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    日立HITACHI 7180生化檢測(cè)體系的抗干擾研究

    2018-09-13 09:33:36李林英鄧昭敏向省平高學(xué)梅
    檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床 2018年17期
    關(guān)鍵詞:脂血黃疸膽紅素

    李林英,劉 琳,鄧昭敏,向省平,高學(xué)梅

    (西藏自治區(qū)人民政府駐成都辦事處醫(yī)院檢驗(yàn)科,成都 610041)

    生化檢測(cè)是臨床診斷工作的重要輔助手段,通過(guò)對(duì)血液或體液的分析,檢測(cè)相關(guān)生化指標(biāo),再結(jié)合其他臨床資料進(jìn)行綜合分析,可診斷或預(yù)測(cè)疾病,評(píng)價(jià)器官功能,鑒別并發(fā)因素,決定治療的基準(zhǔn),并評(píng)價(jià)治療的預(yù)后。目前生化檢驗(yàn)主要使用全自動(dòng)生化分析儀,全自動(dòng)生化分析儀指所有分析過(guò)程都實(shí)施了自動(dòng)化的生化分析儀[1]。國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織對(duì)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的能力認(rèn)證提出了《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室——質(zhì)量和能力的要求(ISO15189)》,根據(jù)該要求,任何檢驗(yàn)體系的建立和變更都需得到確認(rèn)。ISO15189體系在實(shí)驗(yàn)室對(duì)檢測(cè)方法的確認(rèn)和驗(yàn)證方面提出了很多具體的要求,圍繞全自動(dòng)生化儀檢測(cè)系統(tǒng),包括精密度、線性、臨床可報(bào)告范圍、正確度、參考區(qū)間、抗干擾等試驗(yàn)。王治國(guó)[2]認(rèn)為干擾試驗(yàn)的目的是評(píng)估被分析標(biāo)本中其他物質(zhì)引起的系統(tǒng)誤差,這些誤差是恒定的,對(duì)檢測(cè)的影響與被測(cè)物質(zhì)濃度無(wú)關(guān),僅與標(biāo)本的干擾物濃度有關(guān)。多年來(lái)的臨床研究表明,溶血、脂血、黃疸是臨床生化檢驗(yàn)標(biāo)本干擾的主要來(lái)源,會(huì)對(duì)部分項(xiàng)目產(chǎn)生規(guī)律性的干擾。本研究應(yīng)用國(guó)內(nèi)生化試劑研究日立7180生化分析儀的抗干擾性能,提供醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室判斷生化結(jié)果時(shí),排除干擾的有效依據(jù),并為ISO 15189體系認(rèn)證作準(zhǔn)備。

    1 材料與方法

    1.1儀器與試劑 (1)儀器:日立HITACHI 7180全自動(dòng)生化儀。(2)試劑:肝功能檢測(cè)項(xiàng)目包括血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨?;D(zhuǎn)移酶(GGT)、總蛋白(TP)、清蛋白(ALB)、總膽紅素(TB)、直接膽紅素(DB)。腎功能包括血清肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、尿酸(UA)、葡萄糖(GLU)。心肌酶類包括血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脫氫酶(LDH)(以上檢測(cè)試劑盒為寧波美康生物科技股份有限公司生產(chǎn)的試劑盒)。血脂包括血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)(以上為北京九強(qiáng)生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)的試劑盒)。方法學(xué):見(jiàn)表1。校準(zhǔn)品:生化試劑廠家配套校準(zhǔn)品。

    1.2方法

    1.2.1標(biāo)本 制備新鮮混合血清,取當(dāng)日體檢正常標(biāo)本20例,要求標(biāo)本無(wú)溶血、脂血、黃疸,吸取上層血清,混合均勻。

