蒼柏祛痛膠囊的拆方藥效學(xué)研究

吳晶，趙海燕，王興剛，于博，賈忠*

(1.蘭州市中醫(yī)醫(yī)院,甘肅 蘭州 730050；2.蘭州市肺科醫(yī)院,甘肅 蘭州 730046；3.蘭州市第二人民醫(yī)院,甘肅 蘭州 730046)

中醫(yī)理論中，痛風(fēng)又名歷節(jié)、白虎歷節(jié)，屬“痹病”范疇。素體陽(yáng)盛、臟腑壅毒、積熱是形成毒邪攻入血分、骨節(jié)的先決條件。積熱日久，熱郁為毒是發(fā)生本病的根本原因；濕熱濁毒、流注周身及關(guān)節(jié)，若正虛邪戀、濕毒不去、循經(jīng)竄絡(luò)，附于骨節(jié)形成痰核，堅(jiān)硬如石。故濕熱濁毒是形成痛風(fēng)石的主要原因。

蒼柏祛痛膠囊組方來(lái)源于甘肅省名老中醫(yī)賈奇峰的經(jīng)典驗(yàn)方，由黃柏、蒼術(shù)、川牛膝等組成。該驗(yàn)方已在臨床用于治療痛風(fēng)多年，療效顯著。甘肅省中醫(yī)藥大學(xué)李成義教授認(rèn)為蒼柏祛痛膠囊正是宗上述病因病機(jī)，以中醫(yī)原則立論立法成方。他認(rèn)為全方是以“三妙丸”為基礎(chǔ)方，通過(guò)總結(jié)臨床經(jīng)驗(yàn)加減而來(lái)，故本方是“君臣佐使”配伍皆全的驗(yàn)方。為進(jìn)一步認(rèn)識(shí)蒼柏祛痛膠囊組方的科學(xué)性，本研究通過(guò)現(xiàn)代藥理學(xué)研究手段比較各拆方的主要藥效學(xué)，分析不同配伍組合間抗炎、鎮(zhèn)痛、降酸的效果，用以佐證蒼柏祛痛膠囊君臣佐使的配伍合理性。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)昆明種小鼠，雌雄皆有,購(gòu)自蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK(甘)2015-0002。SPF級(jí)Wistar大鼠，雄性，體質(zhì)量(260±20)g,購(gòu)自甘肅中醫(yī)學(xué)院，許可證號(hào)：SCXK(甘)2011-0001。

1.2 受試藥物和主要試劑

蒼柏祛痛膠囊(由蘭州市肺科醫(yī)院生產(chǎn)，批號(hào)20150907)、冰醋酸(天津市瑞金特化學(xué)品有限公司，批號(hào)20130522)、二甲苯(天津富宇精細(xì)化工有限公司，批號(hào)141017)、角叉菜膠(Sigma, 批號(hào)：142k14144)，氧嗪酸鉀(Sigma，批號(hào)：201406)，尿酸(Uric acid，UA)測(cè)試盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：C01506)。

按表1所列拆方藥物組成，參照蒼柏祛痛膠囊已有生產(chǎn)工藝，制備各拆方組方。其中君藥組(80 mg/kg，相當(dāng)于蒼柏祛痛膠囊全方中的劑量；160 mg/kg，相當(dāng)于全方中的2倍劑量)。

1.3 儀器

島津紫外分光光度計(jì)(UV-2450)。

表1 蒼柏祛痛膠囊組方配伍表

2 方法

2.1 鎮(zhèn)痛作用研究

2.1.1 對(duì)熱板致痛小鼠疼痛反應(yīng)的影響

取雌性未孕、清潔級(jí)小鼠，體質(zhì)量(20±2)g。適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，給藥前將小鼠逐個(gè)置于(55±0.2)℃的金屬熱板上，測(cè)定出現(xiàn)踢腳、舔后足、跳躍等疼痛反應(yīng)的潛伏時(shí)間(痛閾值)，取兩次痛閾均值，小于6 s或大于30 s者應(yīng)剔除。取痛閾值合格小鼠，并按體質(zhì)量隨機(jī)分組。按表2劑量灌胃給藥連續(xù)10 d，分別于末次給藥后30 min、60 min、90 min，按前述方法測(cè)定痛閾值，同時(shí)與陰性對(duì)照組比較。如超過(guò)60 s仍無(wú)反應(yīng)，則按60 s計(jì)[1]。

