青蛤苗種繁育技術(shù)及不同鹽度對(duì)青蛤發(fā)育各階段的影響

梁健+李永仁+郭永軍+高山+董洪寶+邢克智+閆喜武

摘 要：于2015年7月在天津大港地區(qū)開(kāi)展青蛤的工廠化人工育苗生產(chǎn)性試驗(yàn)，以探索青蛤最適的孵化密度和培育密度；并通過(guò)設(shè)置10個(gè)鹽度階梯（5‰～50‰），研究了不同鹽度對(duì)青蛤發(fā)育各階段的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明：青蛤受精卵孵化密度為8～12個(gè)/mL，其孵化率能達(dá)較高水平，幼蟲(chóng)培育密度為8～12個(gè)/mL時(shí)幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度和存活率可達(dá)較高水平；浮游期幼蟲(chóng)、變態(tài)期幼蟲(chóng)及稚貝的最適鹽度范圍均是20‰～25‰，最利于青蛤浮游幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)，其變態(tài)率高，畸形率低，D形幼蟲(chóng)游動(dòng)迅速，攝食積極。此鹽度也最利于稚貝的生長(zhǎng)。

關(guān)鍵詞：青蛤；鹽度；孵化；成活率

青蛤（Cyclina sinensis）屬簾蛤科，棲息在沿海灘涂泥灘地帶，為廣溫、廣鹽性貝類。其營(yíng)養(yǎng)豐富，味道鮮美，深受人們喜愛(ài)，曾廣泛分布于沿海大部分海水池塘，但由于缺乏保護(hù)意識(shí)，長(zhǎng)期過(guò)度采捕，導(dǎo)致自然資源大幅減少，天津地區(qū)現(xiàn)僅存于塘沽與大港的個(gè)別海水池塘[1-3]。因此對(duì)青蛤的人工養(yǎng)殖正逐步開(kāi)展起來(lái)，并取得良好的收益。養(yǎng)殖青蛤投資少、見(jiàn)效快，但是由于苗種缺乏，限制了青蛤養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展[4-6]。

目前來(lái)說(shuō)天津地區(qū)養(yǎng)殖貝類的苗種主要來(lái)自南方的一些沿海地區(qū)，但這樣的苗種并不能完全適應(yīng)本地的養(yǎng)殖環(huán)境，造成越冬養(yǎng)殖時(shí)大量死亡，限制天津地區(qū)的青蛤產(chǎn)業(yè)發(fā)展。利用本地貝類種群，進(jìn)行工廠化人工繁育土著苗種，是在天津發(fā)展貝類養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的重要前提[7-8]。而發(fā)展青蛤的人工育苗技術(shù)，為青蛤的養(yǎng)殖提供本地苗種，可以更快地實(shí)現(xiàn)農(nóng)民增收、企業(yè)增效、產(chǎn)業(yè)發(fā)展。

關(guān)于青蛤方面的研究起步時(shí)間較晚，我國(guó)學(xué)者對(duì)青蛤的生態(tài)結(jié)構(gòu)、繁殖生物學(xué)、生活習(xí)性等都進(jìn)行了研究，在工廠化和土池育苗試驗(yàn)成功后，又對(duì)青蛤幼蟲(chóng)的餌料，孵化和培育時(shí)的溫度、鹽度，附著基的選擇和其他方面都做了深入的研究，大規(guī)模青蛤育苗技術(shù)和水平都比之前更進(jìn)一步。但這些研究的對(duì)象主要為南方當(dāng)?shù)仄贩N，而我國(guó)海岸線很長(zhǎng)，地理環(huán)境存在著巨大差異。閆喜武[9]等報(bào)道過(guò)菲律賓蛤仔大連群體和莆田群體在卵徑、D形幼蟲(chóng)大小、浮游期長(zhǎng)短及平均日增長(zhǎng)量上均存在差異。鹽度是影響雙殼類存活、生長(zhǎng)發(fā)育的重要因素之一，當(dāng)鹽度不適宜時(shí)會(huì)降低海洋貝類幼蟲(chóng)對(duì)食物的消化吸收效率和不良環(huán)境的抵抗能力，嚴(yán)重影響貝類幼蟲(chóng)的存活和生長(zhǎng)能力[10]。關(guān)于海水鹽度對(duì)于貝類生長(zhǎng)發(fā)育的影響國(guó)內(nèi)外已有不少報(bào)導(dǎo)，但因種類和發(fā)育階段的不同，適應(yīng)范圍的差異也比較大[11-12]。在繁殖過(guò)程中，貝類幼蟲(chóng)對(duì)鹽度的變化較為敏感，在最適鹽度范圍內(nèi)進(jìn)行青蛤苗種繁育工作可以保證幼蟲(chóng)有較快的生長(zhǎng)速度，同時(shí)提高苗種的存活率[13-15]。因此，本文研究了鹽度變化對(duì)天津土著青蛤浮游期及稚貝期的影響，對(duì)青蛤不同時(shí)期的存活生長(zhǎng)進(jìn)行了比較，分析了不同時(shí)期的青蛤?qū)}度的適應(yīng)策略，對(duì)在天津開(kāi)展青蛤本地苗種繁育具有重要意義。

