內(nèi)蒙地區(qū)罕見cis-AB01/ O01血清學(xué)與基因分型研究——附1例報(bào)告

王春海，王文梅，黃華亮

(1.內(nèi)蒙古包鋼醫(yī)院輸血科,內(nèi)蒙古包頭 014010；2.內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科,內(nèi)蒙古包頭 014010)

ABO血型系統(tǒng)抗原的基因位于第9條染色體上，基因名為ABO,其DNA鏈長為19.5 kb，是被人類發(fā)現(xiàn)的第1個(gè)血型系統(tǒng)[1]。而ABO血型亞型是由ABO基因變異形成，A基因變異形成A亞型，B基因變異形成B亞型，O基因變異形成新的O等位基因，ABO亞型包括A3、Ax、Ael、Aw、Am、B3、Bx、Bel、Bw、cisAB、B(A)。通常情況下，AB型個(gè)體一條染色體攜帶A基因，另一條染色體攜帶B基因，稱為反式AB型。但順式AB型(cisAB型)是一種獨(dú)特的ABO表型，A基因和B基因位于同一條染色體上遺傳給子代[2]。這種特殊遺傳方式常常造成ABO正反定型不符，降低了輸血的有效性和安全性，因此，正確鑒定cisAB血型是保證安全輸血的前提[3]。

現(xiàn)將本院1例cisAB血型患者的血型血清學(xué)與基因分析結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者，男，61歲，右髖骨疼痛，活動(dòng)受限2年，擬行擇期手術(shù)，既往有輸血史，常規(guī)備血，Ortho AutoVuet全自動(dòng)血型及配血分析系統(tǒng)鑒定結(jié)果：正定型AB，反定型A，正反定型不符，進(jìn)一步作血型血清學(xué)檢查，同時(shí)重新采集患者樣本，外送江蘇中濟(jì)萬泰生物醫(yī)藥有限公司諾貝爾獎(jiǎng)研究院做ABO基因分型及測(cè)序(樣本號(hào)W126)。

1.2儀器與試劑 Ortho AutoVuet全自動(dòng)血型及配血分析儀、臺(tái)灣貝索離心機(jī)、水浴箱； 抗-A、抗-B、RhD(IgM)血型定型試劑、篩選紅細(xì)胞、抗-H試劑、抗-A1試劑，上海血液醫(yī)藥生物有限公司；ABO反定型，長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司；抗A,B試劑 法國；ABO基因分型試劑盒：人類紅細(xì)胞ABO血型基因分型試劑盒(熒光PCR)批號(hào)20180226，江蘇中濟(jì)萬泰生物醫(yī)藥有限公司，以上所有試劑均在效期內(nèi)使用。

1.3方法

1.3.1ABO血型血清學(xué)試驗(yàn) ABO血型鑒定、抗-H測(cè)定、抗-AB、抗體篩選、唾液試驗(yàn)等血型血清學(xué)檢測(cè),均嚴(yán)格按照文獻(xiàn)[4-5]操作。

1.3.2ABO基因分型及測(cè)序 由江蘇中濟(jì)萬泰生物醫(yī)藥有限公司諾貝爾獎(jiǎng)研究院鑒定。

2 結(jié) 果

2.1ABO血型結(jié)果 該例患者正定型AB型(B抗原表達(dá)強(qiáng)度較弱，呈混合視野),反定型為A型，正反定型不符，初判定為AB亞型產(chǎn)生了抗-B或B抗原減弱伴同種抗體；同時(shí)正定型與抗-A1為0、與抗-AB為++++、與抗-H為+++，反定型與B細(xì)胞為+，說明該抗體可能為抗-B抗體，結(jié)合病史，疑似cisAB型，需做基因檢測(cè)進(jìn)行確定。結(jié)果見表1。

表1 ABO血型血清學(xué)鑒定結(jié)果

注:mf為混合外觀,0為無反應(yīng)性

2.2抗體篩選試驗(yàn) 鹽水試管法結(jié)果呈陰性，抗人球蛋白法結(jié)果呈陰性；反定型3個(gè)獻(xiàn)血者B細(xì)胞均為+，3個(gè)獻(xiàn)血者O細(xì)胞均為陰性。兩個(gè)試驗(yàn)結(jié)合起來分析可以看出患者抗體并非ABO以外的同種抗體，而是不規(guī)則抗-B。

