少腹逐瘀丸質(zhì)控方法研究

史利瑤　李建晨　田蜜

摘要：為了解決現(xiàn)行《中華人民共和國藥典》中關(guān)于少腹逐瘀丸的鑒別存在項(xiàng)目單一、不同劑型之間質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一等問題，通過對處方中主要藥效成分進(jìn)行定性和定量研究，建立了一種更為全面的少腹逐瘀丸質(zhì)控方法。采用薄層色譜法定性鑒別處方中的蒲黃、延胡索、肉桂3味藥材，通過高效液相色譜法測定芍藥苷的含量。結(jié)果表明：在薄層色譜圖中觀察到蒲黃、延胡索、肉桂藥材的特征斑點(diǎn)，芍藥苷進(jìn)樣量在0.128～1.28 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性試驗(yàn)的RSD值均小于2.0%，平均回收率為92.10%，RSD值為1.40%（n=9），芍藥苷含量的建議值不低于1.20 mg/g。所建立的方法準(zhǔn)確可靠，可行性高，重復(fù)性良好，可以作為完善少腹逐瘀丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：色譜分析;薄層色譜法;高效液相色譜法;少腹逐瘀丸;質(zhì)量控制

中圖分類號：O175.8文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

SHI Liyao， LI Jianchen， TIAN Mi.Study on quality control methods of Shaofu Zhuyu pills[J].Journal of Hebei University of Science and Technology，2019，40（3）：208-214.Study on quality control methods of Shaofu Zhuyu pills

SHI Liyao， LI Jianchen， TIAN Mi

（School of Chemical and Pharmaceutical Engineering， Hebei University of Science and Technology， Shijiazhuang， Hebei 050018， China）

Abstract：In order to solve the problems in the identification of Shaofu Zhuyu pills in the current pharmacopoeia of the People's Republic of China， such as single items and inconsistent quality control standards among different dasage forms， a more comprehensive quality control method for Shaofu Zhuyu pills was established by qualitative and quantitative research on the main pharmacodynamic components in the prescription. Three medicinal herbs including Pollen typhae， Corydalis Rhizoma and Cinnamon in the prescription are identified by TLC， and the content of Paeoniflorin in Shaofu Zhuyu pills is determined by HPLC. Characteristic spots of Pollen typhae， Corydalis Rhizoma and Cinnamon are observed in the thin-layer chromatogram. The linearity of Paeoniflorin is investigated and the results show a good linear relationship in the range of 0.128～1.28 μg. The RSDs of precision， the stability test and the reproducibility are all no more than 2.0%， the average recovery if of 92.10%， and the RSD is of 1.40%（n=9）. It is suggested that the content limit of Paeoniflorin should not be less than 1.20 mg/g. The established method is accurate and reliable with high feasibility and good repeatability， and can provide the basis for the total quality control of Shaofu Zhuyu pills.

Keywords：chromatographic analysis; thin layer chromatography （TLC）; high performance liquid chromatography （HPLC）; Shaofu Zhuyu pills; quality control

少腹逐瘀丸，為治療氣滯血瘀的典型處方[1]，其組方嚴(yán)謹(jǐn)、治療效果良好，經(jīng)科研人員改良后可得到顆粒、膠囊等不同劑型。少腹逐瘀丸曾被收載于《吉林省藥品標(biāo)準(zhǔn)》1977年版，1990年其被收錄于《中華人民共和國藥典》（以下簡稱《藥典》）中，經(jīng)逐年改版收錄至2015年版《藥典》中。但現(xiàn)行《藥典》對少腹逐瘀丸僅有關(guān)于部分藥味的顯微鑒別及芍藥苷的薄層鑒別方法，存在鑒別項(xiàng)目單一、不同劑型之間質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)不統(tǒng)一等問題，且市場上所售藥品的質(zhì)量參差不齊?？梢?，針對少腹逐瘀丸需要建立更全面的質(zhì)控方法和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2-10]。

河北科技大學(xué)學(xué)報(bào)2019年第3期史利瑤，等：少腹逐瘀丸質(zhì)控方法研究少腹逐瘀丸處方包含10味藥材，每味藥材所含的有效成分對應(yīng)不同的藥效基礎(chǔ)。方中輔藥蒲黃、延胡索有化瘀止痛、通利血脈的作用;佐藥肉桂有擴(kuò)張血管、促進(jìn)血液循環(huán)的作用;主藥赤芍的主要活性成分為芍藥苷，有養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、活血散瘀之功效。筆者通過對處方中主要藥效成分進(jìn)行定性和定量研究，制定蒲黃、延胡索和肉桂的薄層鑒別及有效成分芍藥苷含量的測定方法[11-16]，以期建立更為全面的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1主要儀器與材料