1 試驗(yàn)材料

本次人工育苗試驗(yàn)于2015年4月中旬開(kāi)始進(jìn)行，分兩批次在天津市濱海新區(qū)海升水產(chǎn)養(yǎng)殖有限公司的沉淀池中采捕二齡的青蛤，選擇殼面無(wú)損壞，活力良好，殼長(zhǎng)大于30 mm的個(gè)體作為種貝，種貝為本地土著品種。

2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

2.1 孵化密度、幼蟲(chóng)培育密度對(duì)青蛤幼蟲(chóng)變態(tài)率、生長(zhǎng)和存活影響

挑選好的種貝裝入扇貝籠中吊掛在室內(nèi)水泥池中，經(jīng)25天左右的升溫催熟達(dá)到性成熟，通過(guò)陰干流水等方法刺激種貝產(chǎn)卵排精，卵受精4 h后進(jìn)行洗卵，以免造成受精卵產(chǎn)生畸形。洗卵后將受精卵分布到孵化池中，調(diào)整密度為4、8、12、16個(gè)/mL，大概20 h后發(fā)育到D形幼蟲(chóng)，測(cè)量不同孵化密度下的孵化率。每天半量換水一次，水溫25～28 ℃，青蛤培育期間鹽度18‰～22‰，pH值8.4～8.6。

2.2 鹽度對(duì)青蛤各時(shí)期生長(zhǎng)發(fā)育和存活的影響

青蛤幼蟲(chóng)及稚貝的培育容器為2L的燒杯，在5‰～50‰之間設(shè)計(jì)10個(gè)梯度，分別為5‰、10‰、15‰、20‰、25‰、30‰、35‰、40‰、45‰、50‰，并設(shè)一個(gè)平行試驗(yàn)組。試驗(yàn)所用的海水都是經(jīng)過(guò)沙濾的海水，用海水晶或淡水調(diào)節(jié)至所需的鹽度，使用日本ATAGO手持光學(xué)鹽度計(jì)測(cè)定鹽度，水溫在25～28 ℃。受精卵孵化密度為15個(gè)/mL，浮游期幼蟲(chóng)培育密度為8個(gè)/mL，每天半量換水一次，測(cè)定不同鹽度下青蛤受精卵孵化率、浮游期幼蟲(chóng)和稚貝的生長(zhǎng)、存活及變態(tài)率。

孵化期試驗(yàn)：凡出現(xiàn)殼面扭曲，左右殼不對(duì)稱，直鏈絞合部彎曲，殼緣有缺刻，面盤(pán)異常的D形幼蟲(chóng)計(jì)為畸形幼蟲(chóng)。

浮游期試驗(yàn)：在不同鹽度的10個(gè)燒杯中布置相同密度（8個(gè)/mL）的青蛤D形幼蟲(chóng)，平均殼長(zhǎng)在111±6.41 μm，共培育5 d（青蛤浮游期相對(duì)較短）。

稚貝期試驗(yàn)：在育苗生產(chǎn)的水泥池中取大小規(guī)格基本一致的匍匐幼蟲(chóng)用于稚貝變態(tài)試驗(yàn)，平均殼長(zhǎng)在180±9.18 μm，培養(yǎng)20 d左右（雙水管稚貝出現(xiàn)為止）。

3 結(jié)果

3.1 孵化率

如表1所示，青蛤受精卵孵化密度為8～12個(gè)/mL時(shí)，其孵化率能達(dá)到80%以上，而過(guò)低或過(guò)高的培育密度均會(huì)影響受精卵的孵化率。

由表2和表3可知，4個(gè)/mL的培育密度下生長(zhǎng)速度最快，但存活率較低，16個(gè)/mL的培育密度生長(zhǎng)速度最慢，且存活率也最低。在8～12個(gè)/mL的條件下生長(zhǎng)速度和存活率均處于較高水平。