2.1.2 對(duì)醋酸引起的小鼠扭體反應(yīng)的影響

取清潔級(jí)小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g。適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，按表3劑量灌胃給藥10 d，末次給藥30 min后，給予0.6%的冰醋酸生理鹽水(i.p.)，0.2 mL/只，計(jì)數(shù)注射冰醋酸后15 min內(nèi)小鼠扭體次數(shù)(標(biāo)準(zhǔn)：以腹部?jī)?nèi)凹，軀體與后腿伸張，臀部高起)，以總計(jì)數(shù)作為鎮(zhèn)痛指標(biāo)。

2.2 抗炎作用研究

2.2.1 對(duì)二甲苯引起的小鼠耳腫脹的影響

取清潔級(jí)小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(20±2)g。適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，按表4劑量灌胃給藥，連續(xù)10 d。末次給藥后，用微量進(jìn)樣器于小鼠右耳均勻涂布二甲苯，每只0.02 mL致炎。間隔2 h后，頸椎脫臼法處死小鼠，沿耳廓基線剪下雙耳，用直徑6 mm的打孔器在雙耳同一部位打下耳片，電子天平稱重。雙側(cè)耳片質(zhì)量差(mg)記為腫脹度。

2.2.2 對(duì)角叉菜膠引起的大鼠足跖腫脹的影響

選取雄性Wistar大鼠。給藥前以玻璃容器法測(cè)定大鼠右后足的正常足跖體積，之后按表5劑量灌胃給藥，連續(xù)10 d。末次給藥前，在大鼠右后足跖皮下注射1%角叉菜膠生理鹽水溶液皮下注射，0.1 mL/只。測(cè)量記錄給藥后0.5 h、1 h、2 h、4 h、6 h的足跖體積。通過(guò)足趾體積前后差異，計(jì)算腫脹率(%)。

2.3 降尿酸作用研究

小鼠高尿酸血癥：選取雄性小鼠，體質(zhì)量(30±2)g，適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，按體質(zhì)量隨機(jī)分為16組。造模時(shí)，對(duì)照組腹腔注射生理鹽水，模型組、蒼柏祛痛膠囊和各拆方組腹腔注射氧嗪酸鉀(300 mg/kg)，1次/d，連續(xù)7 d。每天造模30 min后，各組動(dòng)物按表6劑量灌胃給藥。末次給藥后，摘眼球取血，離心3 500 r/min×10 min，取血清測(cè)定SUA(μmol/L)[2]。

3 結(jié)果

3.1 對(duì)小鼠熱板所致疼痛閾值的影響

由表2的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，君藥相當(dāng)于處方中用量時(shí)，需到1.5 h后才能對(duì)物理性即熱板所致疼痛起到鎮(zhèn)痛作用(P<0.05)，而當(dāng)君藥高于處方用量2倍時(shí)，在1 h后就可起到顯著的鎮(zhèn)痛作用(P<0.01)。臣藥在1 h后才能起到鎮(zhèn)痛作用(P<0.05)，而佐藥、使藥在不與君藥配伍時(shí)，鎮(zhèn)痛作用不明顯。君+臣、君+佐、君+臣+佐、君+臣+使和蒼柏祛痛膠囊全方具有顯著的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05，P<0.01)。