2.3唾液試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果顯示為分泌型，唾液中含有A、H物質(zhì)和弱分泌B物質(zhì)。

2.4ABO基因分型結(jié)果 該例患者標(biāo)本(W126)的熒光PCR分型，Type A出現(xiàn)陽性條判斷為A,非A205;Type OT、Type O01出現(xiàn)陽性條判斷為O01(見圖1)。ABO基因分型結(jié)果為：A/O01。

注：藍(lán)色框框?yàn)閮?nèi)參，紅色框框?yàn)殛栃詶l

圖1基因分型結(jié)果

2.5ABO基因測(cè)序結(jié)果 該例患者標(biāo)本(W126)的基因測(cè)序結(jié)果在外顯子6的297A/A未有突變，261處缺失G，形成261前面連續(xù)出現(xiàn)套峰，這兩點(diǎn)屬于O01基因特征性序列。而在外顯子7又出現(xiàn)467C>T、803G>C兩處突變,符合cis-AB01型基因特征。依據(jù)測(cè)序結(jié)果推出該例標(biāo)本的基因型為cisAB01/O01。ABO基因全測(cè)序結(jié)果見圖2、3。

圖2 ABO基因全測(cè)序結(jié)果

圖3 基因突變點(diǎn)截圖

2.6最終判定結(jié)果 綜合血清學(xué)和基因檢測(cè)可以確定為cis-AB，基因分型符合cis-AB01/O01。

3 討 論

cisAB是一種極為罕見的亞型，在人群中出現(xiàn)的概率非常低，大約是1/580 000～1/170 000。有文獻(xiàn)報(bào)告，一般在1 000 000例日本人中找到14例，比例為0.0014%，而在112 710例受檢AB型中，比例為0.012%[6]。1965年YAMAGUCHI等[7]報(bào)道A2B3血型，該家族成員的A2和B3基因在同一染色體上。當(dāng)一單倍型的A糖苷轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)生一點(diǎn)或多點(diǎn)突變時(shí)或者B糖苷轉(zhuǎn)移酶基因發(fā)生一點(diǎn)或多點(diǎn)突變時(shí)，造成該基因編碼的糖苷轉(zhuǎn)移酶同時(shí)催化兩種底物分別加到L-巖藻糖上形成A和B抗原，形成的AB型叫cisAB[8]，出現(xiàn)cisAB有2種可能：一是基因的不等交換，使得一條染色體上的A基因與另一條染色體上的B基因組成了新的cisAB基因，并且攜帶正常的遺傳信息；另一種情況是A基因或B基因發(fā)生突變，使基因編碼產(chǎn)物同時(shí)具有A和B抗原。1990年，ABO基因被克隆和測(cè)序后，cisAB血型的分子遺傳模式逐步被人類研究并揭示。造成cisAB表現(xiàn)型的主要原因和A、B基因7號(hào)外顯子的點(diǎn)突變有關(guān)[2]。

