高效液相色譜法測定通絡(luò)通散中柯里拉京的含量

梁瑩瑩 ，李 麗 ，赫 軍 ，張淑君 ，馬秉智 ，王曉雪 ，劉 曉 ★

（1.中日友好醫(yī)院 藥學(xué)部，北京 100029；2.北京工商大學(xué) 北京市植物資源研究開發(fā)重點實驗室，北京 100048）

通絡(luò)通方為我院中西醫(yī)結(jié)合腫瘤內(nèi)科常用的中藥驗方，外用具有溫經(jīng)通絡(luò)、活血化瘀之功效，能顯著改善化療引起的病理性神經(jīng)性疼痛[1～3]。通絡(luò)通散是對該驗方進行二次開發(fā)后研制的制劑，由老鸛草、淫羊藿、紅花等中藥組成，制成散劑，方便患者攜帶[4]。老鸛草作為方中的君藥，其藥材通用檢測成分為沒食子酸。但經(jīng)過初步試驗結(jié)果顯示，沒食子酸在該處方分析中存在干擾，而柯里拉京是其特征性成分[5]，專屬性強，能作為該制劑的質(zhì)量控制指標，故本研究采用高效液相色譜法（HPLC）對其制劑的指標性成分柯里拉京進行含量測定，為通絡(luò)通散質(zhì)量控制方法的建立提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent 1260型高效液相色譜儀，CPA225D十萬分之一電子天平（德國斯多利斯儀器系統(tǒng)有限公司），KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

通絡(luò)通散（批號 20150123、20150205、20150219）為中日友好醫(yī)院中藥制劑室自制；柯里拉京（批號：111623-201308）購自中國食品藥品檢定研究院。試驗中所用乙腈為色譜純，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[6，7]與系統(tǒng)適應(yīng)性試驗

色譜柱為 Waters Symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm），流動相為乙腈-0.01mol/L 磷酸氫二鉀溶液（用磷酸調(diào)節(jié) pH 至 2.14）（9：91，V/V）；流速：1.0ml/min；檢測波長：220nm；柱溫：40℃；進樣量：10μl。在上述色譜條件下，柯里拉京的保留時間為10.4min，組分分離良好，且其它成分無干擾。理論板數(shù)以柯里拉京峰計≥5000；分離度＞1.5。色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取15.79mg柯里拉京對照品，置50ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取本品0.1g，置于50ml具塞錐形瓶中，精密加入50%丙酮溶液10ml，稱定重量，超聲（功率：240W）提取0.5h，放冷，再稱定重量，用50%丙酮溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 陰性對照溶液的制備

取不含老鸛草的其他藥味各適量，按通絡(luò)通散的處方比例及制備工藝制成缺老鸛草的陰性樣品，再按“2.3”項下方法制成陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

圖1 高效液相色譜圖

分別精密吸取“2.2”項下柯里拉京對照品溶液 0.5ml、1ml、2ml、4ml、8ml置于 10ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成系列對照品溶液。分別精密吸取系列對照品溶液各10μl，按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積。以柯里拉京的峰面積積分值（y）為縱坐標，質(zhì)量濃度（，μg/ml）為橫坐標，繪制標準曲線，得回歸方程為y=40754.3736x-47.6917，r=0.9999。結(jié)果表明，柯里拉京的質(zhì)量濃度在7.90～505.28μg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果（n=6）

表2 3個不同批號通絡(luò)通散中柯里拉京的含量（n=3）

2.6 精密度試驗

精密吸取同一柯里拉京對照品溶液適量，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.46%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

精密稱取通絡(luò)通散置于50ml具塞錐形瓶中，按 “2.3”項下方法配制供試品溶液，于制備后0，2，4，6，8，10，12 h 時分別按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄柯里拉京峰面積，結(jié)果RSD為0.97%（n=6），表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗

精密稱取通絡(luò)通散置于50ml具塞錐形瓶中，按“2.3”項下方法配制供試品溶液，共制備6份，按“2.1”項下色譜條件測定柯里拉京的含量，結(jié)果平均含量為 4.57mg/g，RSD 為 1.38%（n=6），表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗

精密稱取已知柯里拉京含量的通絡(luò)通散適量，共6份，分別精密加入相當(dāng)量的柯里拉京對照品，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，并計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2.10 樣品含量測定

分別精密稱取不同批號的通絡(luò)通散約0.1g，各3份，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，再按“1.1”項下色譜條件進行測定，記錄峰面積，計算樣品中柯里拉京的含量，結(jié)果見表2。

3 討論

通絡(luò)通散為我院在研制劑，老鸛草為方中君藥，柯里拉京是其特征性成分，專屬性強，能作為該制劑的質(zhì)量控制指標?？吕锢┚哂锌拱┗钚?，其對神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肝癌等作用機理研究確切[8～11]，可以確定其為活性成分。但老鸛草成分復(fù)雜，通絡(luò)通散作為復(fù)方制劑，其藥效的物質(zhì)基礎(chǔ)尚待進一步研究，尚不能以偏概全，以柯里拉京為本制劑的全部有效成分。本實驗選取了老鸛草主要特征成分柯里拉京作為質(zhì)量控制指標，建立了通絡(luò)通散中柯里拉京的含量測定方法。通過紫外光譜掃描發(fā)現(xiàn)，柯里拉京的最大吸收波長在220nm處，與文獻報道一致[6]，故選用220nm為檢測波長；關(guān)于提取方法，由于制劑中其它組分對柯里拉京的干擾較大，故筆者參照文獻[2]，分別考察了烘干后甲醇提取、50%甲醇提取和50%丙酮提取3種方法，結(jié)果表明50%丙酮提取能有效除去雜質(zhì)，排除干擾，對柯里拉京的提取率高，重現(xiàn)性好，便于醫(yī)院制劑的常規(guī)檢驗工作，為最佳提取方法。