鳶尾蒜種子無(wú)菌萌發(fā)及鱗莖形成

呂學(xué)思，任梓銘，張棟，夏宜平

（浙江大學(xué)農(nóng)業(yè)與生物技術(shù)學(xué)院園藝系，杭州 310058）

鳶尾蒜[Ixiolirion tataricum(Pall.)Herb.]是石蒜科（Amaryllidaceae）鳶尾蒜屬（Ixiolirion）多年生球根花卉。據(jù)記載，鳶尾蒜屬在我國(guó)僅新疆北部分布有2種，即鳶尾蒜[Ixiolirion tataricum(Pall.)Herb.]與準(zhǔn)噶爾鳶尾蒜（Ixiolirion songarieumP.Yan）[1-3]。鳶尾蒜耐寒耐旱，花色艷麗，是一種很有觀賞價(jià)值的野生花卉資源，此外，鳶尾蒜還具藥用價(jià)值，可作為新疆當(dāng)?shù)厮幉腫4]。鳶尾蒜屬于早春開(kāi)花類(lèi)短命植物，分布區(qū)十分狹窄。近年來(lái)，由于城市的快速發(fā)展、農(nóng)墾面積的不斷擴(kuò)大，其生存受到嚴(yán)重威脅，亟須保護(hù)[5]。利用野生種子的無(wú)菌播種獲得組培苗，不破壞野生資源，是一種有效的保存珍稀植物的方法。成功的離體培養(yǎng)能夠在短時(shí)間內(nèi)獲得大批量的植物材料[6]。

本實(shí)驗(yàn)室近年來(lái)建立了石蒜屬（Lycoris）無(wú)菌播種技術(shù)體系。任梓銘等[7]研究表明，將石蒜屬植物種子進(jìn)行充分浸泡后，再置于氯化汞（HgCl2）中進(jìn)行短時(shí)渦旋振蕩，能夠降低種子污染率，且獲得較高的萌發(fā)率。在鳶尾蒜種子萌發(fā)方面，謝雙全[5]和田琳等[8-9]均認(rèn)為低溫是種子萌發(fā)的首要條件，而適當(dāng)濃度的赤霉素（GA3）、H2O2、NaHCO3和刺皮等處理，對(duì)提高種子萌發(fā)率都有不同程度的促進(jìn)作用，其中，800 g/L的GA3處理可以使種子萌發(fā)率達(dá)99%。同時(shí)，大量的研究表明，球根植物鱗莖離體成球時(shí)，移栽成活率更高[10]。而鱗莖的形成既要求一定的環(huán)境條件如較長(zhǎng)的日照和較高的溫度，又與許多植物生長(zhǎng)物質(zhì)有關(guān)[11]。目前，關(guān)于鳶尾蒜屬的研究多集中在其地理分布[1-2]、化學(xué)成分[12-13]、營(yíng)養(yǎng)器官解剖結(jié)構(gòu)[14]、種子萌發(fā)特性[5]等方面，而無(wú)菌播種及培養(yǎng)條件對(duì)離體萌發(fā)的影響未見(jiàn)報(bào)道，也未見(jiàn)其離體鱗莖形成相關(guān)研究。

本文參考石蒜屬植物的無(wú)菌播種體系，選擇不同的消毒方式、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)基配方、GA3處理、貯藏溫度及時(shí)間，系統(tǒng)地研究其對(duì)鳶尾蒜種子無(wú)菌萌發(fā)及離體鱗莖形成的影響，旨在為有效地保存鳶尾蒜野生種質(zhì)資源，并實(shí)現(xiàn)人工繁殖與開(kāi)發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試材料為2017年4月于新疆昌吉回族自治州采集的野生鳶尾蒜種子。自然干燥后選擇飽滿(mǎn)的種子作為試驗(yàn)材料，種子百粒質(zhì)量為（515.62±6.03）mg。其余種子裝于具有透氣性的牛皮紙信封內(nèi)，分別置于室溫（25℃）和4℃冷柜中保存。

