香蕉根結(jié)線蟲卵的分離與孵化試驗(yàn)初報(bào)

李春　趙東興　張建春　李芹

摘? ?要? ?采用直接解剖分離法和粉碎篩分法分離香蕉根結(jié)線蟲，并利用濾液和蒸餾水（對(duì)照）在室溫和26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，研究香蕉根結(jié)線蟲卵的分離和孵化情況。結(jié)果表明：1）粉碎篩分法具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)，能較快獲取所需線蟲卵的懸浮液;2）26 ℃恒溫培養(yǎng)卵孵化率比室溫條件下孵化率高，且用濾液培養(yǎng)的卵孵化率高于蒸餾水培養(yǎng)的孵化率。3）在26 ℃恒溫條件下加入濾液和蒸餾水培養(yǎng)10 d，卵的孵化率分別為84.21%和58.36%;室溫條件下培養(yǎng)10 d，線蟲的孵化率分別為43.22%和27.55%。4）粉碎篩分法是一種較簡(jiǎn)單的從香蕉根中分離得到根結(jié)線蟲卵的方法，且在26 ℃用濾液培養(yǎng)10 d能使多數(shù)線蟲卵孵化。

關(guān)鍵詞? ? 香蕉;根結(jié)線蟲卵;分離;孵化;粉碎篩分法

中圖分類號(hào)：S432.4+5;S668.1? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A? ? DOI：10.19415/j.cnki.1673-890x.2019.19.012

香蕉根結(jié)線蟲?。∕eloidogyne incognita）是由根結(jié)線蟲屬（Meloidogyne spp.）的線蟲引起的，是為害香蕉的重要病害之一，各香蕉種植區(qū)均有發(fā)生，發(fā)病率一般為20%～30%，嚴(yán)重的達(dá)60%以上。香蕉被線蟲為害后，植株表現(xiàn)為葉黃、矮小，早衰，抽蕾困難，產(chǎn)量減少。有些蕉園由于根結(jié)線蟲的影響，有一半以上的香蕉樹不能結(jié)出有商品價(jià)值的果實(shí)[1-5]。根結(jié)線蟲的侵染導(dǎo)致香蕉嚴(yán)重減產(chǎn)，極大地影響了香蕉產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展[6-7]。

目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)香蕉根結(jié)線蟲的研究主要集中在防治方面[8-13]，而對(duì)于香蕉根結(jié)線蟲卵的分離與孵化研究較少，僅見劉志明等[14]研究了不同香蕉品種根滲出物對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化的影響，但未涉及線蟲卵的分離。因此，有必要對(duì)香蕉根結(jié)線蟲卵的分離以及卵的孵化進(jìn)行研究。本試驗(yàn)采用直接解剖分離法和粉碎篩分法分離香蕉根結(jié)線蟲，并利用濾液和蒸餾水對(duì)照在室溫和26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，計(jì)算卵的孵化率，以期為香蕉根結(jié)線蟲的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 儀器

顯微鏡、體視鏡、3.5 cm培養(yǎng)皿、200目和500目標(biāo)準(zhǔn)分樣篩。

1.1.2 材料

試驗(yàn)用香蕉根采自于云南省紅河熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所香蕉種植基地。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 香蕉根結(jié)線蟲卵的分離

1.2.1.1直接解剖分離法

將采集的香蕉根洗凈，選取帶根結(jié)病根在體視鏡下直接挑取線蟲卵粒。

1.2.1.2粉碎篩分法

將采集的香蕉根洗凈，收集帶根結(jié)病根，將病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)濾，收集500目篩子中的卵，離心后配成300個(gè)卵/mL的根結(jié)線蟲卵懸浮液。

1.2.2 根結(jié)線蟲卵的孵化

在無(wú)菌培養(yǎng)皿（直徑為3.5 cm）中加入根結(jié)線蟲卵懸浮液0.2 mL，即線蟲卵約60個(gè)，再加入根結(jié)濾液0.8 mL，分別置于室溫和26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，以蒸餾水為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)3次。在0， 2， 4， 6， 8， 10 d時(shí)于顯微鏡下觀察培養(yǎng)皿內(nèi)孵化出的二齡幼蟲（J2）數(shù)，并計(jì)算線蟲孵化率。以上試驗(yàn)重復(fù)3次。