1.1儀器

Waters e2695-2489高效液相色譜儀，紫外檢測器，Empower工作站，色譜柱為Kromasil 100-5-C18（46 mm×150 mm，5 μm）;KQ-250B型超聲清洗儀器，昆山市超聲儀器有限公司提供;DK-98-ⅡA電熱恒溫水浴鍋、FZ102微型植物粉碎機(jī)，天津市泰斯特儀器有限公司提供;ZF-2三用紫外線分析儀，上海市安亭電子儀器廠提供;XP-205十萬分之一電子分析天平、AL204分析天平，梅特勒-托利公司提供。

1.2材料與試劑

硅膠60F254薄層板（德國MERCK公司提供），聚酰胺板（上海興亞凈化材料廠提供）。

桂皮醛對照品（批號為104-55-2，純度≥98%（HPLC法）），北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司提供;芍藥苷對照品（批號為23180-57-6，純度≥98%（HPLC法）），北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司提供;延胡索乙素對照品（批號為0726-201708）、肉桂對照藥材（批號為121363-201509）、延胡索對照藥材（批號為116491-201506）、蒲黃對照藥材（批號為121225-201506），均購于中國食品藥品檢定研究院;甲醇，色譜純，德國MERCK公司提供;水，娃哈哈純凈水;其余試劑均為分析純。

陰性對照，除去相應(yīng)的對照藥材外，其余幾味藥材按成藥制法，由實(shí)驗(yàn)室自制。

少腹逐瘀丸：天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司達(dá)仁堂制藥廠提供，批號為7280021;頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)赤峰丹龍藥業(yè)有限公司提供，批號為1710024;烏蘭浩特中蒙制藥有限公司提供，批號為160723;呼倫貝爾松鹿制藥有限公司提供，批號為171205;實(shí)驗(yàn)室自制，批號為201806。

2方法與結(jié)果

2.1薄層色譜鑒別

2.1.1蒲黃

供試品溶液：取本品約9 g，加入硅藻土8 g，剪碎，研勻，置于錐形瓶中。加80%（體積分?jǐn)?shù)，下同）乙醇50 mL，超聲處理30 min，過濾，蒸干濾液。將殘?jiān)?5 mL水溶解，用水飽和的正丁醇溶液振搖萃取2次，每次25 mL，圖1蒲黃薄層色譜圖

合并正丁醇液，蒸干，將殘?jiān)? mL乙醇溶解，作為供試品溶液。

對照藥材溶液：取缺少蒲黃的陰性制劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性溶液;另取蒲黃對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。

依照薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)。分別吸取上述3種溶液各1 μL，點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜板上，在丙酮-水（二者體積比為2∶3）展開劑中，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置于紫外光（365 nm）下檢視。供試品色譜與對照藥材色譜相應(yīng)的位置顯示相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性溶液無干擾。結(jié)果見圖1。

2.1.2延胡索

供試品溶液：取本品約9 g，加入硅藻土8 g，剪碎，研勻，置于具塞錐形瓶中。加氨水10 mL潤濕，密閉10 min，加入氯仿50 mL，加熱回流30 min，過濾。加入20 mL水，與濾液混勻，用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至2～3，振搖，分離酸水層，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至10～11，用氯仿萃取2次，每次15 mL。合并氯仿萃取液，蒸發(fā)至干，將殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為供試品溶液。

對照品溶液：取缺少延胡索的陰性制劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性溶液。取延胡索對照藥材0.3 g，同法制成對照藥材溶液。另取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對照品溶液。

依照薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)。分別吸取上述4種溶液各5 μL，點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以濃氨飽和的正己烷-乙酸乙酯-甲醇（三者體積比為5∶4∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，碘熏，直到斑點(diǎn)顯色清晰，取出，揮盡板上吸附的碘。在供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置顯示相同顏色的斑點(diǎn)，陰性溶液無干擾。結(jié)果見圖2。

2.1.3肉桂

供試品溶液：取本品9 g，加入硅藻土8 g，剪碎，研勻，置于錐形瓶中。加乙酸乙酯50 mL，加熱回流1 h，過濾，蒸干濾液，將殘?jiān)? mL乙醇溶解，作為供試品溶液。

對照品溶液：取缺少肉桂的陰性制劑，按供試品溶液的制備方法制成陰性對照溶液。取肉桂對照藥材03 g，同法制成對照藥材溶液。另取桂皮醛對照品，加乙醇制成每1 mL含1 μg的溶液，作為對照品溶液。

依照薄層色譜法進(jìn)行試驗(yàn)。吸取上述4種溶液各5 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，在石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯-甲酸（三者體積比為16∶5∶0.2）展開劑中，展開，取出，晾干，二硝基苯肼乙醇試液顯色。在供試品色譜與對照品色譜相應(yīng)的位置顯示相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對照溶液無干擾。結(jié)果見圖3。

在上述肉桂藥材的薄層鑒別條件下，4批樣品定性鑒別差異較大，且樣品2（赤峰丹龍藥業(yè)）、樣品6（中蒙制藥）、樣品7（松鹿制藥）在與對照品色譜相應(yīng)位置上無特征斑點(diǎn)。自制丸劑樣品8與對照品在色譜相應(yīng)的位置上顯色相同。考慮到有效成分桂皮醛的揮發(fā)性、不同樣品的存放時(shí)間及不同廠家所用肉桂藥材的優(yōu)劣等會影響鑒別結(jié)果，可將以上因素作為判斷少腹逐瘀丸樣品質(zhì)量優(yōu)劣的參考依據(jù)。