1.2 方法

試驗(yàn)于2017年6月至2018年3月在浙江大學(xué)觀賞植物組培實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。無(wú)菌培養(yǎng)室光照強(qiáng)度為60 μmol/(m2·s)，溫度為（25±2）℃。

試驗(yàn)參考任梓銘等[7]石蒜屬種子無(wú)菌播種的方法進(jìn)行，并做少量改動(dòng)。將不同貯藏方式下的鳶尾蒜種子置于清水或800 mg/L的GA3溶液中浸泡12 h，然后將種子置于含少許洗潔精和吐溫20（Tween-20）的水中浸泡15 min，用流水沖洗1.5 h。在超凈工作臺(tái)上將種子夾入50 mL滅菌離心管內(nèi)，完成對(duì)種子的消毒。消毒時(shí)間梯度設(shè)置參考李岳等對(duì)野生郁金香種子的消毒方法[15]，具體見(jiàn)表1（S1～S6表示6種不同的消毒方式）。以75%乙醇渦旋30 s、結(jié)合0.1%HgCl23 min處理為例：向離心管中加入75%乙醇，于渦旋振蕩器（型號(hào)：WH-861）渦旋消毒30 s，倒出乙醇后，用無(wú)菌水漂洗3遍，再加入0.1%HgCl2溶液至浸沒(méi)種子，手按住離心管于渦旋振蕩器上渦旋3 min，最后用無(wú)菌水漂洗4遍，每遍不少于1 min。消毒完成后將種子接種于含30 g/L蔗糖的不同6-芐基腺嘌呤（6-benzylaminopurine,6-BA）及萘乙酸（1-naphthylacetic acid,NAA）配比的培養(yǎng)基中，基本培養(yǎng)基采用MS培養(yǎng)基，置于25℃或4℃冷柜中黑暗培養(yǎng)。培養(yǎng)基、培養(yǎng)溫度、種子預(yù)處理、貯藏條件等共構(gòu)成11種不同的處理，具體見(jiàn)表2（T1～T11表示11種不同的處理?xiàng)l件）。

表2 對(duì)種子的11種不同處理?xiàng)l件Table 2 Eleven different treatment conditions for the seeds

1.3 觀察與統(tǒng)計(jì)

每個(gè)處理接種10粒種子，5個(gè)重復(fù)。播種后每天觀察，參照《國(guó)際種子檢驗(yàn)規(guī)程》的鑒定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行發(fā)芽測(cè)定[16]，選擇以下指標(biāo)對(duì)種子的發(fā)芽狀況進(jìn)行分析：

萌發(fā)時(shí)滯：從發(fā)芽實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至第1粒種子萌發(fā)所需的時(shí)間，d；

萌發(fā)高峰期：從實(shí)驗(yàn)開(kāi)始至日發(fā)芽種子數(shù)達(dá)到最大時(shí)所需的時(shí)間，d；

發(fā)芽持續(xù)時(shí)間：從種子開(kāi)始萌發(fā)至最后1粒種子萌發(fā)所需的總時(shí)間，d；

萌發(fā)率/%＝發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)×100；

發(fā)芽勢(shì)/%＝日發(fā)芽種子數(shù)最大時(shí)的發(fā)芽種子數(shù)/供試種子數(shù)×100；

污染率/%＝污染種子數(shù)/種子總數(shù)×100；

芽長(zhǎng)：播種后30 d幼嫩胚伸出的長(zhǎng)度，mm。

30 d后將萌發(fā)的芽轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)室，在25℃、光照條件下進(jìn)行成苗培養(yǎng)，70 d（即播種后100 d）后觀察植株?duì)顟B(tài)，統(tǒng)計(jì)葉長(zhǎng)、根長(zhǎng)，并拍照記錄。隨后轉(zhuǎn)接至含60 g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行成球培養(yǎng)，30 d后觀察鱗莖形成情況，并拍照記錄。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用Excel 2007和SPSS 20.0軟件進(jìn)行方差分析和多因素比較分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒方式對(duì)種子萌發(fā)的影響

