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    辣木果胚油的體外抗氧化活性研究

    2019-08-01 01:28:10殷春雁劉自單馬瑞菊劉超
    關(guān)鍵詞:辣木二價(jià)螯合

    殷春雁 劉自單 馬瑞菊 劉超

    摘? 要:辣木果胚油來(lái)源于辣木籽、翼籽辣木籽,該文通過(guò)不同評(píng)價(jià)方法測(cè)定辣木果胚油的體外抗氧化活性。即通過(guò)測(cè)定ABTS(2,2-聯(lián)氮-二-(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)-二銨鹽)自由基清除能力、DPPH(1,1-二苯基-2-苦肼基)自由基清除能力和二價(jià)鐵離子的螯合能力來(lái)判斷辣木果胚油的體外抗氧化活性,辣木果胚油的體外抗氧化活性在一定范圍內(nèi)隨濃度的增大而增加。結(jié)果如下:當(dāng)辣木果胚油的濃度為16 mg/mL時(shí),對(duì)ABTS自由基清除能力為78.58%;當(dāng)辣木果胚油的濃度為20 mg/mL時(shí),對(duì)DPPH自由基清除能力為51.18%;當(dāng)辣木果胚油的濃度為10 mg/mL時(shí),對(duì)二價(jià)鐵離子的螯合能力為70.03%。

    關(guān)鍵詞:辣木果胚油;抗氧化活性;ABTS;1,1-二苯基-2-三硝基苯肼

    中圖分類號(hào):Q946? ? ? ? ? ? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A

    辣木(Moringa oleifera)屬于辣木科(Moringaceae)辣木屬(Moringa Adans.)的熱帶落葉木本蔬菜及油料植物,樹(shù)齡約為20a,全世界約有13個(gè)辣木品種。

    辣木(Moringa oleifera)葉片和果莢富含多種礦物質(zhì)、維生油、蛋白質(zhì)、氨基酸、辣木多肽和脂肪等有效成分,脂肪主要集中在種子上,其中含有較高的不飽和脂肪酸。辣木活性成分具有抗氧化和保護(hù)肝臟、降血糖、降血脂和血壓、抗菌消炎等保健功效。辣木果胚油是一款來(lái)源于辣木籽、翼籽辣木籽提取的精油,具有多種活性成分。該文對(duì)辣木果胚油的體外抗氧化活性進(jìn)行深入探討。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 試劑與儀器

    辣木果胚油,10 mL,紅河谷辣木產(chǎn)業(yè)有限公司;2,2-聯(lián)氮-二-(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)-二銨鹽(ABTS),1 g,上海伊卡生物科技有限公司;1,1-二苯基-2-苦肼基(DPPH),1 g,上海源葉生物科技有限公司;亞鐵嗪,1 g,Sigma;過(guò)硫酸鉀,500 g,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司;維生素E,100 g,上海伊卡生物科技有限公司;乙二胺四乙酸二鈉,100 g,上海伊卡生物科技有限公司;氯化亞鐵,500 g,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司;無(wú)水乙醇,500 mL,天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。UV-1800 PC型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì),上海美譜達(dá)儀器有限公司;FA2004型電子天平,上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司;HH-4型水浴鍋,金壇市雙捷實(shí)驗(yàn)儀器廠;SK-1型快速混勻器,常州丹瑞實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備有限公司;實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī),重慶圣德利醫(yī)療器械研究有限公司。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 ABTS自由基清除能力

    7 mM ABTS溶液:稱取38.41 mg ABTS溶解在5 mL去離子水中;2.45 mM過(guò)硫酸鉀:稱取6.61 mg過(guò)硫酸鉀溶解在5 mL去離子水中;2種溶液混合均勻,避光條件下放置16 h~24 h(讓其充分氧化)。使用時(shí)用無(wú)水乙醇按1∶80稀釋使用,現(xiàn)配現(xiàn)用。取稀釋好的ABTS溶液4 mL,加入80 μL用無(wú)水乙醇溶解的辣木果胚油(MOP)溶液,濃度為2 mg/mL、4 mg/mL、

    8 mg/mL、12 mg/mL、16 mg/mL,混勻在37 ℃水浴放置10 min,測(cè)定734 nm處的吸光度。維生素E做陽(yáng)性對(duì)照。平行3次,空白不加樣品,以等量的無(wú)水乙醇代替,辣木果胚油抗氧化率計(jì)算如下:

    其中As代表樣品的吸光度,A代表空白的吸光度。

    1.2.2 DPPH自由基清除能力測(cè)定

    取辣木果胚油(MOP)溶液2 mL,濃度為1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、5.0 mg/mL、10.0 mg/mL、20.0 mg/mL,加入1 mL用無(wú)水乙醇溶解的0.2 mM的DPPH溶液,混勻放置30 min,測(cè)定517 nM處的吸光度。維生素E做陽(yáng)性對(duì)照。平行3次,空白不加樣品,以等量的無(wú)水乙醇代替,辣木果胚油抗氧化率計(jì)算如下:

    其中As代表樣品的吸光度,A代表空白的吸光度。

    1.2.3 二價(jià)鐵離子的螯合能力測(cè)定

    配制1.0 mg/mL、2.0 mg/mL、4.0 mg/mL、5.0 mg/mL、10.0 mg/mL的辣木果胚油(MOP)溶液各取1 mL,加入3.7 mL無(wú)水乙醇,再加入2.0 mM的FeSO4·7H2O溶液0.1 mL,混勻25 ℃下水浴60 min,加入5 mM的亞鐵嗪溶液0.2 mL,混勻25 ℃下水浴10 min,在562 nm處測(cè)定吸光度。EDTA做陽(yáng)性對(duì)照。平行3次,空白不加樣品,以等量的無(wú)水乙醇代替,辣木果胚油對(duì)二價(jià)鐵離子的螯合能力計(jì)算如下:

    其中As代表樣品的吸光度,A代表空白的吸光度。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 ABTS自由基清除能力

    2,2-聯(lián)氮-二-(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)-二銨鹽(ABTS)是以水溶性的自由基引發(fā)劑為顯色劑,ABTS經(jīng)過(guò)硫酸鉀氧化生成穩(wěn)定的藍(lán)綠色陽(yáng)離子ABTS自由基,ABTS法是用于體外檢測(cè)物質(zhì)總抗氧化能力的方法。

    隨著辣木果胚油濃度(2 mg/mL~16 mg/mL)的增加,當(dāng)濃度達(dá)到16 mg/mL時(shí),辣木果胚油對(duì)ABTS自由基的清除能力達(dá)到78.58%。

    2.2 DPPH自由基清除能力

    DPPH又稱1,1-二苯基-2-三硝基苯肼,是一種很穩(wěn)定的氮中心的自由基,常用于抗氧化成分的體外抗氧化性評(píng)價(jià)。DPPH法于1958年提出,依據(jù)是DPPH自由基有單電子,在517 nm處有一強(qiáng)吸收,其醇溶液顯紫色。

    辣木果胚油對(duì)DPPH自由基的清除能力隨辣木果胚油濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)辣木果胚油的濃度達(dá)到20 mg/mL時(shí),其清除DPPH自由基的能力達(dá)到51.18%。這一結(jié)果說(shuō)明辣木果胚油具有較強(qiáng)的清除DPPH自由基的能力。

    2.3 二價(jià)鐵離子的螯合能力

    二價(jià)鐵離子螯合能力的方法用亞鐵嗪作為顯色劑,亞鐵嗪是測(cè)定Fe2+的一種特效顯色劑。原理是抗氧化物質(zhì)被認(rèn)為具有螯合金屬離子的能力,從而避免發(fā)生芬頓反應(yīng)產(chǎn)生自由基。當(dāng)最后加入亞鐵嗪后,未被螯合的二價(jià)鐵離子與亞鐵嗪形成紫紅色的顯色團(tuán),在562 nm處有強(qiáng)吸收,根據(jù)吸光度的大小可以間接的反映抗氧化物質(zhì)的抗氧化能力。

    辣木果胚油對(duì)二價(jià)鐵離子的螯合能力隨辣木果胚油濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)辣木果胚油的濃度達(dá)到10 mg/mL時(shí),其螯合能力達(dá)到70.03%。這一結(jié)果說(shuō)明辣木果胚油具有較強(qiáng)的螯合二價(jià)鐵離子的能力。

    EDTA是很好的螯合劑,可以被廣泛應(yīng)用。辣木果胚油螯合能力為70.03%,表明它是一種很好的抗氧化劑,有望在其他方面的應(yīng)用。

    3 結(jié)論

    (1)當(dāng)辣木果胚油的濃度為16 mg/mL時(shí),對(duì)ABTS自由基清除能力為78.58%。

    (2)當(dāng)辣木果胚油的濃度為20 mg/mL時(shí),對(duì)DPPH自由基清除能力為51.18%。

    (3)當(dāng)辣木果胚油的濃度為10 mg/mL時(shí),對(duì)二價(jià)鐵離子的螯合能力為70.03%。

    參考文獻(xiàn)

    [1]中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志(第三十四卷第一分冊(cè))[M].北京:科學(xué)出版社,1984.

    [2]盛軍.現(xiàn)代辣木生物學(xué)[M].云南:云南出版集團(tuán)公司,云南科技出版社,2015.

    [3]林玲,何舒瀾.辣木的研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué),2013,25(11):60-63.

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