組別劑量(mg/kg)疼痛閾值 (s)00.5 h1 h1.5 h對(duì)照—16.75±3.9718.80±4.7719.30±3.5018.30±5.08蒼柏祛痛膠囊80017.95±3.9322.70±6.34*28.20±6.81**29.10±3.31**君藥8017.30±4.1220.87±5.1120.45±3.7422.40±5.82*君藥16016.57±3.8520.42±6.9425.70±4.15**22.72±4.80**臣藥80018.63±3.0919.90±4.8222.40±6.59*20.40±6.17佐藥80016.87±2.9518.71±5.1719.19±4.2220.31±3.03佐藥180016.08±4.0517.50±6.1416.40±5.1217.95±6.01佐藥280016.70±3.1418.00±3.9119.25±3.8920.13±4.26使藥80015.66±4.7117.10±5.0220.74±4.7519.86±5.20君+臣80016.19±4.0718.16±5.4225.74±6.04**20.58±7.79君+佐80017.84±5.7322.87±5.51*20.45±5.0620.87±6.18君+使80014.55±4.2120.04±4.2019.20±4.4522.48±6.00*君+臣+佐80016.85±3.5724.16±4.01**25.31±5.13**27.40±4.07**君+臣+使80015.09±4.1622.33±5.29*21.70±6.55*18.28±5.39君+佐+使80018.11±3.2520.73±6.1020.00±4.3919.70±6.17

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01

3.2 對(duì)小鼠醋酸所致疼痛閾值的影響

由表3的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，君藥相當(dāng)于處方中用量和處方用量2倍時(shí)，均能起到顯著鎮(zhèn)痛作用(P<0.01)。臣藥、佐藥2單用也有鎮(zhèn)痛作用(P<0.05)，而佐藥、佐藥1和使藥在不與君藥配伍時(shí)，鎮(zhèn)痛作用不明顯。君+臣、君+佐、君+使、君+臣+佐、君+臣+使、君+使+佐和蒼柏祛痛膠囊全方具有顯著的鎮(zhèn)痛作用(P<0.05，P<0.01)。

表3 蒼柏祛痛膠囊及各拆方對(duì)小鼠醋酸致痛閾值的影響

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01

3.3 對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹的影響

由表4的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，君藥相當(dāng)于處方中用量和高于處方用量2倍時(shí)，均能顯著抑制二甲苯引起的耳廓腫脹(P<0.01)。臣藥、佐藥和使藥在不與君藥配伍時(shí)，消腫作用不明顯；使藥在不 與君藥、臣藥同時(shí)配伍時(shí)，無(wú)消腫作用。君+臣、君+佐、君+臣+佐、君+臣+使和蒼柏祛痛膠囊全方具有顯著的消腫作用(P<0.05，P<0.01)。

表4 蒼柏祛痛膠囊及各拆方對(duì)二甲苯誘導(dǎo)小鼠耳廓腫脹的影響

注：與對(duì)照組比較,*P<0.05,**P<0.01

3.4 對(duì)角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足趾腫脹的影響

由表5的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，與對(duì)照組相比，君藥相當(dāng)于處方中用量時(shí)，給藥2 h后可抑制角叉菜膠引起的繼發(fā)性足趾腫脹(P<0.05)；當(dāng)君藥為處方用量2倍時(shí)，給藥1 h后有顯著的消腫作用(P<0.01)。臣藥給藥2 h后有一定的消腫作用(P<0.05)。佐藥和使藥在不與君藥配伍時(shí)，消腫作用不明顯。君+臣、君+佐、君+使、君+臣+佐、君+臣+使和蒼柏祛痛膠囊全方具有顯著的消腫作用(P<0.05，P<0.01)。值得注意的是，含有君藥和臣藥同時(shí)配伍的組方，則在給藥1 h后就有顯著消腫作用。