到目前為止，cisAB等位基因一共有8型，分別為01、02、03、04、05、06、07、08型，還有一種cisAB 01var型[9]。cisAB01主要特征是803G>C、467C>T兩點(diǎn)突變[10]。該例患者在外顯子6的297A/A未有突變，261處缺失G，形成261前面連續(xù)出現(xiàn)套峰，這兩點(diǎn)屬于O01基因特征性序列。而在外顯子7又出現(xiàn)467C>T、803G>C兩處突變,符合cis-AB01型基因特征[9]。外顯子序列符合cisAB01/O01雜合特征，即cisAB01與O01雜合，基因分型及測(cè)序應(yīng)為cis-AB01/O01。cisAB01/O01基因型占cisAB血型基因型總數(shù)的66.7%[1]。cisAB/O基因型，一條是單倍型AB型，另一條是單倍型O型，形成cisAB血型的血清學(xué)結(jié)果具有一定的特點(diǎn)。當(dāng)cisAB基因與O基因雜合時(shí)，血清學(xué)常表現(xiàn)為A2B3：(1)cisAB細(xì)胞上A抗原雖然經(jīng)常被認(rèn)為是A2,但A抗原強(qiáng)度強(qiáng)于A2B,弱于A1B；(2)cisAB細(xì)胞幾乎無例外地表達(dá)弱的B抗原性，類同B3表型；與免疫性A型血清反應(yīng)較強(qiáng)，與自然發(fā)生的血清抗B弱凝集或不凝集；(3)cisAB細(xì)胞有很強(qiáng)的H抗原性，與O細(xì)胞反應(yīng)強(qiáng)度相當(dāng)，達(dá)到+++的強(qiáng)度；(4)cisAB人血清中總是有弱抗-B存在[5]。血型血清學(xué)試驗(yàn)中：正定型抗-A凝集(++++)，抗-A1不凝集(0)，這是A2抗原的表現(xiàn)；同時(shí)抗-B弱反應(yīng),并呈混合視野(mf)；反定型中有較弱的抗-B(+)，依據(jù)抗體篩選試驗(yàn)、反定型3個(gè)獻(xiàn)血者B細(xì)胞和3個(gè)獻(xiàn)血者O細(xì)胞結(jié)果判斷，該抗體并非ABO以外的同種抗體，而是不規(guī)則抗-B，抗-H明顯比正常B型增強(qiáng),這是B3抗原的表現(xiàn)。該患者標(biāo)本的血清學(xué)特征具有A2B3的特征[5]。

cisAB血清學(xué)特征A2B3必須與下列2種情況相區(qū)別，(1)與ABx或AxB區(qū)別[11]：ABx或AxB常常是因cisAB等位基因與另一正常A或B等位基因雜合時(shí)，有抗原劑量效應(yīng)，而抗-H不增強(qiáng)或較弱，與抗-H反應(yīng)凝集強(qiáng)度一般弱于O細(xì)胞與抗-H的反應(yīng)程度[12-13]；(2)與獲得性B區(qū)別：獲得性B與疾病有關(guān)，只表現(xiàn)在A型紅細(xì)胞上，在血型鑒定時(shí)，出現(xiàn)類似于AB型的反應(yīng)格局。獲得性B抗原的個(gè)體血液中只含有抗-B抗體，但不與獲得性B細(xì)胞反應(yīng)，獲得性B抗原可能減弱A型抗原的抗原性，因此，獲得性B消失后，紅細(xì)胞A抗原性增強(qiáng)[5]。

由于各種因素的影響，根據(jù)血清學(xué)表現(xiàn)，cisAB血型很難被確定，因?yàn)槿蹩笲的存在會(huì)導(dǎo)致ABO正反定型不符，極易導(dǎo)致血型錯(cuò)判。在臨床檢測(cè)過程中往往表現(xiàn)為血型定型和交叉配血困難，輸血時(shí)，配血不相合，可引起溶血性輸血反應(yīng)，對(duì)于該例患者，其血清中有抗-B抗體，故不能輸注B型紅細(xì)胞，以輸注O型洗滌紅細(xì)胞和AB型血漿為佳，或自體輸血。考慮到該例患者輸血適應(yīng)癥完全符合貯存式自體輸血，與手術(shù)前3天采集自體血400 mL,術(shù)中進(jìn)行回輸，術(shù)后無不良反應(yīng)。

據(jù)不完全統(tǒng)計(jì)，該例患者cis-AB01/O01亞型屬內(nèi)蒙地區(qū)首次報(bào)道。鑒于該患者因家庭原因未同意調(diào)查其遺傳情況，故未做家系調(diào)查。

綜上所述，依據(jù)cisAB的血清學(xué)反應(yīng)格局并不能正確確定cisAB亞型，必須靠分子生物學(xué)技術(shù)(如ABO基因分型)才能區(qū)別，條件允許情況下可以做家系調(diào)查，只有準(zhǔn)確無誤地鑒定cisAB血型，才能做到安全輸血，防治輸血不良反應(yīng)的發(fā)生。