缺氧誘導(dǎo)因子-1α與非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌分子分型及血管生成的關(guān)系分析①

黃玉鈿 鄭 曦 吳欽穗 薛玉欽 吳 進(jìn)

(福建醫(yī)科大學(xué)附屬福州市第一醫(yī)院病理科，福州350009)

乳腺癌是我國(guó)常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，發(fā)病率有逐年升高的趨勢(shì)。非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌(Invasive breast carcinoma of no specific type，IBC-NST)是最常見(jiàn)的浸潤(rùn)性乳腺癌組織類型，占浸潤(rùn)性乳腺癌的40%～75%，具有高度異質(zhì)性，多種因素影響其惡性程度和患者預(yù)后。研究表明，乳腺癌的分子分型(Luminal A型、Luminal B型、HER2過(guò)表達(dá)型和三陰性型)與乳腺癌生物學(xué)行為和療效密切相關(guān)，已廣泛應(yīng)用于指導(dǎo)IBC-NST的臨床治療和預(yù)后判斷[1]。人類表皮生長(zhǎng)因子受體2(Human epidermal growth factor receptor,HER2)基因靶向治療或抗雌激素治療是針對(duì)HER2陽(yáng)性或激素受體陽(yáng)性的乳腺癌所提供的抗癌方案，卻不適用于三陰性型乳腺癌，尋求其他有效治療靶點(diǎn)對(duì)乳腺癌臨床治療具有重要意義。

在乳腺癌組織中，隨著癌細(xì)胞不斷增殖導(dǎo)致耗氧量增加，使得缺氧成為乳腺癌組織微環(huán)境中的普遍現(xiàn)象。研究表明，缺氧誘導(dǎo)因子-1α(Hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)在惡性腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧環(huán)境、腫瘤免疫逃逸及維持增殖活性等過(guò)程中發(fā)揮重要作用[2]。HIF-1α能否促進(jìn)乳腺癌血管生成以及HIF-1α表達(dá)與乳腺癌分子分型的關(guān)系尚未明確。我們通過(guò)研究IBC-NST中HIF-1α表達(dá)與分子分型、血管生成、病理分級(jí)及TNM分期等之間的關(guān)系，探討HIF-1α在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用及其意義。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 收集2010～2015年在福建醫(yī)科大學(xué)附屬福州市第一醫(yī)院行改良根治切除的非特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌150例，均為女性患者，年齡34～75歲，中位年齡51歲，術(shù)前未接受抗乳腺癌治療，并以30例乳腺癌旁正常乳腺組織作為對(duì)照，所有病例均有完整的臨床和病理資料，以具有代表性的石蠟包埋組織作為檢測(cè)對(duì)象。乳腺癌分子分型依據(jù)2013年St Gallen國(guó)際乳腺癌會(huì)議共識(shí)[3]，采用免疫組化(Immunohistochemistry，IHC)替代分型，分為：Luminal A型，為HER2陰性，雌激素受體(Estrogen receptor,ER)陽(yáng)性，孕激素受體(Progesterone receptor，PR)表達(dá)指數(shù)≥20%且Ki67表達(dá)指數(shù)<20%；Luminal B型有2種，其一為HER2陰性，ER陽(yáng)性，PR表達(dá)指數(shù)<20%或Ki67表達(dá)指數(shù)≥20%，另一為HER2陽(yáng)性，ER陽(yáng)性，PR和Ki67表達(dá)指數(shù)任意；HER2過(guò)表達(dá)型，為HER2陽(yáng)性，ER和PR均陰性；三陰性型為HER2、ER和PR均陰性。IBC-NST病理分級(jí)按照Elston & Ellis法[4]，根據(jù)腺管形成比例、細(xì)胞核多形性及核分裂數(shù)3項(xiàng)得分之和，分為1～3三個(gè)級(jí)別，分級(jí)越高反映腫瘤分化程度越差、惡性度越高。乳腺癌分期采用TNM分期法(AJCC/UICC第7版)，根據(jù)腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況將浸潤(rùn)性乳腺癌分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期。

