基于HPLC法控制祛屑息風(fēng)膠囊質(zhì)量的研究

李忻，汪旭，代恩勇，孟慶妍，朱昆※

（1.吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院藥學(xué)部，長春 130021；2.長春市中心醫(yī)院制劑室，長春 130024；3.吉林省食品藥品檢驗所，長春 130033）

祛屑息風(fēng)膠囊為院內(nèi)制劑，處方由蛇床子、紅花、荊芥、防風(fēng)、苦參、白鮮皮、百部、地膚子等中藥材加工制備而成，具有除風(fēng)滲濕、活血化瘀之功效，臨床主要用于治療神經(jīng)性皮炎及銀屑病。蛇床子為該方劑中的君藥，蛇床子素為蛇床子主要有效成分之一，具有抗癌、抗氧化、抗炎及神經(jīng)修復(fù)等藥理作用[1-4]。本研究采用高效液相色譜法（HPLC）測定祛屑息風(fēng)膠囊中主要有效成分蛇床子素的含量，擬通過檢測蛇床子素的含量控制該院內(nèi)制劑的產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-2010AHT高效液相色譜儀（日本島津公司）；KQ3200E型超聲波處理器（昆山超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

祛屑息風(fēng)膠囊（批號 20180071、20180072、20180073，長春市中心醫(yī)院制劑室）；蛇床子素（批號110822-201710，中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，Grace公司）；其他所用試劑均為分析純；水為純凈水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5-6]

2.2 對照品溶液的制備

2.3 供試品溶液的制備

稱取適量祛屑息風(fēng)膠囊內(nèi)容物，研磨成細粉末，用3號篩濾過后，精密稱取樣品1.0 g，置入到50 mL的容量瓶中，加入95%乙醇定容至50mL，密閉，稱重，超聲波振蕩20min后，取出放冷，再對其稱重，用95%乙醇溶液彌補溶液耗損，振蕩搖勻，濾過溶液，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照品溶液的制備

按處方中藥材比例，取除蛇床子外的其他藥材，按工藝流程制備成不含蛇床子素的陰性對照品溶液。

2.5 專屬性試驗

按照“2.1”項下色譜條件，分別取對照品溶液、陰性對照品溶液以及供試品溶液，分別進樣，得相關(guān)HPLC色譜圖（圖1）。結(jié)果表明，蛇床子素出峰時間約11.75min，在這個時間段，陰性對照品溶液未見明顯雜質(zhì)峰干擾，即祛屑息風(fēng)膠囊組方中的其他成分在該檢測條件下對蛇床子素含量測定不會產(chǎn)生影響，專屬性較強。

圖1 蛇床子素對照品（a）、供試品（b）和陰性樣品（c）的液相色譜圖Fig.1 Liquid chromatogram of osthole reference substance(a),test sample(b)and negative sample(c)

2.6 線性范圍考察

精密稱取適量的蛇床子素對照品，用95%乙醇溶液配制成0.045 0 mg/mL的溶液，分別精密吸取該對照品溶液2、6、10、14、25、30L，分別注入液相色譜儀，測定對照品蛇床子素的色譜峰面積，以進樣量為橫坐標、峰面積積分值為縱坐標繪圖，進行線性回歸，得到回歸方程為y=4 106x 1 576.1（r=0.999 4），表明蛇床子素進樣量在0.089 0～0.977 1g范圍內(nèi)蛇床子素色譜峰面積與進樣量呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.7 精密度考察

2.8 穩(wěn)定性試驗

取同一批供試品（批號20180071），按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24h，按照“2.1”項下色譜條件測定蛇床子素色譜峰面積，以考察測定環(huán)境下供試品溶液的穩(wěn)定性。結(jié)果，RSD為0.81%（n=6），表明供試品溶液在該環(huán)境下24 h內(nèi)的穩(wěn)定性達到測定要求。

2.9 重復(fù)性試驗

取祛屑息風(fēng)膠囊6份（批號20180071），按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜峰面積，得平均含量為1.012mg/g，RSD為0.98%，表明該方法測量結(jié)果的偏差小，重復(fù)性達到測定要求。

2.10 加樣回收率試驗

取已知含量樣品（批號20180071，含量為1.012mg/g）6份，再分別加入蛇床子素對照品，按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件進樣測定，測定樣品中蛇床子素的含量，計算得出平均回收率為99.82%，RSD為0.93%。

2.11 祛屑息風(fēng)膠囊中蛇床子素的含量測定

按照“2.3”項下方法，取3個批次（20180071、20180072、20180073）的祛屑息風(fēng)膠囊樣品，制備3批供試品溶液，按照“2.1”項下色譜條件，分別對3個批次的供試品溶液蛇床子素含量進行測定。結(jié)果，3個批次的供試品溶液中蛇床子素含量分別為 1.012、1.016、1.009 mg/g。

3 討論

本研究在選擇流動相時，曾經(jīng)考察水-乙腈（57∶43）、（35∶65）的不同配比，結(jié)果，蛇床子素與其他色譜峰的分離度較差，無法滿足試驗要求[5-6]。通過反復(fù)調(diào)整有機相與水相的組合，最終確定水-乙腈（40∶60）為流動相，在該試驗條件下，蛇床子素的色譜峰與樣品其他成分的分離度均大于1.5，且無拖尾現(xiàn)象。

綜上所述，通過高效液相色譜法，可以簡便、快捷地確定祛屑息風(fēng)膠囊中蛇床子素的含量，這對于控制該制劑的質(zhì)量是一種較好的選擇，為建立其質(zhì)量標準提供依據(jù)。