與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對(duì)葡萄果肉細(xì)胞生理生化影響的差異研究

禹滿 陳競(jìng)超 瞿巾卓 劉芳 潘小霞 楊明摯

（1. 云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，昆明 650000；2. 云南大學(xué)農(nóng)學(xué)院，昆明 650000）

植物內(nèi)生真菌（Endophytic fungi）是指整個(gè)或部分生活史存活于健康植物各種組織和器官內(nèi)部，且不引發(fā)宿主植物明顯病害癥狀的真菌［1］。在大多數(shù)情況下，內(nèi)生真菌與植物之間是互惠共生的，一方面內(nèi)生真菌通過(guò)植物體獲得營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、庇護(hù)和傳播；另一方面植物內(nèi)生真菌可通過(guò)產(chǎn)生生物活性物質(zhì)或借助信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)宿主植物提供保護(hù)，增強(qiáng)植物抗病、抗蟲(chóng)、抗干旱脅迫等能力［2］。已有研究表明，內(nèi)生真菌能夠產(chǎn)生次生代謝產(chǎn)物如萜類、生物堿、黃酮類和苯丙素類等［3］；1994年朱至清等［4］首次報(bào)道從云南紅豆杉樹(shù)皮中分離出一株可以合成紫杉醇的內(nèi)生真菌；王曉龍［5］對(duì)懷山藥優(yōu)勢(shì)內(nèi)生真菌的次生代謝產(chǎn)物進(jìn)行研究，分離鑒定出8個(gè)化合物分別屬于甾體、生物堿、脂肪酸及脂肪酸酯類成分。由于宿主不同內(nèi)生真菌產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物也不同，不僅可以產(chǎn)生與宿主相同或相似的次生代謝產(chǎn)物，而且還能產(chǎn)生宿主中不具備的新化合物，如苦馬豆素（Swainsonine，SW）活性分子。SW是一種有毒生物堿，存在于豆科苦馬豆屬、黃芪屬和棘豆屬等多種植物中，可引起牲畜中毒。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)SW的真正生產(chǎn)者是這些宿主植物的內(nèi)生真菌［6］。這些研究結(jié)果表明了植物內(nèi)生菌對(duì)宿主植物具有不可忽視的生理生化和代謝效應(yīng)。

自然條件下由于與植物內(nèi)生真菌菌群結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性和種類的多樣性，許多與植物共生的內(nèi)生真菌類群，以及內(nèi)生真菌與宿主植物間的相互作用關(guān)系并未被完全闡明［7］。利用離體培養(yǎng)的植物細(xì)胞和分離純培養(yǎng)的內(nèi)生菌株建立有效的共培養(yǎng)體系，為探索特定內(nèi)生菌菌株和植物細(xì)胞在生理生化層面的相互作用提供了一種可控的研究模型［8］。有研究從盾葉薯蕷根狀莖中分離到一株內(nèi)生真菌可以與盾葉薯蕷愈傷組織協(xié)調(diào)生長(zhǎng)［7］。目前已有研究證明通過(guò)施加內(nèi)生真菌能夠改變葡萄的生理生化品質(zhì)。黃麗華［9］通過(guò)對(duì)峙培養(yǎng)法建立了葡萄細(xì)胞與內(nèi)生真菌的共培養(yǎng)體系表明兩者共同培養(yǎng)能夠調(diào)控愈傷組織理化性質(zhì)；張秀英［10］通過(guò)研究葡萄細(xì)胞對(duì)內(nèi)生真菌誘導(dǎo)子的理化響應(yīng)證實(shí)了內(nèi)生真菌提取物對(duì)植物細(xì)胞能夠產(chǎn)生影響。但是關(guān)于葡萄內(nèi)生真菌直接接觸葡萄細(xì)胞的共培養(yǎng)方式所帶來(lái)的生理生化響應(yīng)目前尚不清楚。