1.1.2 試劑 EliVision免疫組化試劑盒購(gòu)自福州邁新生物公司。一抗試劑如下：鼠抗人HIF-1α單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司，兔抗人HER2單克隆抗體購(gòu)自瑞士Roche公司，兔抗人ER、PR單克隆抗體和鼠抗人Ki67、CD34單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Thermo Fisher公司。PathVysion HER2/CEP17 DNA雙色熒光探針試劑盒購(gòu)買Abbott Molecular公司。

1.2 方法

1.2.1 IHC EliVision免疫組化檢測(cè)二步法主要步驟如下：乳腺癌組織經(jīng)4%中性甲醛固定、石蠟包埋組織以3～4 μm厚度切片并貼于防脫玻片，經(jīng)脫蠟、水化及抗原修復(fù)后，以3%H2O2阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加一抗，室溫孵育60 min，滴加聚合物增強(qiáng)劑，室溫孵育20 min，滴加酶標(biāo)抗鼠/兔聚合物，室溫孵育30 min，再經(jīng)DAB顯色，蘇木精襯染，脫水干燥及封片后置于普通光學(xué)顯微鏡下觀察。另檢測(cè)正常乳腺組織HIF-1α、CD34的免疫組化表達(dá)情況作為對(duì)照。各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)過(guò)程中均以已知陽(yáng)性片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。HIF-1α結(jié)果判定采用半定量法：將定位于IBC-NST細(xì)胞核的染色按深淺評(píng)分，無(wú)著色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；再對(duì)整張切片中著色I(xiàn)BC-NST細(xì)胞占IBC-NST細(xì)胞總數(shù)的比例評(píng)分，著色細(xì)胞<5%為0分，著色細(xì)胞≥5%且<10%為1分，著色細(xì)胞≥10%且<50%為2分，著色細(xì)胞≥50%為3分；兩項(xiàng)得分乘積≥4為HIF-1α陽(yáng)性表達(dá)；正常對(duì)照組乳腺細(xì)胞核HIF-1α表達(dá)情況參照此法判讀。IBC-NST組織HER2免疫組化結(jié)果判讀根據(jù)2018年ASCO/CAP發(fā)布的檢測(cè)指南[5]，將3+(10%以上浸潤(rùn)性癌細(xì)胞呈強(qiáng)且完整的細(xì)胞膜染色)定義為HER2陽(yáng)性；2+(10%以上浸潤(rùn)性癌細(xì)胞呈弱到中等強(qiáng)度的完整細(xì)胞膜染色)為結(jié)果不確定，需進(jìn)一步熒光原位雜交法(Fluorescence in situ hybridization,FISH)檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增情況后再判定陽(yáng)性或陰性；1+及0則定義為HER2陰性。ER和PR表達(dá)結(jié)果的判讀根據(jù)2010年ASCO/CAP發(fā)布的乳腺癌ER、PR免疫組化檢測(cè)指南[6]，評(píng)估整張切片中ER或PR陽(yáng)性的IBC-NST細(xì)胞數(shù)占IBC-NST細(xì)胞總數(shù)的百分比，當(dāng)≥1%的IBC-NST細(xì)胞核呈現(xiàn)不同程度的ER或PR著色時(shí)，即為ER或PR陽(yáng)性。Ki67結(jié)果判讀方法參照2011年國(guó)際乳腺癌Ki67工作組共識(shí)[7]：選取切片中IBC-NST細(xì)胞核Ki67表達(dá)率高的熱點(diǎn)區(qū)，于高倍視野下評(píng)估Ki67陽(yáng)性的IBC-NST細(xì)胞數(shù)占IBC-NST細(xì)胞總數(shù)的百分比，觀察3個(gè)以上高倍視野(計(jì)數(shù)500個(gè)以上IBC-NST細(xì)胞)，取平均值作為Ki67表達(dá)指數(shù)。CD34結(jié)果判讀參照Weidner標(biāo)準(zhǔn)[8]：IBC-NST組織內(nèi)CD34細(xì)胞漿著色的單個(gè)血管內(nèi)皮細(xì)胞或細(xì)胞簇，不論是否形成管腔，均代表1個(gè)微血管，但管徑大于8個(gè)紅細(xì)胞直徑的血管不作為計(jì)數(shù)，選擇5個(gè)富于微血管的熱點(diǎn)區(qū)，在200倍視野下計(jì)數(shù)每個(gè)視野中的微血管數(shù)量，取平均值作為微血管密度(Microvessel density，MVD)；正常對(duì)照組MVD參照此法判讀。