對(duì)未經(jīng)貯藏的種子以6種不同的消毒方式進(jìn)行處理，然后接種于MS培養(yǎng)基上，置于4℃冷柜中進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，具體處理方式見(jiàn)表1。萌發(fā)指標(biāo)見(jiàn)表3，30 d后的發(fā)芽情況如圖1所示。

表3 不同消毒方式下的種子萌發(fā)情況Table 3 Seed germination under different sterilization methods

如表3及圖1所示，鳶尾蒜種子萌發(fā)率較高，經(jīng)HgCl2和NaClO消毒處理的種子，其30 d萌發(fā)率均不低于94.0%。結(jié)合NaClO 5、10、15 min的消毒方式可有效控制污染率為0.0%，而結(jié)合HgCl23、5、8 min的消毒方式雖然可在萌發(fā)階段將污染率控制為0.0%，卻均在轉(zhuǎn)入25℃光照條件培養(yǎng)后的成苗階段出現(xiàn)不同程度的白色細(xì)菌污染（圖2）；在萌發(fā)指標(biāo)方面，NaClO消毒的種子（S4～S6）萌發(fā)高峰期顯著提前，萌發(fā)時(shí)滯和發(fā)芽持續(xù)時(shí)間明顯縮短，發(fā)芽整齊。其中，以S4處理的種子發(fā)芽勢(shì)最高，為52.0%，萌發(fā)時(shí)滯為13.8 d，發(fā)芽持續(xù)時(shí)間最短，為3.2 d，最早結(jié)束發(fā)芽過(guò)程；而HgCl2處理的種子（S1～S3）萌發(fā)時(shí)滯和發(fā)芽持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，發(fā)芽整齊度也明顯不及NaClO處理。觀察并統(tǒng)計(jì)播種后30 d芽長(zhǎng)情況可知，NaClO處理的種子芽長(zhǎng)均已超過(guò)9 mm；而HgCl2處理的種子芽長(zhǎng)較短，由于3種處理的發(fā)芽結(jié)束時(shí)間差異不大，芽長(zhǎng)卻出現(xiàn)顯著性差異，推測(cè)長(zhǎng)時(shí)間HgCl2處理對(duì)種子存在傷害，抑制了芽的伸長(zhǎng)。綜上所述，遵循節(jié)省消毒時(shí)間的原則，認(rèn)為S4是最優(yōu)消毒方式。

圖2 HgCl2消毒條件下的種子在成苗階段出現(xiàn)的細(xì)菌污染情況Fig.2 Bacterial contamination of seeds sterilized by HgCl2 in seedling stage

2.2 培養(yǎng)條件對(duì)種子萌發(fā)的影響

將于4℃條件下、貯藏2個(gè)月的種子無(wú)菌播種于MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L、1/2 MS、MS這3種不同的培養(yǎng)基上，分別置于25℃和4℃條件下進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，具體培養(yǎng)條件見(jiàn)表2，各項(xiàng)萌發(fā)指標(biāo)如表4所示，30 d后的發(fā)芽情況見(jiàn)圖3。

表4 不同培養(yǎng)條件下的種子萌發(fā)情況Table 4 Seed germination under different culture conditions

如表4及圖3所示，在4℃培養(yǎng)條件下，鳶尾蒜萌發(fā)率不低于94.0%，而在25℃培養(yǎng)條件下，鳶尾蒜發(fā)芽困難，30 d內(nèi)幾乎無(wú)種子發(fā)芽。后嘗試重新轉(zhuǎn)入4℃條件下培養(yǎng)，即可正常發(fā)芽?？梢?jiàn)，低溫是鳶尾蒜種子萌發(fā)的首要條件。

在4℃條件下，3種不同培養(yǎng)基中的種子萌發(fā)時(shí)滯、發(fā)芽率均差異不大。但MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基（T2）中的種子萌發(fā)高峰較MS培養(yǎng)基（T6）顯著延遲，發(fā)芽持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，30 d后的芽長(zhǎng)也顯著較短。由此推測(cè)，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的存在抑制了鳶尾蒜芽的快速伸長(zhǎng)。另外，1/2 MS培養(yǎng)基（T4）與MS培養(yǎng)基（T6）僅在萌發(fā)高峰上存在顯著差異，在1/2 MS培養(yǎng)基中種子萌發(fā)高峰延遲。

