)其明顯降低了鎘對(duì)植物的毒害作用,并且在植物根系中鎘的積累增加了40%,明顯提高了植物對(duì)重金屬的萃取能力3。郝秀麗從甘肅鉛鋅礦區(qū)刺槐根瘤中分離出2株重金屬抗性細(xì)菌AgrobacteriumtumefaciensCCNWGS0286及MesorhizobiumamorphaeCCNWGS0123,通過全基因組測(cè)序分析、轉(zhuǎn)座子突變等技術(shù),對(duì)Cul/Zn抗性機(jī)制以及對(duì)Cul/Zn污染土壤的聯(lián)合修復(fù)作用進(jìn)行了研究。研究結(jié)果表明,A.tumefaciensCCNWGS0286(176)及MesorhizobiumamorphaeCCNWGS0123具有良好的重金屬抗性及促植物生長(zhǎng)能力,根瘤菌刺槐共生體系在修復(fù)礦區(qū)重金屬污染環(huán)境中擁有巨大潛能??迪牡劝祭门柙栽囼?yàn)來捕獲釩鈦磁鐵廢礦土中的大豆和豇豆根瘤菌,結(jié)果表明,重金屬含量高且十分貧瘠的礦土中存在豐富的土著根瘤菌,并能在非常惡劣的土壤環(huán)境中共生固氮;還構(gòu)建出豇豆一syj1和大豆-ms12-11等2個(gè)固氮效率較高的共生體系,,其在增加豆科植物抗逆性的同時(shí),還可補(bǔ)充貧瘠土壤中的氮營(yíng)養(yǎng),可作為一種生物修復(fù)方式應(yīng)用于釩鈦磁鐵廢礦土壤的修復(fù)。
基于固氮菌在促進(jìn)植物生物量的增加和促進(jìn)植物對(duì)重金屬吸收和固定的雙重作用,如果植物被接種上耐重金屬的固氮菌,將極大地改善植物的生長(zhǎng)狀況和植物修復(fù)土壤重金屬污染的能力。目前的研究表明,大量植物已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)具有吸收重金屬的潛力,然而許多具有修復(fù)重金屬的能力的植物不能產(chǎn)生足夠的生物量。因此,在超富集植物生長(zhǎng)過程中弓入固氮菌既可促進(jìn)植物生物量的增加,又可促進(jìn)植物對(duì)重金屬的吸收和固定,減少土壤中重金屬含量,是一種極具發(fā)展前景的土壤修復(fù)技術(shù)。
5展望
目前,土壤重金屬污染對(duì)人類的生存和發(fā)展產(chǎn)生了嚴(yán)重威脅,治理形勢(shì)嚴(yán)峻,世界各國(guó)已投入大量的人力、物力和財(cái)力致力于土壤重金屬污染的修復(fù)。一些常用的土壤重金屬污染修復(fù)技術(shù)如物理修復(fù)、化學(xué)修復(fù)生物修復(fù)和聯(lián)合修復(fù)等技術(shù)也在不斷改進(jìn)。植物聯(lián)合固氮菌的修復(fù)方法屬生物修復(fù)中較為新型的一種技術(shù)手段,影響因素較多,如固氮菌和宿主植物的種類、土壤重金屬污染的類型和污染程度等針對(duì)利用植物聯(lián)合固氮菌來修復(fù)土壤重金屬污染的領(lǐng)域,未來還需從以下方面加強(qiáng)研究。
5.1固氮菌的選育
固氛菌種類繁多,應(yīng)篩選出能高效吸附某一特定重金屬元素的菌株,并根據(jù)具體的土壤條件篩選與其相適應(yīng)的特定菌株,深入探究修復(fù)固氮菌與土壤環(huán)境之間的相互關(guān)系,為構(gòu)建協(xié)同修復(fù)技術(shù)提供理論基礎(chǔ)。
5.2固氮菌修復(fù)機(jī)理的研究
固氛菌聯(lián)合植物參與的重金屬污染修復(fù)過程是一個(gè)復(fù)雜的物理、生化過程,可以結(jié)合分子生物學(xué)、代謝組學(xué)系統(tǒng)研究固氮菌對(duì)重金屬污染修復(fù)的機(jī)制,研究固氮菌、植物、土壤.重金屬離子之間的相互作用。通過對(duì)修復(fù)機(jī)理的進(jìn)步深入研究,可以為聯(lián)合修復(fù)技術(shù)的建立以及實(shí)際工程應(yīng)用提供理論支持。
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