1.2.2 FISH HER2 IHC 2+的IBC-NST組織進(jìn)一步通過(guò)FISH檢測(cè)HER2基因擴(kuò)增情況，采用DNA雙色熒光探針試劑盒進(jìn)行檢測(cè)。主要步驟如下：經(jīng)4%中性甲醛固定、石蠟包埋的乳腺癌組織按3～4 μm 厚度切片，貼于涂膠玻片上，切片經(jīng)脫蠟、漂洗、固定、脫水、自然干燥后，取10 μl探針工作液滴加于組織切片上，橡膠水泥封邊，將玻片置于原位雜交儀中，78℃變性5 min后，42℃雜交12～18 h，雜交后經(jīng)洗滌、干燥、再滴加10 μl的4′,6-二脒基-2-苯基吲哚，通過(guò)熒光顯微鏡觀察檢測(cè)結(jié)果(橘紅色熒光標(biāo)記HER2，綠色熒光標(biāo)記CEP17)后于-20℃冰箱中避光保存。HER2 IHC 2+的IBC-NST組織的HER2 FISH結(jié)果判讀根據(jù)2018年ASCO/CAP指南[5]：復(fù)查確定HER2 IHC結(jié)果為2+，對(duì)同一組織進(jìn)行FISH檢測(cè)后，在IHC 2+的浸潤(rùn)性癌區(qū)域計(jì)數(shù)至少20個(gè)浸潤(rùn)性癌細(xì)胞的FISH熒光信號(hào)，將HER2/CEP17≥2．0且HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞≥4．0，或HER2/CEP17<2．0但HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞≥6．0判定為HER2基因擴(kuò)增(HER2陽(yáng)性)；將HER2/CEP17≥2．0且HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞<4．0，或HER2/CEP17<2．0且HER2拷貝數(shù)/細(xì)胞<6．0判定為HER2基因無(wú)擴(kuò)增(HER2陰性)。

2 結(jié)果

2.1 HIF-1α和MVD在IBC-NST和正常乳腺組織中的表達(dá)差異 HIF-1α免疫組化陽(yáng)性表達(dá)于乳腺癌細(xì)胞核(圖1A)，HIF-1α在IBC-NST中的表達(dá)陽(yáng)性率高于正常對(duì)照組的陽(yáng)性率，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。CD34免疫組化陽(yáng)性表達(dá)于乳腺癌間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞漿(圖1B)，CD34標(biāo)記的IBC-NST間質(zhì)MVD高于正常對(duì)照組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

2.2 HIF-1α表達(dá)與IBC-NST年齡、病理分級(jí)及TNM分期的關(guān)系 HIF-1α在不同年齡、病理分級(jí)的IBC-NST分組中陽(yáng)性表達(dá)的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HIF-1α在TNM Ⅲ～Ⅳ期IBC-NST中的表達(dá)陽(yáng)性率為71.9%，高于TNM Ⅰ～Ⅱ期IBC-NST中的53.5%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 HIF-1α表達(dá)與IBC-NST分子分型的關(guān)系 HIF-1α在Luminal A型、Luminal B型、HER2過(guò)表達(dá)型和三陰性型IBC-NST中的表達(dá)陽(yáng)性率分別為28.1%(9/32)、56.4%(31/55)、85.3%(29/34)和79.3%(23/29)。HER2過(guò)表達(dá)型或三陰性型IBC-NST中的HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率均高于Luminal A型或Luminal B型，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，Luminal B型IBC-NST中HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率高于Luminal A型(P<0.05)，而HER2過(guò)表達(dá)型和三陰性型間的HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖2。