2.3 種子預(yù)處理及貯藏條件對(duì)種子萌發(fā)的影響

將在4℃及室溫（25℃）條件下貯藏2個(gè)月的種子分別置于800 mg/L的GA3溶液或清水中浸泡12 h，無(wú)菌播種于MS培養(yǎng)基上，置于4℃條件下進(jìn)行萌發(fā)培養(yǎng)，具體處理?xiàng)l件見(jiàn)表2，各項(xiàng)萌發(fā)指標(biāo)如表5所示。

由表5可知，無(wú)論是在4℃還是室溫條件下貯藏的種子，GA3浸種（T6、T8）后的萌發(fā)效果均略好于清水浸種（T7、T9），具體表現(xiàn)在對(duì)種子萌發(fā)時(shí)滯、萌發(fā)高峰、萌發(fā)率有不同程度的促進(jìn)作用上，但僅在4℃條件下貯藏的種子中，對(duì)其萌發(fā)高峰的提前構(gòu)成顯著差異。因此，在無(wú)菌播種體系下，800 g/L的GA3浸種對(duì)促進(jìn)種子的萌發(fā)具有一定效果，但并不顯著。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)4℃和室溫貯藏2個(gè)月的種子在各項(xiàng)萌發(fā)指標(biāo)上差異顯著（除萌發(fā)率外）。

為了進(jìn)一步探究貯藏條件對(duì)鳶尾蒜種子萌發(fā)的影響，比較了未貯藏、4℃貯藏2個(gè)月、室溫貯藏2個(gè)月、4℃貯藏6個(gè)月及室溫貯藏6個(gè)月的種子無(wú)菌萌發(fā)情況。具體處理?xiàng)l件見(jiàn)表2，各項(xiàng)萌發(fā)指標(biāo)如表6所示。

由表6可知，經(jīng)過(guò)2～6個(gè)月的4℃條件貯藏后，種子發(fā)芽持續(xù)時(shí)間延長(zhǎng)，發(fā)芽勢(shì)降低，但并未影響發(fā)芽率。而室溫貯藏后發(fā)芽效果則較差，貯藏2個(gè)月后，萌發(fā)時(shí)滯、萌發(fā)高峰顯著推遲，發(fā)芽持續(xù)時(shí)間大大延長(zhǎng)；貯藏6個(gè)月后，發(fā)芽率降至0.0%。由此可知，4℃貯藏是保持種子活力的有效貯藏方式，這也是有關(guān)鳶尾蒜種子有效貯藏方式的首次報(bào)道。

2.4 離體鱗莖的形成

圖3 培養(yǎng)條件對(duì)種子發(fā)芽的影響Fig.3 Effects of culture conditions on seed germination

播種30 d后，將T2、T4、T6萌發(fā)條件下的芽轉(zhuǎn)移到25℃光照條件下培養(yǎng)，這3種萌發(fā)條件的不同僅在于培養(yǎng)基，分別是MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L、1/2 MS、MS培養(yǎng)基。其中，T6中的芽轉(zhuǎn)移后的植株?duì)顟B(tài)變化見(jiàn)圖4。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鳶尾蒜原生鱗莖的形成與李娜等[17]描述的石蒜屬忽地笑原生鱗莖形成過(guò)程類(lèi)似。轉(zhuǎn)入25℃光照條件下培養(yǎng)10 d后，芽進(jìn)一步伸長(zhǎng)，頂端出現(xiàn)胚根生長(zhǎng)（圖4B）；20 d后，子葉基部與胚根可以明顯區(qū)分，并且首次觀察到第1片葉抽出（圖4C）；70 d后，植株發(fā)育完全，具根、莖、葉，但子葉基部尚未觀察到明顯的小鱗莖膨大（圖4D）。

