胸腔積液細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)對(duì)胸腔積液的價(jià)值分析

姜洪翠

[摘要] 目的 分析胸腔積液細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)對(duì)胸腔積液的價(jià)值。 方法 方便選取2018年2月—2019年2月該院診斷的96例胸腔積液病患，進(jìn)行隨機(jī)分組，46例病患進(jìn)行單純細(xì)胞涂片HE染色作為參照組，50例病患進(jìn)行細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)作為探究組，觀察并對(duì)比診斷結(jié)果。 結(jié)果 不同方式診斷后對(duì)比兩組診斷準(zhǔn)確率，探究組98.00%顯著高于參照組86.96%（χ2=4.32，P<0.05）;對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果的陽性率，探究組陽性率100.00%顯著高于參照組78.26%（χ2=10.45，P<0.05）;96例胸腔積液病患中，48例診斷為查見腺癌細(xì)胞，48例為查見反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞。從抗體表達(dá)來看，發(fā)現(xiàn)腺癌細(xì)胞的特異性抗體有CK7、CEA和TTF-1，反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的特異性抗體有 WT-1、Calretinin和CK5/6（P<0.05）。結(jié)論 細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)對(duì)胸腔積液的診斷準(zhǔn)確率高，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞] 胸腔積液;細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè);胸腔積液

[中圖分類號(hào)] R561? ? ? ? ? [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A? ? ? ? ? [文章編號(hào)] 1674-0742（2019）06（b）-0023-03

[Abstract] Objective To analyze the value of immunohistochemical detection of pleural effusion cells in pleural effusion. Methods A total of 96 patients with pleural effusion diagnosed in our hospital from February 20 to February 2019 were convenient enrolled in a randomized group. 46 patients underwent HE staining with a single cell smear as a reference group， and 50 patients underwent cell waxing block immunohistochemistry was used as an exploration group to observe and compare the diagnosis results. Results After diagnosis， the diagnostic accuracy of the two groups was compared. 98.00% of the exploration group was significantly higher than the reference group by 86.96% （χ2=4.32， P<0.05）. The positive rate of the two groups was 100.00%， higher than the reference group of 78.26% （χ2=10.45， P<0.05）; of the 96 patients with pleural effusion， 48 were diagnosed as adenocarcinoma cells， and 48 were found to be reactive hyperplastic mesothelial cells. From the expression of antibodies， specific antibodies against adenocarcinoma cells were found to be CK7， CEA and TTF-1， and specific antibodies to reactive proliferative mesothelial cells were WT-1， Calretinin and CK5/6 （P<0.05）. Conclusion The immunohistochemical detection of cell wax block has a high diagnostic accuracy for pleural effusion， which is worthy of clinical promotion.

[Key words] Pleural effusion; Immunohistochemistry detection of cell wax block; Pleural effusion

胸腔積液是臨床常見的一種癥候，主要特征為胸膜腔內(nèi)病理性液體積聚，臨床表現(xiàn)為胸悶、呼吸困難、氣短、心悸等[1]。任何原因?qū)е碌男啬で粌?nèi)液體超出正常值，都屬于胸腔積液，該研究方便選取2018年2月—2019年2月該院診斷的96例胸腔積液病患作為研究對(duì)象，分析細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)的診斷價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1? 資料與方法

1.1? 一般資料

方便選取該院診斷的96例胸腔積液待查病患，納入標(biāo)準(zhǔn)[2]：①所有病患均符合胸腔積液的診斷標(biāo)準(zhǔn);②年齡超過25歲;③該研究已經(jīng)倫理學(xué)委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。排除心肝腎障礙及認(rèn)知障礙病患。隨機(jī)分為50例探究組和46例參照組。兩組病患的年齡、性別等基本資料，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

1.2? 方法

所有病患先進(jìn)行標(biāo)本采集，選擇清晨取50 mL新鮮的胸腔積液，將取好的新鮮血液放入4個(gè)試管中，進(jìn)行離心處理，控制在2 500 r/min轉(zhuǎn)速，離心15 min，吸出上層清液，保留沉渣[3]。

1.2.1? 參照組? 參照組46例病患進(jìn)行單純細(xì)胞涂片HE染色，直接用棉簽對(duì)沉渣中的水分進(jìn)行吸取，然后進(jìn)行細(xì)胞涂片。將剩下的沉渣加入濃度為90%的乙醇中，進(jìn)行固定處理，將固定好的濕片放在通風(fēng)柜中晾干，然后進(jìn)行常規(guī)HE染色[4]。