本研究將分離自葡萄葉片的不同內(nèi)生真菌菌株直接接種于具有合成花色苷能力的葡萄果肉細(xì)胞上，構(gòu)建葡萄細(xì)胞與內(nèi)生真菌的共培養(yǎng)體系，在細(xì)胞水平上研究與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對(duì)葡萄細(xì)胞生長(zhǎng)及類黃酮代謝途徑影響的差異性。研究結(jié)果除了發(fā)掘到一批具有進(jìn)一步研究和利用價(jià)值的內(nèi)生真菌資源外，同時(shí)也為從龐大數(shù)量的內(nèi)生菌中篩選具有不同潛在應(yīng)用價(jià)值的內(nèi)生菌資源提供必要方法和技術(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌株：選取本實(shí)驗(yàn)室從赤霞珠（Vitis vinifera）、玫瑰蜜（V. ViniferaL.×V. labruscaL.）、夏黑葡萄（V. ViniferaL.×V. labruscaL.）的葉片中分離出的內(nèi)生真菌菌株；各菌株在前期試驗(yàn)中已經(jīng)通過(guò)形態(tài)和分子鑒定。本次試驗(yàn)共選取了47株內(nèi)生真菌，18個(gè)屬，其中鏈格孢屬6株，附球菌屬8株，黑孢霉屬4株，鐮刀菌屬4株，刺盤(pán)孢屬6株，間座殼屬、毛殼菌屬、葡萄座腔菌屬、炭層菌屬、炭團(tuán)菌屬各2株，單端孢屬、多節(jié)孢屬、截盤(pán)多毛孢屬、莖點(diǎn)霉屬、球座菌屬、亞隔孢殼屬、多孢菌屬、擬盤(pán)多毛孢屬各1株和1株未能歸屬的菌株（表1）。

供試葡萄細(xì)胞：材料選用生長(zhǎng)旺盛且長(zhǎng)勢(shì)一致紫色佳美果肉愈傷組織，并已繼代培養(yǎng)5代以上。繼代培養(yǎng)基為GS+0.2 mg/L KT+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+7.6 g/L瓊脂，pH為5.8。培養(yǎng)條件：25±2℃恒溫箱中暗培養(yǎng)，約25 d繼代1次。

1.2 方法

1.2.1 內(nèi)生真菌與葡萄愈傷組織的共培養(yǎng)體系構(gòu)建 選取同一代相同來(lái)源且生長(zhǎng)良好的愈傷組織1 g左右，接種于含葡萄細(xì)胞繼代培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿正中央，25±2℃條件下放入無(wú)光條件下培養(yǎng)7 d，同時(shí)將供試菌株置于PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)5 d左右，然后用蘸了無(wú)菌水的解剖針輕微蘸一下生長(zhǎng)良好的相應(yīng)菌株的菌落，接種于愈傷組織上，每個(gè)處理7個(gè)重復(fù)。愈傷組織對(duì)照以同樣方式接種無(wú)菌水，內(nèi)生真菌對(duì)照接種相應(yīng)內(nèi)生真菌不接種愈傷組織，以檢測(cè)接種是否成功的陽(yáng)性對(duì)照。從接種內(nèi)生真菌后至接種后第6天，每天觀察和統(tǒng)計(jì)愈傷組織褐化情況。并在共培養(yǎng)培養(yǎng)第6天后取出愈傷組織與內(nèi)生真菌的共生體，液氮處理后置于-80℃冰箱中保存待用。

表1 試驗(yàn)中使用內(nèi)生真菌菌株

1.2.2 葡萄細(xì)胞的生理生化指標(biāo)分析 葡萄細(xì)胞增殖倍數(shù)（CIM）=（W樣-m）/m

式中：W樣為葡萄愈傷組織與內(nèi)生真菌的共生體的質(zhì)量（g）；m為初始接種葡萄愈傷組織的質(zhì)量（g）。

1.2.2.1 葡萄細(xì)胞花色苷總量的測(cè)定 稱取一定量鮮細(xì)胞（0.4 g左右），加入1 mL花色苷提取液（15%鹽酸（1.5 mol/L）-乙醇溶液）研磨，然后用花色苷提取液定容至5 mL，室溫下超聲提取30 min，離心（4℃，5 000 r/min，15 min），上清液即為花色苷提取液。花色苷的測(cè)定用分光光度計(jì)采用pH示差法測(cè)定。取兩份1 mL的花色苷提取液，分別用pH 1.0 KCl和pH 4.5 CH3COONa緩沖液定容至6 mL，待反應(yīng)平衡后（約60 min），用分光光度計(jì)分別測(cè)定兩份溶液在700 nm和最大吸收峰波長(zhǎng)535 nm處的吸光度值，以蒸餾水代替提取液做對(duì)照?；ㄉ湛偭坑肨AC（Total anthocyanins content）表示，通過(guò)以下公式計(jì)算各樣品中花色苷含量［11］：