進(jìn)一步觀察3種不同培養(yǎng)基中的植株的形態(tài)。如圖5所示，1/2 MS（T4）與MS（T6）培養(yǎng)基中的植株形態(tài)類(lèi)似，根葉發(fā)育完全但未見(jiàn)子葉基部明顯膨大，但在MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L（T2）培養(yǎng)基中，植株根變態(tài)明顯，子葉基部也略有膨大（典型單株見(jiàn)圖5E）。統(tǒng)計(jì)植株形態(tài)指標(biāo)（圖6）發(fā)現(xiàn)，該培養(yǎng)基（T2）中的植株轉(zhuǎn)移到25℃光照條件下培養(yǎng)后，根由于變態(tài)而伸長(zhǎng)困難，葉片長(zhǎng)度則顯著大于T4和T6?？梢?jiàn)，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的添加雖然影響了鳶尾蒜根的發(fā)育，卻能夠促進(jìn)葉片的抽出與伸長(zhǎng)，對(duì)鱗莖的膨大也起到一定程度的促進(jìn)作用。綜上表明，在這3種培養(yǎng)基中，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L是對(duì)鳶尾蒜發(fā)芽后葉及鱗莖發(fā)育較好的培養(yǎng)基。

播種100 d后，將3種培養(yǎng)基中的植株切除冗余根及葉片，轉(zhuǎn)移到含60 g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基中進(jìn)行成球培養(yǎng)，轉(zhuǎn)接30 d后鱗莖形成情況見(jiàn)圖6?？梢钥闯?，MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接后可以形成明顯膨大的鱗莖（圖7A）；1/2 MS培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接后子葉基部基本無(wú)膨大（圖7B）；而MS培養(yǎng)基中的植株轉(zhuǎn)接后也可形成鱗莖，但膨大不明顯（圖7C）。由此推測(cè)，種子萌發(fā)及成苗條件對(duì)后續(xù)獲得鳶尾蒜離體鱗莖具有持續(xù)影響。鳶尾蒜種子經(jīng)MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L培養(yǎng)基（T2）萌發(fā)和成苗培養(yǎng)后，最有利于鱗莖的形成。

表5 GA3與清水浸泡處理下的種子萌發(fā)情況Table 5 Seed germination under GA3or water soaking treatment

表6 不同貯藏條件下的種子萌發(fā)情況Table 6 Seed germination under different storage conditions

圖4 轉(zhuǎn)入25℃光照條件下培養(yǎng)的植株?duì)顟B(tài)變化Fig.4 Plant state changes after transferring to 25℃in daylight

綜上所述，鳶尾蒜無(wú)菌萌發(fā)及鱗莖形成的具體方案可歸納為：自然陰干或4℃貯藏的種子經(jīng)800 mg/L的GA3浸種12 h，接種時(shí)用75%乙醇渦旋消毒30 s并結(jié)合2%的NaClO渦旋消毒5 min，接種在含30 g/L蔗糖的MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L培養(yǎng)基中，置于4℃黑暗條件下培養(yǎng)30 d，獲得長(zhǎng)勢(shì)較為一致的5 mm左右的芽；隨后轉(zhuǎn)移至25℃光照條件下培養(yǎng)70 d，獲得具有根、莖、葉的完整植株；最后轉(zhuǎn)移到含60 g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基中，可獲得膨大的鱗莖。

圖5 轉(zhuǎn)入25℃光照條件下培養(yǎng)70 d后的植株?duì)顟B(tài)Fig.5 Plant state after transfer to 25℃in daylight for 70 d

3 討論

圖6 100 d后不同培養(yǎng)基中植株的形態(tài)指標(biāo)Fig.6 Morphological indexes of plants in different mediums after 100 d

圖7 將植株轉(zhuǎn)入MS培養(yǎng)基30 d后的鱗莖狀態(tài)Fig.7 Bulblet status after transferring plants to MS medium for 30 d