1.2.2? 探究組? 探究組50例病患進(jìn)行細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)：①細(xì)胞蠟塊制?。旱?次離心后的沉渣，再加入濃度為1%的融化瓊脂，進(jìn)行第2次離心處理;然后吸走上層清液，用濾紙包好沉渣進(jìn)行脫水;最后用石蠟進(jìn)行包埋制成細(xì)胞蠟塊，然后連續(xù)切片，切片的厚度控制在3 μm[5]。②免疫組化檢測(cè)：按照染色流程，選擇SP法（Maxvision快捷免疫組織化學(xué)），選擇Maxvision試劑盒和二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑，嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行檢測(cè)操作[6]。觀察特異性抗體CK7、CEA、WT-1、Calretinin、CK5/6和TTF-1的表達(dá)，對(duì)比分析腺癌細(xì)胞和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的診斷準(zhǔn)確率。

1.3? 觀察指標(biāo)

①同方式診斷后對(duì)比兩組診斷準(zhǔn)確率（良性率、惡性率和不確定率）;②對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果的陽性例數(shù)、陽性率、陰性例數(shù)、陰性率;③腺癌細(xì)胞和反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞對(duì)特異性抗體CK7、CEA、WT-1、Calretinin、CK5/6和TTF-1的表達(dá)。

1.4? 評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)

①診斷結(jié)果評(píng)價(jià)[7]：細(xì)胞有彌散且形態(tài)溫和，無不典型性為良性（即反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞）;細(xì)胞出現(xiàn)成團(tuán)且形態(tài)與核有不典型性為惡性（即腺癌）：細(xì)胞有彌散且成團(tuán)，但細(xì)胞核出現(xiàn)輕中度不典型性為不確定。②陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)：CK7、CEA、CK5/6出現(xiàn)黃色細(xì)胞質(zhì)染色，WT-1和TTF-1的細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色染色，Calretinin的細(xì)胞質(zhì)和核都出現(xiàn)著色。

1.5? 統(tǒng)計(jì)方法

該文所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行檢驗(yàn)，組間計(jì)量資料用（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 診斷結(jié)果對(duì)比分析

不同方式診斷后對(duì)比兩組診斷準(zhǔn)確率，探究組98.00%（49/50）顯著高于參照組86.96%（40/46），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.32，P<0.05），見表2。

2.2? 檢測(cè)結(jié)果陽性率對(duì)比分析

對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果的陽性率，探究組陽性率100.00%顯著高于參照組78.26%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=10.45，P<0.05），見表3。

2.3? 不同癌細(xì)胞的抗體表達(dá)對(duì)比分析

96例胸腔積液病患中，48例診斷為腺癌細(xì)胞，48例為反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞。從抗體表達(dá)來看，發(fā)現(xiàn)腺癌細(xì)胞的特異性抗體有CK7、CEA和TTF-1，反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的特異性抗體有 WT-1、Calretinin和CK5/6，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表4。

3? 討論

胸部腫瘤的并發(fā)癥之一是胸腔積液，引發(fā)胸腔積液的因素很多，主要由炎癥和肺腺癌引起，有效的診斷方式是治療胸腔積液的前提[8]。胸腔積液最為常見的是惡性腫瘤，包括轉(zhuǎn)移性癌（以肺癌、腸癌和乳腺癌最為常見）、淋巴瘤、惡性間皮瘤等[9]。臨床常規(guī)的診斷方式為細(xì)胞涂片檢測(cè)，通過離心可以收集細(xì)胞少、假陰性的情況，但這種檢測(cè)方式因容易出現(xiàn)細(xì)胞成團(tuán)、成堆、角質(zhì)化和內(nèi)黏液不明顯等情況[10]。另外，細(xì)胞成分復(fù)雜，腺癌細(xì)胞核增生間皮細(xì)胞的細(xì)胞形態(tài)較為相似，進(jìn)行細(xì)胞涂片檢測(cè)，不容易鑒別。此外，由于癌細(xì)胞分布較為分散，進(jìn)行細(xì)胞涂片HE染色的陽性率很低，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確[11]。隨著醫(yī)學(xué)的發(fā)展和診斷技術(shù)的進(jìn)步，細(xì)胞蠟塊技術(shù)成為了胸腔積液診斷的有效方式，該技術(shù)的主要原理是通過離心操作，將細(xì)胞進(jìn)行濃縮，最后變?yōu)槌恋砦?，再進(jìn)行固定、脫水、包埋、切片和染色處理，診斷的準(zhǔn)確率高。細(xì)胞蠟塊具有連續(xù)切片、保存時(shí)間長的點(diǎn)，可以通過反復(fù)觀察，從而提高漿膜腔積液的診斷準(zhǔn)確率。