式中：ε為矢車(chē)菊-3-葡萄糖苷的摩爾消光系數(shù)為26 900 L/mol /cm；L為比色皿的寬度（1 cm）；Mw為矢車(chē)菊-3-葡萄糖苷的相對(duì)分子質(zhì)量449.2 g /mol；DF為稀釋倍數(shù)；V為提取液體積（mL）；m為樣品鮮重（g）。

1.2.2.2 苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性的測(cè)定方法 準(zhǔn)確稱取一定量愈傷組織細(xì)胞，加入少量PVP，1 mL預(yù)冷的0.05 mol/L pH 8.7硼酸緩沖液，迅速研磨后定容至5 mL，離心（4℃，10 min，8 000 r/min）。上清液即酶液。酶反應(yīng)體系：0.05 mol/L pH 8.7硼酸緩沖液4 mL、0.02 mol/L苯丙氨酸溶液1 mL，酶液1 mL，40℃水浴反應(yīng)1 h后，加入0.2 mL 6 mol/L HCl終止反應(yīng)，以硼酸緩沖液代替酶液做為空白，在290 nm下測(cè)定OD值［10］：

式中：V1為提取酶液的總體積（mL）；V2為測(cè)定時(shí)取用酶液體積（mL）；m為樣品鮮重（g）；t為反應(yīng)時(shí)間（min）。

1.2.3 數(shù)據(jù)分析 運(yùn)用Excel整理數(shù)據(jù)，制作圖表，并用IBM SPSS Statistics 22.0軟件對(duì)共培養(yǎng)后葡萄細(xì)胞的生理生化指標(biāo)進(jìn)行單因素方差分析，以及共培養(yǎng)后葡萄細(xì)胞的生理生化響應(yīng)指數(shù)對(duì)試驗(yàn)所用不同內(nèi)生真菌進(jìn)行聚類分析。對(duì)葡萄細(xì)胞的褐化類型進(jìn)行數(shù)字化標(biāo)記：正常葡萄細(xì)胞標(biāo)記為0，輕度褐化標(biāo)記為1，中度褐化標(biāo)記為2，高度褐化標(biāo)記為3。其中葡萄細(xì)胞某指標(biāo)的響應(yīng)指數(shù)RI =（該指標(biāo)樣品測(cè)量值-該指標(biāo)對(duì)照平均值）/該指標(biāo)對(duì)照平均值。

2 結(jié)果

2.1 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)能引起葡萄細(xì)胞不同程度的褐化

與不同內(nèi)生真菌菌株共培養(yǎng)后可以引起葡萄愈傷組織表現(xiàn)出不同程度的褐化作用，依據(jù)引起的愈傷組織褐化程度分成正常（未褐化）、輕度褐化、中度褐化、高度褐化4個(gè)等級(jí)（圖1）。所有參與測(cè)試的菌株中有12株內(nèi)生真菌未造成細(xì)胞的明顯褐化，8株內(nèi)生真菌引起細(xì)胞輕度褐化，4株內(nèi)生真菌造成細(xì)胞中度褐化，23株內(nèi)生真菌造成細(xì)胞高度褐化（表2。從菌株所屬真菌屬的層面分析發(fā)現(xiàn)，6株鏈格孢屬（Alternaria）中4株未引起愈傷組織的褐化或者只引起輕度褐化，只有菌株RH-6引起葡萄細(xì)胞高度褐化。8株附球菌屬（Epicoccum）中5株未引起愈傷組織的褐化或者只引起輕度褐化，菌株RH-38和MDR-17引起葡萄細(xì)胞高度褐化。4株黑孢霉屬（Nigrospora）中只有菌株MDR-1引起葡萄細(xì)胞高度褐化，其余未造成愈傷組織的褐化或者只導(dǎo)致輕度褐化。所有鐮刀菌屬（Fusarium）均會(huì)造成細(xì)胞中度或者高度褐化。6株刺盤(pán)孢屬（Colletotrichum）中只有RH-48未造成細(xì)胞褐化，其余均引起葡萄細(xì)胞中度或高度褐化。