2.4 IBC-NST中HIF-1α表達(dá)與HER2、ER、PR及Ki67表達(dá)的關(guān)系 IHC檢測(cè)HER2陽(yáng)性(3+)的乳腺癌顯示10%以上浸潤(rùn)性癌細(xì)胞呈強(qiáng)且完整的細(xì)胞膜染色(圖1C)，HER2 IHC 2+的IBC-NST經(jīng)FISH檢測(cè)有HER2基因擴(kuò)增者(圖3)也為HER2陽(yáng)性。ER、PR和Ki67免疫組化陽(yáng)性均表達(dá)于IBC-NST細(xì)胞核(圖1D、E和F)。HIF-1α陽(yáng)性組IBC-NST的HER2陽(yáng)性率與HIF-1α陰性組IBC-NST的HER2陽(yáng)性率相比，兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HIF-1α陽(yáng)性組IBC-NST的ER和PR陽(yáng)性率均低于HIF-1α陰性組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HIF-1α陽(yáng)性組IBC-NST的Ki67表達(dá)指數(shù)高于HIF-1α陰性組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),見(jiàn)表3。

圖1 免疫組化檢測(cè)IBC-NST中HIF-1α、CD34、HER2、ER、PR和Ki67的陽(yáng)性表達(dá)Fig.1 Positive expression of HIF-1α,CD34,HER2,ER,PR and Ki67 in IBC-NST by immunohistochemistryNote: A.HIF-1α;B.CD34;C.HER2;D.ER;E.PR;F.Ki67.

表1 HIF-1α和MVD在IBC-NST和正常乳腺組織中的表達(dá)差異

Tab.1 Differential expression of HIF-1α and MVD between IBC-NST and normal breast tissues

GroupsnHIF-1α positiveMVDNormal breast302(6.7%)12.43±4.06IBC-NST15092(61.3%)1)28.37±7.831)

Note：Compared with normal breast，1)P<0.05.

表2 HIF-1α表達(dá)與IBC-NST年齡、病理分級(jí)及TNM分期的關(guān)系

Tab.2 Relationship between HIF-1α expression and age,pathologic grade and TNM stage of IBC-NST

GroupsnHIF-1α positivePAge<507247(65.3%)≥507845(57.7%)>0.05Pathologic grades13419(55.9%)24927(55.1%)36746(68.7%)>0.05TNM stagesⅠ-Ⅱ8646(53.5%)Ⅲ-Ⅳ6446(71.9%)<0.05

2.5 IBC-NST中HIF-1α表達(dá)與MVD的關(guān)系 HIF-1α陽(yáng)性組(92例)IBC-NST的MVD高于HIF-1α陰性組(58例)IBC-NST，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖4。

圖2 HIF-1α表達(dá)與IBC-NST分子分型的關(guān)系Fig.2 Relationship between HIF-1α expression and molecular subtype of IBC-NSTNote: Compared with Luminal A，*.P<0.05；compared with Luminal A or B，#.P<0.05.

圖3 熒光原位雜交檢測(cè)IBC-NST中HER2基因的擴(kuò)增Fig.3 Amplification of HER2 gene in IBC-NST by fluorescence in situ hybridization

表3 IBC-NST中HIF-1α表達(dá)與HER2、ER、PR和Ki67表達(dá)的關(guān)系

Tab.3 Relationship between HIF-1α expression and HER2,ER,PR and Ki67 expression in IBC-NST

GroupsnHER2positiveERpositivePRpositiveKi67index(%)HIF-1α positive9238(41.3%)45(48.9%)43(46.7%)27.86±8.01HIF-1α negative5821(36.2%)42(72.4%)1)41(70.7%)1)19.03±5.491)

Note：Compared with positive group，1)P<0.05.

圖4 IBC-NST中HIF-1α表達(dá)與MVD的關(guān)系Fig.4 Relationship between HIF-1α expression and MVD in IBC-NSTNote: Compared with negative group，*.P<0.05.

3 討論

缺氧是惡性腫瘤的一個(gè)重要特征，腫瘤細(xì)胞的高生長(zhǎng)活性是造成腫瘤微環(huán)境相對(duì)缺氧的主要因素。HIF-1α基因位于人染色體14q21～24，編碼826個(gè)氨基酸，對(duì)缺氧極為敏感，是HIF-1所特有的一種氧調(diào)節(jié)亞單位[9]。在常氧狀態(tài)下HIF-1α很難檢測(cè)到，而在缺氧條件下HIF-1α表達(dá)活性增強(qiáng)，并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)與HIF-1β亞單位結(jié)合形成有活性的HIF-1二聚體，再結(jié)合到靶基因的啟動(dòng)子或增強(qiáng)子的缺氧反應(yīng)元件上，從而激活多種基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)，產(chǎn)生對(duì)缺氧的適應(yīng)，維持惡性腫瘤的生長(zhǎng)活性，在多種惡性腫瘤中檢測(cè)到HIF-1α呈高表達(dá)，而在相應(yīng)的正常組織或良性腫瘤中不表達(dá)或低表達(dá)[10]。