組別劑量(g/kg)足趾關(guān)節(jié)腫脹度(%)0.5 h1 h2 h4 h6 h對(duì)照—17.8±4.2623.0±6.9837.0±7.9549.2±9.3731.4±9.25蒼柏祛痛膠囊58012.7±5.60*17.2±6.7726.6±8.18**33.3±7.50**21.5±10.9*君藥6018.4±5.1321.7±5.6930.1±6.41*35.4±5.22*28.3±8.24君藥12016.3±4.3115.7±4.82**22.5±3.48**30.4±4.09*20.6±5.74*臣藥58014.7±4.2720.5±6.1832.5±7.35*41.6±6.00*29.3±9.79佐藥58019.1±3.5025.2±4.0239.3±6.0552.0±9.5440.7±8.25佐藥158016.9±5.5222.2±3.7535.3±7.2148.3±8.2433.5±7.05佐藥258018.3±6.1920.7±4.9636.0±5.2845.9±7.00*29.5±7.74使藥58016.3±5.7720.3±4.8133.4±7.9444.2±8.7533.2±10.00君+臣58014.1±4.4516.3±7.15*23.5±8.34**28.6±7.87**18.1±8.38**君+佐58016.9±5.2019.3±6.27*27.1±8.59**36.8±7.09**25.7±6.94*君+使58020.0±7.2225.3±5.8133.8±6.54*40.6±7.60*28.9±8.64君+臣+佐58015.0±6.5317.4±4.34*22.6±6.55**31.7±10.8**18.0±8.14**君+臣+使58019.2±5.2416.2±5.78*22.3±7.00**24.4±8.47**17.9±6.01**君+佐+使58016.2±5.0220.3±6.5730.6±7.43**34.2±7.15**26.1±8.93*

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05,**P<0.01

3.5 對(duì)氧嗪酸鉀誘導(dǎo)小鼠高尿酸血癥的影響

由表6的試驗(yàn)結(jié)果可以看出，與模型組相比，君藥、臣藥、佐藥和使藥在單獨(dú)使用時(shí)，對(duì)SUA水平無(wú)影響。佐藥2、君+佐、君+臣+佐、君+佐+使和蒼柏祛痛膠囊全方可顯著降低SUA水平(P<0.05，P<0.01)。值得注意的是，含有君藥和佐藥同時(shí)配伍的組方，可有效降低SUA水平。

表6 蒼柏祛痛膠囊及各拆方對(duì)高尿酸血癥小鼠SUA水平的影響

注：與對(duì)照組比較，**P<0.01；與模型組#P<0.05，##P<0.01

4 討論

中藥復(fù)方是中醫(yī)藥辯證論治和理法方藥在臨床治療中的具體體現(xiàn)。研究復(fù)方配伍規(guī)律,對(duì)于揭示中醫(yī)理論，推動(dòng)中醫(yī)藥的臨床應(yīng)用具有重要作用[3]。因此拆方研究的主要目的在于：(1)尋求發(fā)揮增效或減毒作用的最佳配伍；(2)確定組方中主要藥物或活性物質(zhì)；(3)確定組方中藥物的最佳劑量配比；(4)精簡(jiǎn)方劑；(5)驗(yàn)證方劑合理性[4]?，F(xiàn)代中藥復(fù)方拆方研究主要是通過(guò)藥理研究或是化學(xué)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證組方的有效性，是建立在對(duì)組方中各中藥藥理作用的基礎(chǔ)上。本研究將蒼柏祛痛膠囊全方拆成君、臣、佐、使不同配伍組合，觀察各拆方在鎮(zhèn)痛、抗炎和降尿酸的作用。

鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)1結(jié)果表明(見(jiàn)表2)，處方量佐藥和使藥在單獨(dú)成方時(shí)鎮(zhèn)痛作用均不明顯。而在各拆方中君藥、臣藥單獨(dú)成方時(shí)就有鎮(zhèn)痛作用，而佐藥和使藥必須與君藥和/或臣藥配伍成方，才能有顯著的鎮(zhèn)痛作用。鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)2結(jié)果表明(見(jiàn)表3)，君藥、臣藥、佐藥2在單獨(dú)成方時(shí)有著一定的鎮(zhèn)痛作用。而在各拆方中含有君藥的其他組方(君+佐、君+佐+使)以及含有君藥和臣藥同時(shí)配伍的其他組方(君+臣、君+臣+佐、君+臣+使)，均有明顯的鎮(zhèn)痛作用，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符[5-6]。提示君藥可協(xié)同臣藥、佐藥和使藥發(fā)揮全方的鎮(zhèn)痛作用，此外君藥+臣藥的聯(lián)合配伍也可協(xié)同佐藥、使藥發(fā)揮全方的鎮(zhèn)痛作用。推測(cè)在鎮(zhèn)痛方面的排位：君藥﹥臣藥﹥佐藥和使藥。