圖1 與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)后引起愈傷組織的不同程度的褐化類型

表2 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)造成葡萄細(xì)胞不同褐化程度的菌株歸類

2.2 共培養(yǎng)對(duì)內(nèi)生真菌和葡萄細(xì)胞生長(zhǎng)的相互影響

不同內(nèi)生真菌菌株在葡萄愈傷組織上的生長(zhǎng)狀態(tài)差異巨大（表3）。6株內(nèi)生真菌在本次使用的細(xì)胞上未生長(zhǎng)（同樣方式直接接種到培養(yǎng)基上的相應(yīng)內(nèi)生真菌正常生長(zhǎng)），對(duì)愈傷組織的生長(zhǎng)和形態(tài)影響不明顯。18株內(nèi)生真菌在與細(xì)胞共培養(yǎng)6 d后菌落面積未達(dá)到細(xì)胞面積的一半，大部分菌株未引起愈傷組織的褐化或僅出現(xiàn)輕度褐化，只有菌株MDR-32（Colletotrichum boninense） 和 B-32（Truncatellasp.）使愈傷組織高度褐化。23株內(nèi)生真菌在與細(xì)胞共培養(yǎng)6 d后菌落面積超過(guò)細(xì)胞面積的一半，并導(dǎo)致愈傷組織的嚴(yán)重褐化。接種不同內(nèi)生真菌對(duì)葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)有不同程度的影響。葡萄細(xì)胞與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)后，有6株內(nèi)生真菌顯著（P＜0.05）促進(jìn)了葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)（圖2），分別為：MDR-16（Epicoccum sorghinum）、RH-7（Epicoccumnigrum）、B2-17（Alternariasp.）、MDR-28（Fusariumgraminearum）、MDR-6（Nigrosporasp.） 和 B2-23（Pestalosphaeriasp.），其中菌株MDR-6對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)的促進(jìn)作用最大，與對(duì)照相比增加了98.67%；6株內(nèi)生真菌顯著抑制了葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)，分別為RH-37（Epicoccum nigrum）、RH-34（Trichothecium roseum）、MDR-37（Colletotrichumsp.）、MDR-30（Guignardia mangiferae）、MDR-44（Botryosphaeria dothidea） 和MDR-14（Phomasp.），其中菌株MDR-37對(duì)愈傷組織生長(zhǎng)的抑制作用最嚴(yán)重，與對(duì)照相比增殖減少了100%。其余的菌株對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)顯著差異。

表3 共培養(yǎng)對(duì)內(nèi)生真菌和葡萄細(xì)胞生長(zhǎng)相互影響程度的內(nèi)生真菌菌株歸類

2.3 與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)對(duì)葡萄細(xì)胞PAL活性和花色苷含量的影響

大部分葡萄細(xì)胞的PAL活性在與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)后與對(duì)照相比差異不顯著（P＞0.05），僅少部分與內(nèi)生真菌菌株共培養(yǎng)不同程度地提高了葡萄細(xì)胞中PAL的活性，與內(nèi)生真菌菌株MDR-23、RH-38、MDR-17、RH-37、MDR-44、RH-28 和 MDR-6的共培養(yǎng)引起葡萄細(xì)胞PAL的活性被顯著（P＜0.05）提高； 與 CWR-49、MDR-16、CWR-47和 RH-34四株菌的共培養(yǎng)極顯著的（P＜0.01）提高了葡萄細(xì)胞PAL活性，其中菌株RH-34對(duì)PAL活性提高最多，與對(duì)照相比提高了77.80%。與不同內(nèi)生真菌培養(yǎng)后大部分葡萄細(xì)胞的花色苷總量均被不同程度的降低，其中菌株MDR-1、MDR-23、CWR-49對(duì)葡萄細(xì)胞花色苷的合成抑制作用最大，與對(duì)照相比降低了100%。與菌株XHYN-2、RH-7、R2-21、XHCN-3和MDR-7共培養(yǎng)提高了葡萄細(xì)胞花色苷的總量，但未達(dá)到顯著水平；與菌株B2-17、XHCN-1和B2-23 共培養(yǎng)后葡萄細(xì)胞花色苷含量與對(duì)照相比無(wú)顯著差異（圖 2）。