該研究選取2018年2月—2019年2月該院診斷的96例胸腔積液病患，對(duì)比單純細(xì)胞涂片HE染色與細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)的診斷結(jié)果。通過研究發(fā)現(xiàn)，兩組診斷準(zhǔn)確率比較，探究組98.00%顯著高于參照組86.96%，表明單純細(xì)胞涂片HE染色的準(zhǔn)確率偏低，細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)的診斷效果顯著。與李清苗[1]的研究結(jié)果基本一致，他的研究結(jié)果顯示，確診的39例惡性類型，經(jīng)細(xì)胞塊免疫組化驗(yàn)的診斷出38例，誤診1例，診斷符合率97.44%。細(xì)胞涂片在顯微鏡下，腺癌細(xì)胞呈現(xiàn)三維立體的團(tuán)狀圖形，有乳頭狀的排列順序，染色質(zhì)有增粗，核質(zhì)比有增大，有核分裂的情況。細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)是經(jīng)過一系列的探索，才發(fā)現(xiàn)的一種有效的檢測(cè)方式，其通過兩次離心胸腔積液，從而收集較多的癌細(xì)胞，并制成細(xì)胞蠟塊，使得細(xì)胞的結(jié)構(gòu)清晰可見，而且細(xì)胞的排列方式和結(jié)構(gòu)都保存良好，更有利于提高診斷的準(zhǔn)確性。細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)呈現(xiàn)腺管樣，細(xì)胞異性顯著，核質(zhì)比也大，染色質(zhì)增粗，核膜清晰可見，增厚明顯，有核分裂情況。

通過研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)比兩組檢測(cè)結(jié)果的陽性率，探究組陽性率100.00%顯著高于參照組78.26%，表明細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)可以有效判斷細(xì)胞性質(zhì)，提高診斷準(zhǔn)確率，降低誤診率。另外，細(xì)胞蠟塊的制作過程簡單，而且細(xì)胞蠟塊還有方便保存和便于檢測(cè)的特點(diǎn)，可以積極推廣到基層醫(yī)院。

通過研究發(fā)現(xiàn)，96例胸腔積液病患中，48例診斷為查見腺癌細(xì)胞，48例為查見反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞。從抗體表達(dá)來看，發(fā)現(xiàn)腺癌細(xì)胞的特異性抗體有CK7、CEA和TTF-1。表明腺癌細(xì)胞與反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的表達(dá)存在差異性，而反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的特異性抗體有 WT-1、Calretinin和CK5/6且特異性很強(qiáng)，將兩種抗體進(jìn)行聯(lián)合應(yīng)用，可以有效鑒別疾病。免疫組化運(yùn)用的原理是免疫學(xué)抗原-抗體特異性結(jié)合，利用化學(xué)反應(yīng)，促使標(biāo)記抗體的顯色劑進(jìn)行顯色，從而確定機(jī)體內(nèi)抗原的分布，再對(duì)其進(jìn)行細(xì)胞定位和定性，從而提高診斷的準(zhǔn)確率。CK7、CEA和TTF-1都是腺癌細(xì)胞的特異性抗體，其中CK7屬于相對(duì)分子質(zhì)量細(xì)胞角蛋白，可以應(yīng)用到上皮和尿路上皮細(xì)胞中進(jìn)行標(biāo)記;CEA屬于胚胎性癌抗原，作為診斷上皮性腫瘤的標(biāo)記，一般位置在胎兒消化道上皮組織、肝臟和胰腺等地方;TTF-1是作為診斷轉(zhuǎn)移性腺癌細(xì)胞的標(biāo)記，屬于核轉(zhuǎn)錄蛋白NKx2，對(duì)肺腺癌的靈敏度和特異度都較高。WT-1、Calretinin和CK5/6是反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的特異性抗體，其中，WT-1屬于抑癌基因，是鑒別間皮瘤的有效手段;Calretinin屬于鈣結(jié)合蛋白，相對(duì)分子質(zhì)量為2.9×104，神經(jīng)系統(tǒng)是其主要存在位置，研究發(fā)現(xiàn)，在間皮細(xì)胞中，Calretinin的陽性率高達(dá)80%，是診斷反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞的有效標(biāo)志物;CK5/6是以一種基底細(xì)胞角蛋白，在正常組織中，鱗狀上皮和導(dǎo)管上皮的基底細(xì)胞以及部分的鱗狀上皮生發(fā)層細(xì)胞、肌上皮細(xì)胞、間皮細(xì)胞陽性、腺上皮細(xì)胞陰性，適合用于反應(yīng)性增生間皮瘤的診斷。

綜上所述，細(xì)胞蠟塊免疫組化檢測(cè)被廣泛應(yīng)用于臨床的診斷中，對(duì)胸腔積液的診斷準(zhǔn)確率高，檢測(cè)效果好，可以有效鑒別出腺癌細(xì)胞與反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞，值得臨床推廣。

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（收稿日期：2019-03-12）