煙苗病毒病檢測及防控技術研究

張得平 梁瓊月 石保峰 梁永進 袁維 李界秋 首安發(fā) 沈方科

(1.廣西壯族自治區(qū)煙草公司賀州市公司,廣西賀州 542899;2.廣西大學農(nóng)學院,廣西南寧 530005;3.植物科學國家級實驗教學示范中心 (廣西大學),廣西南寧 530005;4.廣西中煙工業(yè)有限責任公司,廣西南寧 530001)

煙草病毒病是煙草生產(chǎn)上最為棘手的問題之一,其分布廣、危害重,且沒有有效的預防措施,嚴重影響烤煙的產(chǎn)量和品質[1-2]。現(xiàn)我國已鑒定出浸染煙草的病毒有近20種,其中危害較為嚴重的主要有煙草花葉病毒(Tobaccomosaicvirus,TMV)、黃瓜花葉病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)[3]。TMV為煙草病毒病主要毒源,CMV和PVY其次,田間常見兩種或兩種以上病毒復合浸染,CMV和TMV復合侵染較為普遍,TMV和PVY復合侵染次之[4]。煙草病毒病防治的最佳時期為苗期,若未能于苗期阻斷而將帶毒植株移栽大田,則成為浸染源致病毒病大規(guī)模爆發(fā)[5-6],一旦發(fā)病將難以控制,因此,減少初浸染源是生產(chǎn)上防治病毒病的重要措施之一。有調查表明2010～2011年富川縣朝東鎮(zhèn)塘源村、羅城縣龍岸鎮(zhèn)石龍村和靖西縣化垌鎮(zhèn)八德村煙草花葉病毒病發(fā)病率高達80.0%以上,同時發(fā)現(xiàn)一種廣西區(qū)新出病害——番茄斑萎病毒病(TsWV),該病由番茄環(huán)斑點病毒引起的[7-8]。本文于2017年就廣西賀州各育苗場進行了煙苗帶毒抽樣檢測并跟蹤調查大田煙株發(fā)病情況,探明病毒病原及發(fā)生規(guī)律,并提出誘導抗逆性防治措施,以期為煙草栽培病毒病防治提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試煙草品種為云煙87。

1.2 樣品采集

煙苗帶病情況調查于2017年2月23日至3月10日進行,分別對廣西賀州市石家、麥嶺、朝東、公安、黃姚等5個育苗場煙苗進行抽樣采集檢測,對741個育苗池進行采樣,每個育苗池采集2～3個樣本,共采集樣品1788個。

煙草大田栽培跟蹤調查于2017年6月10日至6月25日進行,調查了賀州市富川縣的朝東、城北、富陽、福利、葛坡、麥嶺、石家、新華等8個鄉(xiāng)鎮(zhèn)和鐘山、昭平縣的花山、公安、兩安、紅花、石龍、同古、回龍、珊瑚、鳳翔、燕塘、清塘、黃姚、鳳凰等13個鄉(xiāng)鎮(zhèn),共調查57個點90個村委,每個點隨機調查50～100株煙,合計煙株22346株,分別統(tǒng)計煙草花葉病毒(TMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、馬鈴薯 Y病毒(PVY)三種病毒病的發(fā)生情況。

1.3 方法及試劑

采用間接酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)進行病毒檢測(步驟參照試劑盒說明書),煙草花葉病毒(TMV)、黃瓜花葉病毒(CMV)、馬鈴薯 Y病毒(PVY)試劑盒購自美國Agdia公司。

樣品OD405與陰性對照OD405(健康植物樣品)比值大于2.1視為陽性,即含有目標病毒。

1.4 煙苗抗性誘導試驗設計

試驗于2017年1月～4月在賀州市富川縣麥嶺涌泉育苗大棚進行,試驗設5個處理,CK(清水對照)、T1(誘抗劑I號500倍液)、T2(誘抗劑II號500倍液)、T3(5%氨基寡糖素水劑 800倍液)、T4(0.5%香菇多糖水劑400倍液),重復3次。于煙苗4葉1心期(定苗后),進行葉面噴施處理,間隔5d進行第2次噴施(總共噴2次),并于移栽前測定各處理煙苗的生物量及檢測煙苗的TMV、CMV、PVYR病毒病發(fā)生情況。