2.4 基于細(xì)胞生理生化響應(yīng)對(duì)共培養(yǎng)內(nèi)生真菌菌株的聚類分析

以共培養(yǎng)后葡萄細(xì)胞的生理生化響應(yīng)值（RI）為分類依據(jù)對(duì)試驗(yàn)所用不同菌株進(jìn)行系統(tǒng)聚類（組間連接）。聚類分析結(jié)果（圖2）表明，所研究的47株內(nèi)生真菌整體上被劃分為兩大類群：Ⅰ類群包括41株內(nèi)生真菌，它們與葡萄細(xì)胞共培養(yǎng)后大部分會(huì)引起細(xì)胞褐化；Ⅱ類群包括6株內(nèi)生真菌，與葡萄細(xì)胞共培養(yǎng)后細(xì)胞未褐化仍處于正常生長(zhǎng)狀態(tài)且對(duì)葡萄細(xì)胞花色苷總量無(wú)顯著影響。Ⅰ類群可進(jìn)一步分為A、B、C、D四組，A組絕大多數(shù)菌株使葡萄細(xì)胞高度褐化，細(xì)胞增殖倍數(shù)較低，同時(shí)使葡萄細(xì)胞花色苷總量極顯著降低；B組菌株使細(xì)胞中度褐化，促進(jìn)了細(xì)胞的增殖；C組包括4株內(nèi)生真菌，僅引起葡萄細(xì)胞輕度褐化或未褐化，且對(duì)葡萄細(xì)胞的增殖有一定的促進(jìn)作用；D組菌株均未引起葡萄細(xì)胞褐化，對(duì)葡萄細(xì)胞的增殖以及酶活性均無(wú)顯著影響，但對(duì)葡萄細(xì)胞花色苷總量具有極顯著的抑制作用。將Ⅱ類群進(jìn)一步分為E、F、G三組，E組菌株對(duì)葡萄細(xì)胞花色苷總量和PAL活性均無(wú)顯著影響，對(duì)細(xì)胞增殖有不同程度的促進(jìn)作用；F組和G均只包含一株內(nèi)生真菌，分別是XHCN-3和XHYN-2，與葡萄細(xì)胞共培養(yǎng)后均提高了葡萄細(xì)胞的花色苷總量，其他指標(biāo)與對(duì)照相比均無(wú)顯著差異。

3 討論

內(nèi)生真菌對(duì)植物的影響是多方面的，部分內(nèi)生真菌有著調(diào)控宿主植物生長(zhǎng)以及次生代謝途徑的生物特性［12］。熊玉萍［13］從地黃內(nèi)生真菌中篩選出3株能夠顯著促進(jìn)植株的生長(zhǎng)及生物量的內(nèi)生真菌；內(nèi)生真菌還可通過(guò)提高植物的葉綠素質(zhì)量分?jǐn)?shù)，增強(qiáng)光合作用，進(jìn)而促進(jìn)植物的生長(zhǎng)［14-15］；Peters等［16］將內(nèi)生真菌與植物細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)生真菌會(huì)顯著促進(jìn)植物細(xì)胞的生長(zhǎng)。此外，由于與宿主植物長(zhǎng)期共存，內(nèi)生真菌與宿主具有相同或相似的生物合成途徑，內(nèi)生真菌不僅可以自身產(chǎn)生次級(jí)代謝產(chǎn)物，如楊夢(mèng)莉等［17］從燈盞花內(nèi)生真菌中分離出能夠產(chǎn)黃酮類物質(zhì)的內(nèi)生真菌；Liu等［18］從赤霞珠葡萄葉片中分離出一株可以產(chǎn)白藜蘆醇的內(nèi)生真菌；而且還可以調(diào)控植物次生代謝途徑，李群等［19］從灰氈毛忍冬‘渝蕾1號(hào)’中分離出6株內(nèi)生真菌的誘導(dǎo)子在某些濃度下能顯著地提高‘渝蕾1號(hào)’懸浮細(xì)胞中綠原酸的含量；再接種內(nèi)生真菌能夠提高葡萄葉片和果實(shí)的還原糖、總酚、總黃酮和白藜蘆醇的含量［20］；黃麗華等［9，21］通過(guò)構(gòu)建內(nèi)生真菌 -離體細(xì)胞對(duì)峙共培養(yǎng)體系發(fā)現(xiàn)部分內(nèi)生真菌不僅可以顯著提高葡萄細(xì)胞總酚、總黃酮的含量且使葡萄細(xì)胞產(chǎn)生新的化合物。這些研究說(shuō)明內(nèi)生真菌的存在會(huì)影響植物及植物細(xì)胞的生理生化指標(biāo)。目前已有研究建立了內(nèi)生真菌與葡萄細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)的對(duì)峙共培養(yǎng)體系，但是對(duì)于內(nèi)生真菌與葡萄離體細(xì)胞直接接觸的共培養(yǎng)試驗(yàn)還沒(méi)有相關(guān)的研究。