抗炎實(shí)驗(yàn)1結(jié)果表明(見(jiàn)表4)，處方量君藥就有較好的消腫作用，而臣藥、佐藥和使藥在單獨(dú)成方時(shí)，則消腫作用不明顯。在各拆方中，含君藥的配伍組方(君+臣、君+佐、君+臣+佐、君+臣+使)均具有顯著的消腫作用?？寡讓?shí)驗(yàn)2結(jié)果表明(見(jiàn)表5)，處方量君藥就有顯著消腫作用，隨著君藥用量增大可縮短發(fā)揮消腫作用的時(shí)間。處方量的臣藥給藥2h后才顯現(xiàn)消腫作用，在各拆方中，佐藥和使藥必須與君藥配伍成方(君+佐、君+使)，才能有顯著的鎮(zhèn)痛作用。值得注意的是在各拆方中，含有君藥和臣藥同時(shí)配伍的組方(君+臣、君+臣+佐、君+臣+使)在給藥1h后就能發(fā)揮顯著消腫作用。提示君藥、臣藥均有抗炎消腫作用，且二者之間存在協(xié)同性，可增強(qiáng)抗炎作用。推測(cè)在抗炎消腫的排位：君藥﹥臣藥﹥佐藥和使藥。

降酸實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明(見(jiàn)表6)，處方量的君藥、臣藥、佐藥和使藥在單獨(dú)成方時(shí)，無(wú)明顯的降低尿酸作用。當(dāng)提高君藥量到處方量的2倍時(shí)，君藥才能顯示出顯著的降酸作用。值得注意的是在各拆方中，佐藥2具有降尿酸作用，此外含有君藥和佐藥同時(shí)配伍的組方(君+佐、君+臣+佐、君+佐+使)有顯著的降尿酸作用。提示君藥+佐藥的聯(lián)合配伍也可協(xié)同臣藥、使藥發(fā)揮全方的降酸作用。推測(cè)在降尿酸作用的排位：君藥﹥佐藥﹥臣藥和使藥。

綜合上述結(jié)論，蒼柏袪痛膠囊所體現(xiàn)的鎮(zhèn)痛、抗炎作用主要體現(xiàn)在君、臣配伍上。已有研究顯示，君藥中所含黃柏及其炮制品就有較好的抗痛風(fēng)活性[7-8]。牛膝可引藥下行[9]，因此含君藥配伍的組方對(duì)于角叉菜膠誘導(dǎo)大鼠足趾腫脹具有較好的抗炎作用。

而蒼柏袪痛膠囊所體現(xiàn)的降尿酸作用主要體現(xiàn)在君、佐配伍上，特別是佐藥2即苦參+黃花菜這一組方。本研究中的結(jié)果顯示苦參+黃花菜具有鎮(zhèn)痛和降尿酸作用。關(guān)于苦參[10]，在當(dāng)歸拈痛丸的拆方研究中顯示其與茵陳、知母等是當(dāng)歸拈痛丸降尿酸的有效藥味。而關(guān)于黃花菜在治療痛風(fēng)中的應(yīng)用尚未有報(bào)道，這為后續(xù)研究提供了依據(jù)和方向。而君+佐藥的鎮(zhèn)痛作用并不明顯。

綜上可見(jiàn)只有君藥、臣藥、佐藥和使藥的合理配伍，才能產(chǎn)生協(xié)調(diào)、互補(bǔ)作用，明確發(fā)揮蒼柏祛痛膠囊全方藥物的鎮(zhèn)痛、抗炎和降尿酸藥效。