本研究為排除特殊型浸潤(rùn)性乳腺癌一些特殊的生物學(xué)行為、分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及預(yù)后因素對(duì)數(shù)據(jù)分析結(jié)果的影響，選擇IBC-NST作為研究對(duì)象。研究結(jié)果顯示IBC-NST中HIF-1α的表達(dá)陽(yáng)性率較正常對(duì)照組顯著增高，表明HIF-1α的高表達(dá)是乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中一個(gè)重要的分子事件，Aghazadeh等[11]研究表明，HIF-1α高表達(dá)能抑制STAT3活性從而下調(diào)抑癌基因PTEN的轉(zhuǎn)錄水平，而PTEN的低表達(dá)提高了乳腺癌細(xì)胞在缺氧環(huán)境中的增殖活性，促進(jìn)乳腺癌的進(jìn)展。本研究顯示隨著乳腺癌TNM分期升級(jí)，HIF-1α表達(dá)陽(yáng)性率顯著增高，提示HIF-1α能促進(jìn)乳腺癌增殖轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致分期升級(jí)，是代表預(yù)后不良的一項(xiàng)指標(biāo)。但本研究中不同病理分級(jí)IBC-NST組間HIF-1α表達(dá)無(wú)顯著差異，不影響乳腺癌分化程度，與Sharma等[12]研究一致，提示HIF-1α促進(jìn)乳腺癌發(fā)展的機(jī)制與調(diào)控癌細(xì)胞分化無(wú)密切關(guān)系，而存在其他促癌機(jī)制。

有關(guān)HIF-1α與乳腺癌分子分型的研究鮮見(jiàn)報(bào)道，Yehia等[13]研究結(jié)果顯示乳腺癌不同分子分型中HIF-1α蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而本研究結(jié)果顯示HER2過(guò)表達(dá)型或三陰性型IBC-NST中的HIF-1α表達(dá)均顯著高于Luminal A型或B型，提示激素受體陰性的前兩型乳腺癌中HIF-1α表達(dá)水平高于激素受體陽(yáng)性的后兩型乳腺癌，且本研究中HIF-1α陽(yáng)性組ER、PR低表達(dá)的結(jié)果也證明了這一現(xiàn)象。Padró等[14]研究結(jié)果與本研究一致，并且認(rèn)為HIF-1α是通過(guò)誘導(dǎo)泛素連接酶間接增強(qiáng)ER、PR的水解以拮抗ER、PR活性，而非直接抑制其轉(zhuǎn)錄，因此HIF-1α的高表達(dá)也提示乳腺癌抗雌激素治療效果不理想。本研究中HER2過(guò)表達(dá)型和三陰性型IBC-NST間HIF-1α的表達(dá)無(wú)顯著差異，且HER2在HIF-1α陽(yáng)性與陰性組間表達(dá)也無(wú)顯著差異，均提示HER2對(duì)HIF-1α的表達(dá)無(wú)調(diào)控作用。三陰性型和HER2過(guò)表達(dá)型乳腺癌都不適用抗雌激素治療，而且三陰性型相對(duì)HER2過(guò)表達(dá)型而言，尚缺少有效的基因治療靶點(diǎn)。HIF-1α的高表達(dá)提示其可為激素受體陰性乳腺癌，尤其是三陰性型乳腺癌的治療提供更多的選擇，而對(duì)于HER2過(guò)表達(dá)型乳腺癌聯(lián)合HER2和HIF-1α兩種靶向治療也有望進(jìn)一步提高療效。Xiang等[15]研究顯示，熱休克蛋白90的第二代抑制劑Ganetespib能顯著下調(diào)HIF-1α的mRNA和蛋白表達(dá)，降低多個(gè)下游基因活性，有效抑制乳腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移，顯示HIF-1α在基因靶向治療方面具有重要的潛在價(jià)值。