2.2含量測定[17-20]

2.2.1色譜條件

Kromasil 100-5-C18色譜柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（二者體積比為30∶70），檢測波長為230 nm，流速為1.0 mL/min，柱溫為30 ℃，進(jìn)樣量為10 μL。

2.2.2溶液制備

對照品溶液：取芍藥苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含60 μg的溶液，即得。

供試品溶液：取本品1 g，剪碎，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，冷卻，恒重，搖勻，過濾，取續(xù)濾液即得。

陰性對照溶液：按處方比例稱取其余9味藥材（缺赤芍），根據(jù)成藥的制法制成陰性樣品，即得。

2.2.3專屬性

精密吸取上述3種溶液及70%甲醇空白溶液，在“2.2.1”項(xiàng)條件下測定。在相對應(yīng)的保留時(shí)間處，對照品溶液與供試品溶液均顯示出芍藥苷特征峰;而陰性對照溶液與70%甲醇空白溶液均無芍藥苷色譜峰，表明在上述色譜條件下處方中其他味藥材對芍藥苷的含量測定不產(chǎn)生干擾。結(jié)果如圖4—圖7所示。

2.2.4線性關(guān)系

選取質(zhì)量濃度為0.064 mg/mL的芍藥苷對照品溶液，精密吸取2，5，10，15，20 μL，注入高效液相色譜儀。按“2.2.1”項(xiàng)條件進(jìn)行測定，以橫坐標(biāo)為對照品進(jìn)樣量（x），縱坐標(biāo)為峰面積積分值（y），繪制芍藥苷標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)處理得到芍藥苷線性回歸方程為y=1 627x-29 638，（R2=0.999 8）。結(jié)果表明，芍藥苷進(jìn)樣量范圍為0.128～1.28 μg時(shí)，線性關(guān)系良好。詳見表1。

2.2.5精密度

精密吸取質(zhì)量濃度為0.064 mg/mL芍藥苷對照品溶液各10 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積，得到RSD值為0.32%（n=6），表明精密度良好。結(jié)果見表2。

2.2.6穩(wěn)定性

吸取同一供試品溶液（呼倫貝爾松鹿制藥有限公司提供，批號為171205），分別在0，4，8，16，20，24 h時(shí)間段各進(jìn)樣10 μL，測定峰面積，得到RSD值為1.22%（n=6），表明供試品溶液穩(wěn)定性良好。結(jié)果見表3。

2.2.7重復(fù)性

取同一供試品溶液（呼倫貝爾松鹿制藥有限公司提供，批號為171205），分別稱取6份，同法制備各供試品溶液，并在“2.2.1”項(xiàng)條件下進(jìn)行測定。

芍藥苷含量平均值為1.85 mg/g，RSD值為1.58%（n=6），表明重復(fù)性良好，結(jié)果見表4。

2.2.8加樣回收率

取同一供試品溶液（呼倫貝爾松鹿制藥有限公司提供，批號為171205），精密稱取9份，加入甲醇溶解的芍藥苷對照品，各濃度對照品加入量與所取供試品含量之比分別為0.8∶1，1∶1，1.2∶1共3個(gè)濃度，每個(gè)濃度平行做3份，加入對照品溶液后按照供試品溶液的制備方法進(jìn)行制備，計(jì)算回收率。得到平均回收率為9210%，RSD值為1.40%（n=9），符合定量分析要求。結(jié)果見表5。

按照上述方法，依次制備各批次樣品的供試品溶液，并按“2.2.1”項(xiàng)色譜條件分別測定4批樣品的芍藥苷含量，結(jié)果見表6。

3結(jié)論

1）通過對處方中主要藥效成分進(jìn)行定性和定量研究，以及對提取溶劑、時(shí)間和方法進(jìn)行優(yōu)化，建立了蒲黃、延胡索、肉桂3味藥材的薄層鑒別方法以及芍藥苷的含量測定限度。方法耐用性良好，重復(fù)性較強(qiáng)，可以作為完善少腹逐瘀丸質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的參考依據(jù)。

2）通過對含量測定中供試品的制備方法進(jìn)行考察，確定了芍藥苷的提取方法為70%甲醇超聲提取30 min，以甲醇-水（二者體積比為30∶70）作為流動相，所得芍藥苷色譜峰的峰型和分離度較好。方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果表明，空白、陰性溶液對芍藥苷色譜峰無干擾。所建立的方法準(zhǔn)確可靠，可行性高。通過對芍藥苷含量進(jìn)行限度的制定，建議少腹逐瘀丸中芍藥苷的含量不得低于1.20 mg/g。

3）本研究僅適用于丸劑樣品，對于經(jīng)過提取制粒后的顆粒和膠囊制劑，還需再作進(jìn)一步的研究。

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