3.2 鹽度對(duì)青蛤孵化情況的影響

由圖1可知，在25～28 ℃的水溫下，青蛤受精卵可在10‰～40‰的鹽度范圍內(nèi)發(fā)育到D形幼蟲(chóng)，但在10‰和40‰的鹽度中變態(tài)非常低，分別為11.5%和22.6%，絕大多數(shù)受精卵在發(fā)育到擔(dān)輪幼蟲(chóng)前后就不再發(fā)育，不久沉底死亡；在鹽度5‰、45‰和50‰的孵化條件下，受精卵不能正常分裂發(fā)育；適合受精卵孵化鹽度范圍是15‰～30‰，而最適孵化的鹽度范圍為20‰～25‰，其變態(tài)率在82.3%～84.6%，且畸形率低，D形幼蟲(chóng)游動(dòng)迅速，攝食積極。

3.3 鹽度對(duì)浮游幼蟲(chóng)生長(zhǎng)、存活及變態(tài)的影響

D形幼蟲(chóng)剛放入5‰的鹽度環(huán)境中后，全部緊閉雙殼，沉入杯底，顯微鏡下觀察殼內(nèi)的面盤(pán)和胃內(nèi)纖毛仍在運(yùn)動(dòng)，48 h后全部死亡；在10‰鹽度環(huán)境下，D形幼蟲(chóng)在24 h內(nèi)游動(dòng)正常，未表現(xiàn)出不適狀態(tài)，但隨時(shí)間的延長(zhǎng)死亡量逐漸增多，3 d后達(dá)到45%以上，且存活下來(lái)的幼蟲(chóng)生長(zhǎng)速度偏慢，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)的平均生長(zhǎng)率僅為4.76 μm/d；D形幼蟲(chóng)對(duì)高鹽度反應(yīng)明顯，在鹽度40‰下5d后的存活率為36.2%，而存活下來(lái)的幼蟲(chóng)大多處于殼頂中期，并無(wú)法變態(tài)成匍匐幼蟲(chóng)。鹽度45‰組中，5 d后的幼蟲(chóng)存活僅為12.5%，幾乎沒(méi)有生長(zhǎng)，平均生長(zhǎng)率2.64 μm/d，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)仍處于D形幼蟲(chóng)階段。而在鹽度50‰環(huán)境下的幼蟲(chóng)游動(dòng)異常，在24 h內(nèi)便全部死亡，無(wú)法存活；青蛤浮游幼蟲(chóng)在15‰～30‰的鹽度范圍下適合生長(zhǎng)，20‰～25‰是最適宜青蛤浮游幼蟲(chóng)的鹽度范圍（表4）。

3.4 鹽度對(duì)稚貝生長(zhǎng)、存活及變態(tài)的影響

表5所示，匍匐幼蟲(chóng)在鹽度5‰的低鹽環(huán)境和45‰的高鹽環(huán)境中，在24 h時(shí)死亡率即超過(guò)50%，經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的培養(yǎng)僅有極少量個(gè)體發(fā)育至單水管稚貝，但無(wú)法發(fā)育至雙水管稚貝；在50‰的超高鹽度環(huán)境中72 h內(nèi)匍匐幼蟲(chóng)便全部死亡；在鹽度40‰組中經(jīng)過(guò)22 d的發(fā)育有12.5%的個(gè)體發(fā)育至雙水管稚貝，但次鹽度下的稚貝生長(zhǎng)速度較慢，平均日生長(zhǎng)率僅為4.82 μm/d，且大小參差不齊，活力較差，殼表面粘有大量污物；鹽度在10‰～35‰的各試驗(yàn)組中，雙水管稚貝的存活率均超多50%，即超50%的個(gè)體發(fā)育變態(tài)成雙水管稚貝，且在匍匐幼蟲(chóng)時(shí)期運(yùn)動(dòng)能力強(qiáng)，足強(qiáng)勁有力，攝食良好，生長(zhǎng)速度較快。其中鹽度20‰～25‰中，單水管期稚貝的存活率均超過(guò)85%，日生長(zhǎng)率也超過(guò)了10 μm/d，發(fā)育到雙水管稚貝時(shí)的存活率仍然在80%以上，且日生長(zhǎng)率達(dá)到12 μm/d左右，稚貝不僅大小整齊、活力良好，而且所需的變態(tài)時(shí)間也為最短，僅需14 d左右。10‰～35‰為稚貝生長(zhǎng)的適宜鹽度范圍，在20‰～25‰之間最為合適。