本研究顯示HIF-1α陽(yáng)性組Ki67增殖指數(shù)顯著高于HIF-1α陰性組，表明HIF-1α具有調(diào)控乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)周期、促進(jìn)乳腺癌增殖能力的作用，提示抑制乳腺癌HIF-1α的表達(dá)能有效降低乳腺癌的增殖活性，提高療效。Sato-Tadano等[16]研究也表明HIF-1α能通過(guò)誘導(dǎo)己糖激酶Ⅱ增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞糖酵解活性，調(diào)控細(xì)胞代謝及生長(zhǎng)周期，進(jìn)而提高乳腺癌細(xì)胞Ki67增殖指數(shù)。本研究還顯示Luminal B型IBC-NST的HIF-1α表達(dá)顯著高于Luminal A型。Luminal A和B型乳腺癌除了具有激素受體陽(yáng)性的共同點(diǎn)外，Ki67指數(shù)是區(qū)分兩者的重要條件之一，Luminal A型有一個(gè)必備條件是Ki67指數(shù)<20%，而Luminal B型則包含相當(dāng)數(shù)量Ki67指數(shù)≥20%的乳腺癌，提示Luminal B型乳腺癌HIF-1α高表達(dá)可能是此型乳腺癌中部分病例Ki67高表達(dá)的因素之一，而HIF-1α能否作為區(qū)分Luminal A和B型乳腺癌的一個(gè)參考指標(biāo)，其意義及表達(dá)指數(shù)截?cái)嘀涤写M(jìn)一步研究。

腫瘤間質(zhì)微血管生成是腫瘤細(xì)胞獲得營(yíng)養(yǎng)并賴以生存、增殖的最基本條件之一。在多種惡性腫瘤中，微血管生成水平高于正常組織，且與腫瘤惡性程度密切相關(guān)[17,18]。本研究結(jié)果顯示，IBC-NST的MVD顯著高于正常對(duì)照組，表明微血管生成在乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中扮演重要角色。本研究還顯示，HIF-1α陽(yáng)性組IBC-NST的MVD顯著高于HIF-1α陰性組，表明HIF-1α具有促進(jìn)乳腺癌血管生成的作用。HIF-1α的促血管生成作用是通過(guò)HIF-1α/VEGF通路，上調(diào)腫瘤細(xì)胞VEGF轉(zhuǎn)錄合成水平，促進(jìn)間質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)及微血管的形成[19,20]。此外，HIF-1α可通過(guò)上調(diào)VEGF的表達(dá)以阻礙腫瘤微環(huán)境中樹突狀細(xì)胞的成熟，削弱其抗原呈遞作用[21]；HIF-1α還能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞表達(dá)PD-L1，通過(guò)結(jié)合T細(xì)胞上的受體PD-1誘導(dǎo)CTL細(xì)胞失活與凋亡[2]，以上均可抑制免疫細(xì)胞的腫瘤免疫功能，導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞的免疫逃逸而獲得增殖活性。

癌細(xì)胞過(guò)度增生導(dǎo)致的腫瘤微環(huán)境相對(duì)缺氧是癌組織進(jìn)一步增殖所面臨的障礙之一，HIF-1α能誘導(dǎo)間質(zhì)血管生成，提高腫瘤血供，增加乳腺癌腫瘤微環(huán)境中的血氧水平，為乳腺癌生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)支持。因此，抑制腫瘤血管生成是抗乳腺癌治療的重要手段，由于抗血管生成藥物Avastin通過(guò)中和VEGF分子的途徑抗乳腺癌血管生成的療效受到質(zhì)疑，使得具有促進(jìn)VEGF合成作用的HIF-1α基因成為關(guān)注熱點(diǎn)之一[22]。開發(fā)以HIF-1α為靶點(diǎn)的小分子抑制劑，使其通過(guò)下調(diào)HIF-1α/VEGF級(jí)聯(lián)反應(yīng)抑制VEGF合成從而拮抗乳腺癌血管生成，對(duì)于乳腺癌，尤其是三陰性型乳腺癌的治療具有重要價(jià)值。