    1.2.2干擾物 溶血:取檢測(cè)過(guò)血紅蛋白的全血標(biāo)本,記錄血紅蛋白濃度,加純化水進(jìn)行溶血處理(反復(fù)吸打后靜置0.5 h),配制成血紅蛋白濃度為60 g/L的溶血干擾物原液,并依次稀釋至10、20、40 g/L。脂血:取甘油三月桂酸酯純品,加入熱的曲拉通中,繼續(xù)加熱至溶解,加水?dāng)嚢?,配制成甘油三月桂酸酯濃度?20 mmol/L的脂血干擾物原液,并依次稀釋至20、40、80 mmol/L。黃疸:取膽紅素純品,加入純化水中,再加NaOH溶液并攪拌直至膽紅素溶解溶液澄清,使用稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至約為7.2,配制成膽紅素濃度為6 000 μmol/L的黃疸干擾物原液,并依次稀釋至1 000、2 000、4 000 μmol/L。

    1.2.3干擾試驗(yàn) 取1.2.1所述標(biāo)本,分出13支,分別以干擾物∶血清=1∶9的比例加入干擾物,獲得溶血系列干擾物濃度為1、2、4、6 g/L,并用比色法測(cè)定血紅蛋白,結(jié)合混合血清的原始血紅蛋白濃度計(jì)算干擾物加入的濃度,確保干擾物濃度偏差在10%以內(nèi)。脂血系列干擾物濃度為2、4、8、12 mmol/L,并用生化儀檢測(cè)TG濃度,結(jié)合混合血清原始TG濃度計(jì)算干擾物加入的濃度,確保干擾物濃度偏差在10%以內(nèi)。黃疸系列干擾物濃度為100、200、400、600 μmol/L,并用生化儀檢測(cè)總膽紅素濃度,結(jié)合混合血清原始總膽紅素濃度計(jì)算干擾物加入的濃度,確保干擾物濃度偏差在10%以內(nèi)。最后1支作為基準(zhǔn)組,加入等量的生理鹽水。上機(jī)測(cè)試各項(xiàng)目,并做3個(gè)重復(fù)測(cè)試。

    1.2.4結(jié)果判斷 根據(jù)國(guó)家衛(wèi)計(jì)委《臨床檢驗(yàn)中心室間質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)(2017年版)》的各項(xiàng)目可允許范圍,干擾物濃度達(dá)到某一濃度時(shí),檢測(cè)結(jié)果與對(duì)照結(jié)果偏差超過(guò)可允許范圍,則認(rèn)為該項(xiàng)目?jī)H能承受其前1個(gè)濃度的干擾物。

    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 檢測(cè)結(jié)果錄入Excel表格進(jìn)行統(tǒng)計(jì),計(jì)算每個(gè)干擾物水平3次重復(fù)的平均值,并與基準(zhǔn)組進(jìn)行比較,計(jì)算偏倚,統(tǒng)計(jì)各干擾物偏差方向的規(guī)律。

    2 結(jié) 果

    2.1各項(xiàng)目方法學(xué)和各干擾物最高濃度值結(jié)果的平均濃度 見(jiàn)表1。

    2.2溶血試驗(yàn)結(jié)果 心肌酶3個(gè)項(xiàng)目CK、CK-MB、LDH溶血干擾在1 g/L時(shí),對(duì)結(jié)果的影響不可接受(分別為23.2%、16.9%、26.9%的正偏差);AST、TB、DB、UA、TG能承受的溶血干擾在4 g/L;其余項(xiàng)目ALT、ALP、GGT、TP、ALB、CRE、BUN、GLU、TC、HDL-C、LDL-C能承受試驗(yàn)設(shè)定的最大溶血干擾物濃度6 g/L。心肌酶受溶血干擾結(jié)果大幅上升;ALT、AST、TP、ALB、BUN、TC、TG受溶血干擾結(jié)果輕度上升,偏差在干擾物4 g/L時(shí)分別為5.7%、11.4%、3.2%、2.8%、4.2%、6.7%、10.8%;TB、DB、CRE、UA受溶血干擾結(jié)果輕度下降,偏差在干擾物4 g/L時(shí)分別為10.2%、12.8%、3.2%、7.1%;ALP、GGT、GLU、HDL-C、LDL-C結(jié)果幾乎不受溶血影響。