鳶尾蒜在我國(guó)僅新疆有分布，是具有重要觀賞及藥用價(jià)值并且亟須保護(hù)的植物種質(zhì)資源。植物種質(zhì)資源保存的方法大體可分為2大類(lèi)：一類(lèi)是原境保存，為此建立自然保護(hù)區(qū)、天然公園或就地保護(hù)處于危險(xiǎn)或受威脅的植物；另一類(lèi)是異境保存，為此需要建立各種基因庫(kù)，離體基因庫(kù)就是其中一種[18]。本實(shí)驗(yàn)成功建立了鳶尾蒜無(wú)菌播種體系，獲得了離體鱗莖，實(shí)現(xiàn)了鳶尾蒜在江南地區(qū)的異地保存，對(duì)其資源保護(hù)和開(kāi)發(fā)利用都具有重要意義，也為利用我國(guó)重要野生資源進(jìn)行種球高效擴(kuò)繁和品種選育提供了新途徑。

本實(shí)驗(yàn)采用NaClO和HgCl2消毒，均獲得了較好的效果，其中，NaClO消毒5、10、15 min均可有效控制污染率為0.0%，并且使萌發(fā)高峰期明顯提前，萌發(fā)時(shí)滯和發(fā)芽持續(xù)時(shí)間顯著縮短。本研究認(rèn)為，這與NaClO具有腐蝕軟化種皮的作用有關(guān)，而種皮破損有利于鳶尾蒜種子的萌發(fā)；而HgCl2毒性相對(duì)較高，消毒時(shí)間太短容易導(dǎo)致后期細(xì)菌污染，延長(zhǎng)消毒時(shí)間則導(dǎo)致芽的伸長(zhǎng)受到影響。謝雙全[5]對(duì)鳶尾蒜種子的研究表明，在4℃條件下，采用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽法，鳶尾蒜萌發(fā)時(shí)間為60 d，而在刺破終孔端種皮或800 mg/LGA3的處理下，可縮短萌發(fā)時(shí)間至35 d。而在本實(shí)驗(yàn)建立的無(wú)菌播種體系中，篩選得到最佳消毒方式為75%乙醇渦旋消毒30 s并結(jié)合2%NaClO 5 min，在該條件下，萌發(fā)時(shí)滯為13.8 d，發(fā)芽持續(xù)時(shí)間3.2 d，17 d即可結(jié)束發(fā)芽過(guò)程，其萌發(fā)時(shí)間縮短為標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽法的一半。由此可見(jiàn)，無(wú)菌播種可有效縮短發(fā)芽進(jìn)程，相比自然萌發(fā)獲得種質(zhì)資源具有明顯的優(yōu)越性。

目前，關(guān)于鳶尾蒜屬種子生物學(xué)的研究尚少。田琳等[8-9]在準(zhǔn)噶爾鳶尾蒜中的研究表明，在室溫（18～23℃）條件下，5周后發(fā)芽率為0，認(rèn)為低溫是準(zhǔn)噶爾鳶尾蒜種子萌發(fā)的首要條件；謝雙全[5]在鳶尾蒜種子的研究中同樣認(rèn)為低溫具有重要作用，但并未進(jìn)行室溫下的種子萌發(fā)實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)嘗試在4℃、25℃條件下分別進(jìn)行鳶尾蒜種子無(wú)菌萌發(fā)，結(jié)果表明，在4℃條件下種子萌發(fā)率均在94.0%以上，而在25℃條件下幾乎無(wú)種子發(fā)芽。由此證實(shí)，低溫是鳶尾蒜種子萌發(fā)的首要條件。種皮的抑制作用在鳶尾蒜屬種子的萌發(fā)過(guò)程中被認(rèn)為是僅次于低溫的重要因素。謝雙全[5]在鳶尾蒜種子的研究中認(rèn)為，刺破終孔端種皮可大大提高種子萌發(fā)率并縮短萌發(fā)周期。田琳等[8-9]在準(zhǔn)噶爾鳶尾蒜的研究中則認(rèn)為，800 mg/L GA3浸種處理可有效提高萌發(fā)率，但在刺皮條件下，增加GA3處理的加成作用則不明顯。本實(shí)驗(yàn)以清水為對(duì)照，對(duì)鳶尾蒜種子進(jìn)行800 mg/L GA3浸種處理，但效果不明顯。本研究認(rèn)為，在無(wú)菌播種體系中采用的NaClO消毒方式導(dǎo)致種皮在一定程度上破損，其作用類(lèi)似于刺破種皮，使得GA3處理并無(wú)顯著作用。實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，貯藏條件對(duì)種子的發(fā)芽特性具有重要影響。自然干燥的種子經(jīng)4℃貯藏6個(gè)月后仍能保持種子發(fā)芽力，且并未影響發(fā)芽率，而室溫貯藏2個(gè)月后就導(dǎo)致種子萌發(fā)周期大大延長(zhǎng)，貯藏6個(gè)月后萌發(fā)率為0。目前，在鳶尾蒜屬中，這是關(guān)于有效貯藏方式的首次報(bào)道，也為鳶尾蒜屬種子的保存提供了參考。

