一種簡易組織芯片裝置的開發(fā)與應(yīng)用*
——利用圓珠筆芯管和氣門芯

張文書，張望望，黃 磊

(1.贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 a.病理科；b.藥房；2.大余縣人民醫(yī)院病理科,江西 贛州 341000)

組織芯片(tissue chip),也稱組織微陣列(tissue microarrays),是生物芯片技術(shù)的一個(gè)重要分支，是將許多不同的個(gè)體的組織標(biāo)本以規(guī)則陣列方式排在于同一載體上，進(jìn)行同一指標(biāo)的原位組織學(xué)研究。該技術(shù)自1998年問世以來，以其大規(guī)模、高通量、標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)得到大范圍的推廣應(yīng)用。其最大的優(yōu)勢在于，芯片上的組織樣本實(shí)驗(yàn)條件完全一致，有極好的質(zhì)量控制,節(jié)省時(shí)間、節(jié)省試劑更是顯而易見的[1]。組織芯片技術(shù)可以與其它很多常規(guī)技術(shù)如免疫組織化學(xué)，核酸原位雜交、熒光原位雜交、原位PCR等結(jié)合應(yīng)用。它的應(yīng)用領(lǐng)域正在不斷地拓展。作為一項(xiàng)新興的生物技術(shù)，正以其絕對(duì)的優(yōu)越性展示著自己的潛力。但組織芯片技術(shù)一般采用進(jìn)口的組織微陣列儀或組織芯片制作儀，價(jià)格高，不適于基層，特別是對(duì)于一些研究生做課題或課題的前期研究來說太貴，難以承受，從而也限制了其進(jìn)一步推廣應(yīng)用[2]。程凱等[3]研究發(fā)現(xiàn)利用皮帶沖作為組織芯片儀的打孔器，皮帶沖可以對(duì)供體蠟塊打孔，但是，難以制備受體蠟塊。如何開發(fā)一種取材方便的、操作簡單以及基層單位都能應(yīng)用的組織芯片裝置成為一種趨勢。

1 材料和方法

1.1打孔器和取樣器的制作利用普通的圓珠筆芯，撥除筆芯留下鋼制芯管，用小木條栓塞氣門芯的空心變成實(shí)心作為針芯插入圓珠筆芯鋼制芯管內(nèi)制成套管樣結(jié)構(gòu)即構(gòu)成采樣器，一種簡易的組織芯片采樣器及打孔器就制備完成(圖1)。

圖1 制成的簡易組織芯片儀

1.2制備受體蠟塊選用常規(guī)石蠟，不銹鋼包埋盒底模3.7 cm×2.4 cm×0.5 cm，塑料包埋盒，注入日常包埋石蠟后讓其自然冷卻，去掉包埋模具制成空白蠟塊即為受體蠟塊，要求蠟塊內(nèi)無氣泡，其表面平整，無裂縫。

1.3制備供體蠟塊收集贛南醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科2018年20例宮頸癌標(biāo)本常規(guī)取材制成相應(yīng)的供體蠟塊，進(jìn)行切片及HE染色，光鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)，認(rèn)真核對(duì)病理診斷，在HE切片上選取出有代表性的區(qū)域，盡量選擇目標(biāo)組織豐富的區(qū)域。鏡下用記號(hào)筆在切片上做好標(biāo)記，然后在相應(yīng)蠟塊上標(biāo)出與切片上相對(duì)應(yīng)的位置。

1.4組織芯片蠟塊的制備先將供體蠟塊于37 ℃烘箱中預(yù)熱30 min，目的是防止鉆頭取芯時(shí)使石蠟塊斷裂[4]。然后，用自制打孔器和取樣器分別在受體蠟塊上打孔和供體蠟塊上取芯，把取出的組織芯按照事先編排好的順序放入受體蠟塊的孔中，置入56 ℃恒溫箱中放置0.5 h，使兩者重新融合成一體，自然冷卻，即得到組織芯片蠟塊(圖2、圖3)。

2 結(jié) 果

所制備的組織芯片無分層，無氣泡，無變形，組織排列整齊，不影響切片。切片常規(guī)染色及免疫組織化學(xué)檢查結(jié)果均取得良好結(jié)果,切片常規(guī)染色組織樣本排列整齊，未出現(xiàn)點(diǎn)陣移位現(xiàn)象及掉片現(xiàn)象，樣本組織大小均勻，結(jié)構(gòu)完整，染色結(jié)果清晰；免疫組化染色，染色表達(dá)定位準(zhǔn)確，20例P63、CK5/6均呈陽性表達(dá)。

3 討 論

組織芯片技術(shù)為各種腫瘤標(biāo)志物的研究提供了高通量檢測的可行性，并且最大限度的保持了實(shí)驗(yàn)條件的一致性，組織芯片與傳統(tǒng)石蠟切片相比，組織芯片在實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性、科學(xué)性、可比性上都具有一定的優(yōu)越性[5]。但目前商品化的組織芯片或組織芯片儀太貴，限制了其應(yīng)用，本實(shí)驗(yàn)采用極低成本的圓珠筆芯管和氣門芯制成簡易的組織芯片儀，制作組織芯片，取得了較好的結(jié)果。由于制作組織芯片涉及較多的蠟塊和切片，制作步驟較多，因此，其操作過程要求細(xì)致精準(zhǔn)，否則組織芯片的完整性就難以保證[6-7]。

本實(shí)驗(yàn)首次嘗試應(yīng)用圓珠筆芯管和氣門芯制成簡易的組織芯片裝置并應(yīng)用于宮頸癌組織芯片的制作，取得了滿意的結(jié)果，以后我們將在不同的組織中應(yīng)用,總結(jié)其優(yōu)缺點(diǎn)。圓珠筆芯和氣門芯價(jià)格低廉，可避免組織芯片儀的高成本消耗，且具有即取即用的優(yōu)點(diǎn)，非常適合在基層醫(yī)院醫(yī)生、研究生及前期實(shí)驗(yàn)中推廣應(yīng)用。