    2.3脂血試驗(yàn)結(jié)果 ALT、AST、TP、TB、DB、CK、CK-MB能承受的脂血干擾在8 mmol/L;其余項(xiàng)目ALB、ALP、GGT、CRE、BUN、UA、GLU、LDH-C能承受試驗(yàn)設(shè)定的最大脂血干擾物濃度為12 mmol/L;血脂4項(xiàng)由于本身依附于脂類存在,不作該項(xiàng)評(píng)價(jià)。TP、ALP、GGT、CRE、UA、CK、CK-MB、LDH-C受脂血干擾輕度上升,偏差在干擾物8 mmol/L時(shí)分別為4.8%、8.5%、10.5%、8.4%、7.6%、10.1%、12.5%、6.7%;ALT、AST、TB、DB受脂血干擾輕度下降,偏差在干擾物8 mmol/L時(shí)分別為13.2%、12.8%、11.7%、11.2%;ALB、BUN、GLU結(jié)果幾乎不受脂血影響。

    2.4黃疸試驗(yàn)結(jié)果 CK-MB、TC、TG能承受的黃疸干擾在400 μmol/L;其余項(xiàng)目ALT、AST、ALB、TP、ALP、GGT、CRE、BUN、UA、GLU、CK、LDH、HDL-C、LDL-C能承受試驗(yàn)設(shè)定的最大黃疸干擾物濃度為600 μmol/L;TB、DB由于本身依附于膽紅素存在,不作該項(xiàng)評(píng)價(jià)。ALT、AST、TP、ALP、GGT、CRE、UA、CK-MB、TC、TG受黃疸干擾輕度下降,偏差在干擾物400 μmol/L時(shí)分別為8.5%、3.3%、2.3%、3.4%、9.7%、5.7%、7.3%、14.7%、7.4%、7.1%;ALB、BUN、GLU、CK、LDH、HDL-C、LDL-C結(jié)果幾乎不受黃疸影響。

    表1 各項(xiàng)目方法學(xué)和各干擾物最高濃度時(shí)的結(jié)果平均水平

    注:―表示無(wú)數(shù)據(jù)

    3 討 論

    隨著科學(xué)的迅猛發(fā)展,在滿足更高的醫(yī)學(xué)應(yīng)用需求的同時(shí),各種醫(yī)學(xué)輔助手段也越來(lái)越趨向嚴(yán)謹(jǐn)和完善。近年來(lái)對(duì)ISO15189體系認(rèn)證中生化檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證和標(biāo)本抗干擾方面的研究較多,其中以金鶴成[3]的HITACHI7060系統(tǒng)抗干擾性能評(píng)價(jià)最早(2001年),評(píng)價(jià)了TG和UA 2項(xiàng),由于系統(tǒng)過(guò)時(shí),對(duì)目前醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)研究已鮮有參考價(jià)值。生化分析儀和配套試劑供應(yīng)商種類繁多,需進(jìn)行配套性能的評(píng)價(jià),近年來(lái)科學(xué)工作中,李強(qiáng)[4]在AU680的抗干擾研究比較系統(tǒng)和完備;張靜靜等[5]對(duì)BS480的精密度、準(zhǔn)確度、抗干擾等性能進(jìn)行了評(píng)價(jià);劉沛[6]深度評(píng)價(jià)了CK-MB試劑的抗干擾性能,對(duì)本研究工作頗有借鑒意義。

