中藥當(dāng)歸化學(xué)成分的分離及其內(nèi)酯類(lèi)成分結(jié)構(gòu)的鑒定研究

王傳娟

【摘 要】 目的：對(duì)中藥當(dāng)歸中的化學(xué)成分以及內(nèi)酯類(lèi)成分結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，以此來(lái)為臨床用藥提供科學(xué)合理的依據(jù)。方法：相關(guān)化學(xué)成分均采用硅膠柱色譜和制備薄層色譜等方式進(jìn)行分離純化，將波譜數(shù)據(jù)以及理化性質(zhì)作為依據(jù)，對(duì)中藥當(dāng)歸中的藁本內(nèi)酯類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定。結(jié)果：分離后共獲得15個(gè)化合物，采用色譜方法從當(dāng)歸根乙醇提取物中分離出（Z）-藁本內(nèi)酯、（Z）-6，7-反式-二羥基藁苯內(nèi)酯、（Z）-6，7-環(huán)氧藁苯內(nèi)酯、當(dāng)歸酸（Z）-藁苯內(nèi)酯-11-醇酯。結(jié)論：中藥當(dāng)歸的化學(xué)成分采用薄層色譜法與硅膠柱色譜法進(jìn)行分離操作簡(jiǎn)單，為當(dāng)歸化學(xué)成分的理化性質(zhì)研究提供了重要參考依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 中藥;當(dāng)歸;化學(xué)成分;內(nèi)酯類(lèi)成分;鑒定

【中圖分類(lèi)號(hào)】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號(hào)】 1005-0019（2019）14-118-02

現(xiàn)階段，中藥當(dāng)歸已被廣泛應(yīng)用于臨床，在血栓性淺靜脈炎、冠心病、高血壓、中風(fēng)、腫瘤、婦科疾病以及貧血等疾病治療中得到了廣泛應(yīng)用，能促使機(jī)體免疫力提高，同時(shí)還具備抗氧化、改善肺功能、抗炎等諸多功效[1-2]。本研究主要針對(duì)中藥當(dāng)歸中的化學(xué)成分以及內(nèi)酯類(lèi)成分結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，以此來(lái)為臨床用藥提供科學(xué)合理的依據(jù)，報(bào)道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

JascoJ-1010旋光分析儀器;MP-A4型顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀器;AV-612型以及Bruker ARS-300型核磁共振光譜儀器;DU-640紫外光譜儀器;996二極管陣列檢測(cè)儀器;Waters717高效液相色譜儀器。

1.2 試劑

三蒸水;柱色譜硅膠;薄層色譜硅膠H;;薄層色譜硅膠GF251;甲醇為色譜純;正己烷;丙酮;石油醚。

1.3 實(shí)驗(yàn)試藥

批號(hào)為20150217的當(dāng)歸，我院相關(guān)專(zhuān)業(yè)教授對(duì)其進(jìn)行鑒定之后，確定為為傘形科植物當(dāng)歸的干燥根。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取與分離當(dāng)歸有效成分

提取當(dāng)歸有效成分：稱(chēng)取10g干燥的中藥材當(dāng)歸，粉碎之后浸泡在95%的乙醇溶液中，然后再采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀器對(duì)其進(jìn)行濃縮，獲取濃縮液與藥渣，然后再將95%的乙醇溶液加入藥渣中，嚴(yán)格按照以上方式進(jìn)行浸提，行3次反復(fù)操作之后，合并濃縮液，獲得1.5L總浸膏[3];在水溶液中懸浮浸膏，對(duì)其進(jìn)行萃取，獲得49.95g正丁醇萃取物、26.97g石油醚萃取物、53.1g乙酸乙酯萃取物。

分離當(dāng)歸有效成分：經(jīng)硅膠柱色譜部分分離醋酸乙酯，梯度洗脫石油醚—醋酸乙酯系統(tǒng)，最終共獲得15個(gè)化合物與15個(gè)部分，經(jīng)甲醇溶液將第5部分析出白色固體，抽濾之后獲得雙藁苯內(nèi)酯，第6部分經(jīng)硅膠柱色譜分離，獲得5-羥甲基糠醛、5-乙酰氧甲基糠醛;第7部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜分離，獲得對(duì)甲基苯酚;第15部分經(jīng)硅膠柱色譜與柱色譜分離，獲得4-（2 羥基-1-甲氧乙基）-苯酚、阿魏酸、4-（2-羥基-1-乙氧乙基）-苯酚。經(jīng)硅膠柱色譜將乙酸乙酯萃取物反復(fù)分離純化，獲得異歐前胡素、菠菜甾醇、發(fā)卡二醇、厚樸酚、反式阿魏酸、正丁基苯酞，采用以氯仿—甲醇行梯度洗脫，反復(fù)分離純化后獲得黃芩苷。

2.2 內(nèi)酯類(lèi)化合物藁苯內(nèi)酯的分離與鑒定

提取方法：采用超臨界CO2萃取法，利用HA141-50-01超臨界萃取裝置，2取500g當(dāng)歸中藥材，采用超臨界 CO2（SC-CO2）對(duì)其進(jìn)行萃取，萃取壓力控制為20MPa，溫度控制為40攝氏度，流量控制為15kg/h，萃取時(shí)間控制在2h。