本實(shí)驗(yàn)在細(xì)胞水平上建立愈傷組織與內(nèi)生真菌直接接觸的共培養(yǎng)體系，旨在構(gòu)建可行的共培養(yǎng)體系并探索內(nèi)生真菌與植物細(xì)胞共培養(yǎng)的相互作用機(jī)理及篩選出具有不同利用價(jià)值的內(nèi)生真菌資源。研究發(fā)現(xiàn)與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)會(huì)造成葡萄細(xì)胞不同程度的褐化，按照植物內(nèi)生真菌的存在不會(huì)對(duì)葡萄植株產(chǎn)生明顯病害癥狀的定義來(lái)看，造成與內(nèi)生真菌共培養(yǎng)葡萄細(xì)胞不同程度褐化的原因可能是因?yàn)檫m宜在葡萄愈傷組織上生長(zhǎng)的內(nèi)生真菌，相對(duì)生長(zhǎng)較快，因此對(duì)葡萄細(xì)胞的傷害較大，褐化程度也會(huì)相對(duì)較大。細(xì)胞的增殖也會(huì)因?yàn)楹只艿揭种?，且褐化的葡萄?xì)胞花色苷總量會(huì)被降低，但PAL活性要高于未褐化的，這可能是因?yàn)楹只笃咸鸭?xì)胞次生代謝產(chǎn)物發(fā)生了改變，PAL作為次級(jí)代謝途徑的關(guān)鍵酶，其活性的提高有利于植保素（黃酮、酚類等）的積累有助于植物抵抗外界不利因素的侵襲［22］。而在葡萄細(xì)胞上生長(zhǎng)較慢的內(nèi)生真菌基本不會(huì)造成細(xì)胞褐化，且葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)、花色苷含量以及PAL活性不會(huì)受到顯著的抑制作用，這可能是因?yàn)槠咸鸭?xì)胞未受到較大的傷害其生長(zhǎng)及次生代謝均可正常進(jìn)行。

圖2 葡萄細(xì)胞與不同內(nèi)生真菌共培養(yǎng)后生理生化響應(yīng)指數(shù)及基于葡萄細(xì)胞生理生化相應(yīng)的內(nèi)生真菌聚類分析

4 結(jié)論

選取18個(gè)屬47株內(nèi)生真菌與佳美葡萄（Vitis vinifera L.cultivar：Gamay）愈傷組織進(jìn)行共培養(yǎng)。結(jié)果表明，接種不同內(nèi)生真菌對(duì)葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)有不同程度的影響，與菌株MDR-16、RH-7、B2-17、MDR-28、MDR-6和B2-23共培養(yǎng)對(duì)葡萄細(xì)胞增殖具有顯著促進(jìn)作用。與菌株R-19、MDR-39、RH-24、MDR-12、MDR-7、B2-23、MDR-16、MDR-6、MDR-13、R2-30、RH-48、CXC-16、R2-9、MDR-15、B2-17、RH-7、R2-21、XHCN-1、XHCN-3和XHYN-2共培養(yǎng)后對(duì)葡萄細(xì)胞的傷害作用較?。慌c菌株XHYN-2、RH-7、R2-21、XHCN-3和MDR-7共培養(yǎng)能夠提高葡萄細(xì)胞花色苷的含量；與菌株MDR-16和MDR-6共培養(yǎng)既能顯著促進(jìn)葡萄細(xì)胞的生長(zhǎng)又能顯著提高葡萄細(xì)胞PAL活性。