4 討論

4.1 孵化密度、培育密度對(duì)生長(zhǎng)、存活的影響

本研究結(jié)果顯示青蛤受精卵孵化密度為8～12個(gè)/mL時(shí)，其孵化率能達(dá)到80%以上；生長(zhǎng)速度最快是在4個(gè)/mL的培育密度下，但存活率較低，生長(zhǎng)速度最慢是在16個(gè)/mL的培育密度，且存活率也最低。在8～12個(gè)/mL的條件下生長(zhǎng)速度和存活率均處于較高水平，綜合考慮，青蛤的最適培育密度為8～12個(gè)/mL。

4.2 青蛤發(fā)育情況

灘涂貝類是我市主要的水產(chǎn)產(chǎn)業(yè)之一，但貝類苗種來(lái)自外地，在本地適應(yīng)性差。建立本地土著青蛤群體的育苗技術(shù)，有助于降低養(yǎng)殖風(fēng)險(xiǎn)。天津青蛤群體主要生活于海水池塘中，鹽度差異顯著，青蛤的幼蟲(chóng)發(fā)育與常見(jiàn)的文蛤、菲律賓蛤仔等灘涂雙殼類相比較有許多不同，其卵徑和D形幼蟲(chóng)均要大于其他種類，但浮游期最短、附著變態(tài)時(shí)幼蟲(chóng)規(guī)格最小，20 d后變態(tài)成雙水管稚貝僅320～340 μm，比其他種類相同天數(shù)的稚貝殼長(zhǎng)要小，說(shuō)明青蛤稚貝的生長(zhǎng)速度并不快。本研究中青蛤的最快生長(zhǎng)速度為12.48 μm/d（鹽度20‰時(shí)），較其他種類要慢一些，符合上述結(jié)論。青蛤浮游期短，說(shuō)明從外界獲取食物的時(shí)間短，外源性能量積累相對(duì)較少，這可能是導(dǎo)致其變態(tài)規(guī)格相對(duì)較小的原因。

4.3 適宜青蛤生長(zhǎng)的鹽度

生活在海洋中的貝類，必然受到鹽度的影響。由于不同種類對(duì)海水環(huán)境的要求不同，造成了對(duì)不同鹽度的適應(yīng)性[16]。海水鹽度與貝類滲透壓的調(diào)節(jié)緊密相關(guān)，一旦海水鹽度的變化范圍超過(guò)了海洋生物的調(diào)節(jié)能力，就可能造成生物體的死亡[17]。本試驗(yàn)得出孵化期和浮游期幼蟲(chóng)的適宜鹽度范圍為15‰～30‰，變態(tài)期的適宜鹽度范圍10‰～35‰，最適鹽度范圍均為20‰～25‰。結(jié)果表明，幼蟲(chóng)對(duì)低鹽環(huán)境的適應(yīng)能力要強(qiáng)于高鹽環(huán)境，并且在低鹽環(huán)境中生長(zhǎng)速度快于高鹽。隨著幼蟲(chóng)的發(fā)育和相應(yīng)器官的形成，對(duì)鹽度的耐受能力逐漸增加，適宜鹽度范圍也逐漸變廣。這種現(xiàn)象廣泛出現(xiàn)在廣鹽性貝類中，如泥蚶、文蛤等。而對(duì)于狹鹽性貝類正好相反，如菲律賓蛤仔等[18-20]。這種適應(yīng)性可能是由于青蛤自然分布于河口附近灘涂的中高潮帶處，經(jīng)常性的淡水匯入加之長(zhǎng)期的自然進(jìn)化造成青蛤?qū)}度的廣泛適應(yīng)性，并表現(xiàn)出對(duì)低鹽環(huán)境的適應(yīng)能力高于高鹽環(huán)境。

5 結(jié)論

以上試驗(yàn)結(jié)果對(duì)青蛤人工育苗生產(chǎn)有重要的指導(dǎo)作用：

土池育苗或工廠化育苗前期海水鹽度變化幅度應(yīng)控制在20%～25%為宜；室內(nèi)人工育苗生產(chǎn)中，青蛤受精卵孵化密度為8～12個(gè)/mL時(shí)，能夠保證有較高的孵化率；青蛤的最適培育密度為8～12個(gè)/mL。

進(jìn)入變態(tài)期后，幼蟲(chóng)要經(jīng)歷足、鰓、次生殼、進(jìn)出水管的形成及面盤(pán)的退化等一系列的生理機(jī)能和生活習(xí)性的重大改變，才能變態(tài)發(fā)育成稚貝，育苗生產(chǎn)往往在這段時(shí)期出現(xiàn)較高死亡率，所以幼蟲(chóng)下潛附著后的半個(gè)月時(shí)間里技術(shù)管理工作顯得尤為重要，應(yīng)保證餌料的充足、營(yíng)養(yǎng)的全面及水質(zhì)的良好。

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（收稿日期：2016-11-18）