藁本內(nèi)酯分離方法：選擇硅膠柱色譜進(jìn)行分離，藁本內(nèi)酯具有較小極性，采行5次反復(fù)梯度洗脫，獲得藁本內(nèi)酯，純度在98%以上。

提取藁本內(nèi)酯化合物：取當(dāng)歸CO2超臨界萃取物，每次試驗(yàn)時(shí)均取500g中藥當(dāng)歸藥材，將其粉碎之后放入超臨界萃取釜中，采用CO2對(duì)其進(jìn)行萃取;合并超臨界CO2萃取釜提取的揮發(fā)油，干燥后采用薄層制備方式行分離處理，行梯度洗脫，每100ml對(duì)溶液進(jìn)行收集，然后再行GC-MS檢測(cè)，分成5分組份，各個(gè)組份均將溶劑揮發(fā)干燥后，行薄層色譜分離處理，萃取，溶劑回收之后獲得25.4g乙酸乙酯，324g油狀物質(zhì)。再次硅膠柱色譜分離第1份之后，行梯度洗脫，獲物（Z）-藁本內(nèi)酯;第3份經(jīng)Sephadex LH-20柱色譜獲得當(dāng)歸酸（Z）-藁苯內(nèi)酯-11-醇酯;第7份經(jīng)高效液相色譜以及硅膠柱色譜 Sephadex LH-20分離獲得物（Z）- 6，7-反式-二羥基藁苯內(nèi)酯;分經(jīng)過(guò)反復(fù)硅膠柱色譜后，乙酸乙酯部分獲得物（Z）- 6，7-環(huán)氧藁苯內(nèi)酯。

藁本內(nèi)酯類(lèi)化合物結(jié)構(gòu)鑒定：（1）（Z）-藁本內(nèi)酯：經(jīng)13C-NMR譜中，δ值為126.7、127.5、152.0/145.6等位移值表明有共軛價(jià)健存在于結(jié)構(gòu)中，δ值為158.7表明有羰基存在于結(jié)構(gòu)中，按照峰型分裂情況，可知其屬于內(nèi)酯類(lèi)化合物。（2）（Z）-6，7-反式-二羥基藁苯內(nèi)酯：經(jīng)13-NMR，可觀察到有12個(gè)碳原子存在于本結(jié)構(gòu)中，含有雙鍵碳4個(gè)，連氧雙鍵碳1個(gè)，羰基結(jié)構(gòu)1個(gè)，δ值為42.6 處可以觀察到有連氧烷基碳原子存在，同時(shí)還有烷基碳5個(gè);Dept顯示，有4 個(gè)季碳原子存在于低場(chǎng)處，從1H-NMR譜中可以觀察到雙鍵氫2個(gè)。

3 討論

當(dāng)歸屬于一種常見(jiàn)的中藥，主要分布于我國(guó)湖南、湖北、貴州、山西、青海、四川、云南以及甘肅等地區(qū)[4-5]。該藥物具有潤(rùn)腸滑腸、調(diào)經(jīng)止血以及補(bǔ)血和血等諸多功效，主要化學(xué)成分包括多糖類(lèi)、苯酞類(lèi)、內(nèi)酯類(lèi)、酚酸類(lèi)、黃酮類(lèi)以及揮發(fā)油等[6]。揮發(fā)油是當(dāng)歸的主要有效成分，在總生物含量中占有1.2%左右的比例，包括酸性油、酚性油以及中性油3種，其中比重最高的為中性油，其主要成分包括松柏醇阿魏酸酯、新當(dāng)歸內(nèi)酯、亞丁基苯酞、川芎內(nèi)酯類(lèi)以及藁本內(nèi)酯類(lèi)等19種，具有降血壓等諸多作用，能有效保護(hù)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血癥。本研究中提取到了15種化合物，同時(shí)還對(duì)當(dāng)歸揮發(fā)油中的藁本內(nèi)酯類(lèi)成分進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定，通過(guò)超臨界CO2萃取法提取當(dāng)歸中的揮發(fā)油成分，經(jīng)硅膠柱色譜法分離出四種化合物，分別為（Z）-藁本內(nèi)酯、（Z）-6，7-反式-二羥基藁苯內(nèi)酯、（Z）-6，7-環(huán)氧藁苯內(nèi)酯、當(dāng)歸酸（Z）-藁苯內(nèi)酯-11-醇酯。

綜上所述，中藥當(dāng)歸的化學(xué)成分采用薄層色譜法與硅膠柱色譜法進(jìn)行分離操作簡(jiǎn)單，為當(dāng)歸化學(xué)成分的理化性質(zhì)研究提供了重要參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

[1] 朱邵晴， 郭盛， 錢(qián)大瑋，等. 基于多元功效成分的當(dāng)歸藥材產(chǎn)地現(xiàn)代干燥加工方法研究[J]. 中國(guó)中藥雜志， 2017， 42（2）：264-273.

[2] 李靜. 基于NMR代謝組學(xué)技術(shù)的當(dāng)歸不同部位化學(xué)成分比較[J]. 中草藥， 2017， 48（7）：1409-1415.

[3] 陳廷廷，劉波，王秀梅. 川西高原當(dāng)歸藥花蜜酒發(fā)酵條件優(yōu)化及其風(fēng)味成分分析[J]. 食品工業(yè)科技， 2017， 38（15）：146-151.