線蟲孵化率（%）=孵化線蟲數(shù)/線蟲卵數(shù)×100

2 結(jié)果與分析

2.1 香蕉根結(jié)線蟲卵的分離

根結(jié)線蟲卵的分離方法有直接解剖分離法、粉碎篩分法等。試驗(yàn)對(duì)比了直接解剖分離法和粉碎篩分法2種方法分離線蟲卵的效果。直接解剖分離法能獲得較純凈的線蟲卵，但需在體視顯微鏡下操作，對(duì)操作者的技術(shù)熟練程度要求較大，且耗費(fèi)大量的時(shí)間。通過(guò)查閱大量的文獻(xiàn)，參考王鑫鵬等[15]的辦法，將香蕉根洗凈，收集帶根結(jié)病根，將病根剪成0.5～1.0 cm大小，置于植物粉碎機(jī)中粉碎，過(guò)濾，收集500目篩子中的卵，離心后得到大量的線蟲卵。通過(guò)此法可簡(jiǎn)單、快速分離得到試驗(yàn)所需的線蟲卵。因此，試驗(yàn)所需的線蟲卵均為此法獲得。

2.2 不同條件下香蕉根結(jié)線蟲卵的孵化率

根結(jié)線蟲具有親水性。在試驗(yàn)的前期，發(fā)現(xiàn)根結(jié)線蟲在濾液中浸泡8 d后，還有大量線蟲活著，并且隨著時(shí)間增加，二齡線蟲的數(shù)量呈增加趨勢(shì)。因此，試驗(yàn)研究濾液、培養(yǎng)溫度及蒸餾水培養(yǎng)對(duì)根結(jié)線蟲卵的孵化率影響，不同培養(yǎng)條件下香蕉根結(jié)線蟲卵的孵化率見表1。

從表1中可看出，在室溫條件下，加入濾液的線蟲卵孵化率10 d后達(dá)到43.22%，而蒸餾水對(duì)照的線蟲孵化率為27.35%;從時(shí)間上來(lái)看，與蒸餾水對(duì)照處理相比，在所記錄的各個(gè)時(shí)間，加入濾液的線蟲孵化率均比對(duì)照處理的孵化率高。

在26 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，加入濾液線蟲卵孵化率10 d后達(dá)到84.21%，而蒸餾水對(duì)照的線蟲孵化率為58.36%;另外，與蒸餾水對(duì)照處理相比，在所記錄的各個(gè)時(shí)間，加入濾液的線蟲孵化率均比對(duì)照處理的孵化率高。

通過(guò)表1中的數(shù)據(jù)可以看出，恒溫培養(yǎng)的卵孵化率比室溫培養(yǎng)的卵孵化率高，這可能是因?yàn)闇囟葘?duì)卵的孵化有影響。南方根結(jié)線蟲是云南省河口地區(qū)香蕉根結(jié)線蟲的優(yōu)勢(shì)種群[16-17]，而南方根結(jié)線蟲的適宜孵化溫度為25～35 ℃。另外，加入濾液后，在26 ℃恒溫培養(yǎng)10 d，線蟲卵孵化率為84.21%，卵孵化率高出對(duì)照的25.85%，這是因?yàn)闉V液是由香蕉根粉碎后沖洗過(guò)濾所得，里面可能中含有線蟲發(fā)育需要的營(yíng)養(yǎng)成分。

3 小結(jié)與討論

試驗(yàn)通過(guò)對(duì)比了直接解剖分離法和粉碎篩分法分離香蕉病根中根結(jié)線蟲的效果，結(jié)果為粉碎篩分法具有簡(jiǎn)單、快速的特點(diǎn)，能較快獲取所需線蟲卵的懸浮液，可用于香蕉病根中線蟲卵的分離與富集。