在球根植物無(wú)菌播種中，除了溫度、光照等環(huán)境條件，培養(yǎng)基中大量元素含量及外源激素配比都會(huì)對(duì)無(wú)菌萌發(fā)及鱗莖形成產(chǎn)生重要影響。例如，在石蒜屬中，姚麗娟等[19]認(rèn)為換錦花種子無(wú)菌萌發(fā)的最佳培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L。彭俊翰[20]在換錦花胚培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，在MS全量培養(yǎng)基中換錦花種子發(fā)芽與生長(zhǎng)正常，而在減量大量元素的培養(yǎng)基中，鱗莖發(fā)育則明顯較差。在郁金香屬中，王彩霞等[21]研究表明，在培養(yǎng)基中添加植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑雖然不能使萌發(fā)率提高，但能促使雜交郁金香種子的畸形萌芽長(zhǎng)出鱗莖并增殖。本實(shí)驗(yàn)首創(chuàng)性地探究了不同培養(yǎng)基對(duì)鳶尾蒜種子無(wú)菌萌發(fā)及離體鱗莖形成的影響，結(jié)果表明：在添加了6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L的MS培養(yǎng)基中，30 d后芽長(zhǎng)顯著短于MS和1/2 MS培養(yǎng)基中的，但在轉(zhuǎn)入25℃光照條件下進(jìn)行成苗培養(yǎng)后，卻能夠促進(jìn)葉片的伸長(zhǎng)及子葉的膨大，最終在成球階段促使鱗莖的形成?？梢?jiàn)，植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑對(duì)鳶尾蒜離體鱗莖的獲得具有重要意義。在本實(shí)驗(yàn)中，鳶尾蒜經(jīng)MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L的培養(yǎng)基無(wú)菌萌發(fā)后，最終能形成明顯膨大的鱗莖，但膨大比例不高，因此在后續(xù)研究中，可考慮調(diào)整成球培養(yǎng)基中外源激素的配比及溫度、光照等環(huán)境條件以促進(jìn)鱗莖的膨大。

4 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)成功建立了鳶尾蒜無(wú)菌播種體系，獲得了離體鱗莖，實(shí)現(xiàn)了鳶尾蒜在江南地區(qū)的異地保存。75%乙醇渦旋消毒30 s并結(jié)合2%NaClO 5 min是鳶尾蒜種子的最佳消毒方式，采用該消毒方式，篩選得到最佳培養(yǎng)條件，認(rèn)為4℃低溫培養(yǎng)是種子萌發(fā)的首要條件，經(jīng)MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L+蔗糖30 g/L培養(yǎng)基無(wú)菌萌發(fā)的芽轉(zhuǎn)入25℃光照條件下，再轉(zhuǎn)接至含60 g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上，可形成膨大的鱗莖。另外，實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)4℃貯藏6個(gè)月可以基本保持種子發(fā)芽力，室溫貯藏6個(gè)月后則無(wú)種子發(fā)芽，認(rèn)為4℃冷柜貯藏是保持鳶尾蒜種子發(fā)芽力的有效貯藏方式。

致謝本試驗(yàn)的鳶尾蒜種子為新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)譚敦炎教授贈(zèng)予，謹(jǐn)致謝意！