2 結果與分析

2.1 育苗場煙苗帶毒情況調查

由表1可見,在5個育苗場中以麥嶺場煙苗帶毒率最高,達30.23%;黃姚場最低,僅為6.55%。除了朝東場僅帶有TMV、CMV兩種病毒外,其余4個場均帶有TMV、CMV和 PVY三種病毒;以PVY病毒發(fā)病率最低,而發(fā)病率最高的為CMV病毒。1780株煙苗中,TMV、CMV和 PVY檢出率分別為8.72%、12.81%和2.96%。

表1 各育苗工場煙苗帶毒率檢測結果表

2.2 不同育苗場煙苗的大田病毒發(fā)病率跟蹤調查

由表2可見,煙草田間發(fā)病率最高的是由朝東場提供的煙苗,發(fā)病率最低的為黃姚場提供的煙苗;5個育苗場提供的煙苗田間表現(xiàn)均以CMV病毒發(fā)病率最低,TMV病毒以麥嶺場和石家場提供的煙苗發(fā)病率較高,PVY病毒以朝東、公安和黃姚3個場提供的煙苗發(fā)病率較高?？梢?田間發(fā)病情況與苗期不一致,這可能是由于煙草病毒病在田間的發(fā)病程度除了與煙苗的帶毒浸染有關外,還與栽培地的環(huán)境狀況以及栽培管理存在很大關系。

表2 各育苗工場煙苗在大田發(fā)病程度調查結果表

2.3 不同誘抗劑處理煙苗病毒發(fā)病情況調查

由表3可見,不同誘抗劑處理的煙苗病毒帶毒率有顯著差異,T1處理的煙苗帶毒率僅為16.67%,顯著低于對照CK,T2處理煙苗帶毒率與對照CK無顯著差異,T3、T4兩個處理的煙苗帶毒率均顯著高于對照處理,分別提高了50%和40%。

表3 不同誘抗劑處理煙苗病毒帶毒率

2.4 不同誘抗劑處理對煙苗生物量的影響

由表4可見,不同誘抗劑處理對煙苗的生物量有顯著影響,煙苗地下部鮮重以CK處理最大,T1和T3處理顯著低于對照,T2和T4處理與對照差異不顯著;煙苗地上部鮮重仍以CK處理最大,其次為T1,T2、T3和T4三者差異不顯著;根冠比以T2處理最大而T1處理最低;整株生物量以CK顯著高于各個處理。

表4 不同誘抗劑處理對煙苗生物量的影響

3 討論與結論

目前煙草病毒病發(fā)生日趨嚴重,有研究表明病毒病發(fā)生的原因較為復雜,栽培品種、病原類型、田間管理、栽培土壤類型、氣候因素等均可成為病毒病誘發(fā)的原因[9-11]。本研究發(fā)現(xiàn),同一批種子于不同育苗場培育的煙苗帶毒情況不一,同時同一育苗場培育的煙苗于不同田間栽培感病情況也差異顯著;煙苗帶毒可能是由于部分種子攜帶病毒導致煙苗感病,同時由于育苗場及田間環(huán)境、氣候及管理因素的差異導致煙苗感病,田間感病還可能是由于帶病煙苗田間傳播,并因環(huán)境因素影響傳播速率,進而使得同一育苗場提供的煙苗感病率差異顯著。同時本研究還表明,使用誘抗劑處理對煙苗病毒病感病情況影響顯著,以T1(誘抗劑I號500倍液)處理顯著降低了煙苗感病率,但是煙株生物量也顯著降低了。有研究表明,20%病毒A可濕性粉劑、5%菌毒清水劑、3.95%病毒必克可濕性粉劑、22%金葉寶等抗病毒藥劑在烤煙生產(chǎn)上具有較好防治效果[12-15],這可能是由于誘抗劑可以誘導煙草植株產(chǎn)生抗病毒浸染的抗體,增強抗病能力。