    本研究溶血干擾的心肌酶類項(xiàng)目顯著升高,是由于血細(xì)胞含有高濃度的心肌酶類物質(zhì),對(duì)心肌酶類項(xiàng)目產(chǎn)生不可逆的正向干擾[7]。溶血標(biāo)本呈現(xiàn)的暗紅色對(duì)500nm附近光波的吸收能解釋單試劑TC、TG的升高問(wèn)題,其他影響較小的項(xiàng)目則可能是由于細(xì)胞內(nèi)蛋白類、脂類、部分其他酶類則僅比血清稍高。溶血標(biāo)本去除干擾極其困難,一般采取重新采血的辦法。劉磊[8]認(rèn)為對(duì)易發(fā)生溶血的標(biāo)本,應(yīng)盡量不用留置針連接采血器采血,使用單純采血器能降低溶血的發(fā)生率。脂血標(biāo)本的血清中存在較高濃度的乳糜顆粒,呈現(xiàn)淺黃色或乳白色,而標(biāo)本出現(xiàn)脂血原因可能為患者輸注脂肪乳但未達(dá)到規(guī)定的代謝時(shí)間即采血,患者采血前非空腹?fàn)顟B(tài)或已進(jìn)食高脂肪食物,患者自身已有高脂血癥等,理論上會(huì)使所有波長(zhǎng)的吸光度上升[9]。隨生化檢測(cè)系統(tǒng)的完善,雙試劑能去除標(biāo)本空白,副波能消除副產(chǎn)物和雜質(zhì)的干擾,因此脂血在各項(xiàng)目的干擾程度一般。ALT、AST、TB、DB受脂血影響下降可能是由于乳糜顆粒過(guò)多吸入反應(yīng)體系,使參與反應(yīng)的血清含量減少。去除脂血干擾的方法一般有稀釋法、高速離心法、乙醚提取法等。周垚等[10]認(rèn)為高速離心法效果較好,且操作便捷,適合臨床應(yīng)用。黃疸標(biāo)本的干擾原理主要是膽紅素的強(qiáng)還原性,影響試劑中的氧化性底物和中產(chǎn)物的工作,如競(jìng)爭(zhēng)Trinder反應(yīng)中的過(guò)氧化物,使反應(yīng)產(chǎn)物減少(如TC、TG、UA)。其次,棕黃色的膽紅素會(huì)對(duì)通過(guò)血清的450nm附近的光波形成特殊吸收,隨光解或被氧化而生成膽綠素,膽綠素在波長(zhǎng)550nm有特殊吸收,從而影響相應(yīng)波長(zhǎng)附近的反應(yīng)結(jié)果。另外,患膽汁淤積性黃疸的嬰兒,由于脂蛋白-X的存在,致使LDL-C和雙縮脲法TP的結(jié)果異常偏高,因此黃疸影響下的生化檢測(cè)結(jié)果,還應(yīng)考慮臨床的一些其他生理、病理因素[11]。張厚毅等[12]認(rèn)為利用膽紅素的半抗原性質(zhì),使用聚苯乙烯顆粒包被的抗膽紅素抗體與嚴(yán)重黃疸的血清標(biāo)本作用,再離心去除聚苯乙烯顆粒,能獲得良好的去黃疸干擾效果,目前該方法尚未被推廣使用。試驗(yàn)結(jié)果在臨床應(yīng)用中有重要意義,如渠建軍[13]對(duì)高脂血癥患者的血清TB濃度進(jìn)行統(tǒng)計(jì)研究,發(fā)現(xiàn)血清TB與脂血濃度呈負(fù)相關(guān)。本研究試驗(yàn)表明,化學(xué)氧化法TB、DB對(duì)于脂血的抗干擾能力一般,隨脂血干擾濃度上升而降低,或能在一定程度上說(shuō)明以上現(xiàn)象的發(fā)生機(jī)制。

    綜上所述,日立7180生化分析儀應(yīng)用國(guó)內(nèi)生化試劑,抗干擾性能較好,試驗(yàn)結(jié)果能反映標(biāo)本不同濃度的溶血、脂血、黃疸干擾物對(duì)各生化項(xiàng)目的干擾情況,對(duì)提高臨床判斷的準(zhǔn)確性及相關(guān)檢驗(yàn)檢測(cè)方法的研究具有參考意義。將來(lái)可能對(duì)儀器結(jié)合相關(guān)研究結(jié)果進(jìn)行開(kāi)發(fā),使儀器能自動(dòng)辨別血清的黃疸濃度是否對(duì)項(xiàng)目造成影響,并提供自動(dòng)復(fù)查或自動(dòng)復(fù)查提示,極大地降低檢測(cè)的差錯(cuò)率。

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