試驗(yàn)分別研究了室溫培養(yǎng)和26 ℃恒溫培養(yǎng)條件下用濾液培養(yǎng)和蒸餾水培養(yǎng)線蟲卵的孵化率。結(jié)果表明，在室溫條件或恒溫條件下，用濾液培養(yǎng)的卵孵化率高于蒸餾水培養(yǎng)的孵化率，室溫條件下培養(yǎng)10 d，線蟲的孵化率分別為43.22%和27.55%;26 ℃恒溫培養(yǎng)10 d，線蟲的孵化率分別為84.21%和58.36%。這可能是因?yàn)樵囼?yàn)是在2018年11月至2019年1月進(jìn)行，空氣溫度較低，未達(dá)到線蟲卵的適宜孵化溫度造成的。據(jù)報(bào)道，云南省河口地區(qū)香蕉根結(jié)線蟲的優(yōu)勢(shì)種群為南方根結(jié)線蟲[16]，而離體條件下，南方根結(jié)線蟲的卵適宜孵化溫度為25～35 ℃，最適溫度為27 ℃和26 ℃[17]。另外，濾液培養(yǎng)的卵孵化率高于蒸餾水培養(yǎng)的孵化率，有可能是濾液由香蕉根粉碎后沖洗過(guò)濾所得，里面可能中含有線蟲發(fā)育需要的營(yíng)養(yǎng)成分。

試驗(yàn)通過(guò)研究香蕉根結(jié)線蟲的分離和培養(yǎng)，得到了簡(jiǎn)單快速的線蟲卵分離和人工孵化方法，為香蕉根結(jié)線蟲的進(jìn)一步研究提供了基礎(chǔ)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張紹升，吳燕珠，翁自明.香蕉根結(jié)線蟲病及其病原鑒定[J].植物保護(hù)，1991，17 （2）：28.

[2] 李迅東，翟留香，孫茂林.云南省香蕉線蟲發(fā)生分布和種群密度調(diào)查[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，1999，12（1）：92-95.

[3] 鄢小寧，鄭服叢，林茂松.兩廣地區(qū)香蕉根際寄生線蟲的調(diào)查與鑒定[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，25（6）：4-8.

[4] 鄢小寧，林旺賢，鄭服叢.海南島香蕉寄生線蟲的調(diào)查[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，24（6）：13-20.

[5] 黃金玲，劉志明，陸秀紅，等.廣西香蕉植物線蟲病發(fā)生情況調(diào)查[J].植物保護(hù)，2011，37（60）：191-193.

[6] Jaizme-Vega M C， Tenoury P， Pinochet J， et al. Interactions between the root-knot Meloidogyne incognita and Glomus mosseae in banana[J]. Plant and Soil， 1997， 196（1）： 27-35.

[7] Meons T， Araya M， Swennen R， et al. Enhanced biodegradation of nematicides after repetitive applications and its effect on root and yield parameters in commercial banana plantations[J]. Biology and Fertility of Soils， 2001， 39（6）： 407-411.

[8] 李寶聚，段玉璽，崔國(guó)慶，等.蔬菜根結(jié)線蟲的發(fā)生與日光土壤消毒技術(shù)[J].中國(guó)蔬菜，2006（5）：49-50.

[9] 趙彥改，張國(guó)鋒，暴連群，等.5%阿維菌素B2乳油對(duì)香蕉根結(jié)線蟲病的的防治[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2017（21）：115，117.

[10] 蘇蘭茜，王康，阮云澤，等.3種殺線蟲劑對(duì)香蕉土壤線蟲群落結(jié)構(gòu)的影響[J].植物保護(hù)，2016，42（3）：91-98.

[11] 黃金玲，劉志明，陸秀紅，等.香蕉根結(jié)線蟲田間防治示范研究[J].農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2012，2（8）：25-27.

[12] 芮凱，肖彤斌，謝圣華，等.9種殺線劑對(duì)香蕉根結(jié)線蟲病的防效評(píng)價(jià)[J].植物保護(hù)，2011，3（5）：196-200.

[13] Jonathan EI{a}， Rajendran G. Biocontrol potential of the parasitic fungus Paecilomyces lilacinus against the root-knot nematode Meloidogyne incognita in banana （Abstract） [J]. Journal of Biological Control， 2000， 14（2）： 67-69.

[14] 劉志明，陸光藝，黃金玲，等.不同香蕉品種根滲出物對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化的影響[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，29（5）：564-566.

[15] 王鑫鵬，王從麗，李春杰.昆蟲病原線蟲共生菌對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化的影響[J].土壤與作物，2017，6（4）：256-262.

[16] 李迅東，翟留香，李芹.云南香蕉根際線蟲種群動(dòng)態(tài)的研究[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，19（4）：32-35.

[17] 陳立杰，魏峰，段玉璽，等.溫濕度對(duì)南方根結(jié)線蟲卵孵化和二齡幼蟲的影響[J].植物保護(hù)，2009（2）：48-52.

（責(zé)任編輯：敬廷桃）