吊蘭屬植物Chlorophytum tuberosum的化學(xué)成分及其對血小板聚集的作用*

謝 燕 ，付愛珍 ，李 楠 ，張 晗 ，王曉明 ，張 鵬

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)天津市現(xiàn)代中藥重點實驗室，天津 301617；2.棗莊礦業(yè)集團(tuán)中心醫(yī)院，棗莊 277000）

Chlorophytum tuberosum為百合科吊蘭屬一年生草本植物，花期或結(jié)果期間采集全草，在印度和非洲均作傳統(tǒng)藥用，具有抗氧化、增強(qiáng)機(jī)體免疫力、促進(jìn)性欲、治療痢疾和催乳等作用[1-2]。對該植物的現(xiàn)代藥理及化學(xué)成分研究尚未見報道，其同屬植物在中國共有5種作為藥用植物[3]，民間用于清熱解毒、消腫止痛，主要藥理活性為鎮(zhèn)痛抗炎[4]、抗腫瘤[5]等。從吊蘭屬植物中分離鑒定的主要活性成分為甾體皂苷類化合物，是多種心腦血管中成藥如地奧心血康、心腦舒通的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。不同結(jié)構(gòu)的甾體皂苷類化合物對血小板聚集有雙向調(diào)節(jié)作用，如蒺藜總皂苷有顯著的抗血小板聚集作用[6-8]，而重樓總皂苷則具有止血作用，在體外能直接誘導(dǎo)血小板聚集[9-12]。為了闡明Chlorophytum tuberosum的化學(xué)成分和藥理作用，本文對該植物50%乙醇提取物的化學(xué)成分進(jìn)行分離和結(jié)構(gòu)鑒定，并測試了其不同極性洗脫物及化合物對血小板聚集的影響。

1 儀器材料

傅里葉變換核磁共振波譜儀（瑞士Bruker公司，AVIII型）；Agilent 1260制備型高效液相色譜儀（美國Agilent科技有限公司）；分析型高效液相色譜儀（美國Agilent科技有限公司）；超高效液相色譜儀（美國 Waters）；分析色譜柱（美國 Agilent，5 μm，4.6 nm×150 nm）；半制備型色譜柱（日本YMCPack，10 μm×250 mm，5 μm）；制備型色譜柱（美國Agilent，21.2 mm×250 mm，7 μm）；Sephadex LH-20（GE Healthcare公司）；柱色譜和薄層層析色譜硅膠（青島海洋化工廠）；D101大孔吸附樹脂（天津海光化工有限公司）；Flexstation 3酶標(biāo)儀（Molecular Device）；96 孔酶標(biāo)板。

色譜乙腈和甲醇（天津市大茂化學(xué)試劑生產(chǎn)廠）；氘代試劑（美國 Cambrige Isotope Laboratories，Inc）；阿司匹林和ADP（美國Sigma-Aldrich公司）；其他所用試劑均為分析純。

緩沖溶液（pH 7.4）配制：NaCl（130 mmol/L）、檸檬酸鈉（10 mmol/L）、NaHCO3（9 mmol/L）、葡萄糖（6 mmol/L）、MgCl2（9 mmol/L）、KH2PO4（0.81 mmol/L）、Tris-base（10 mmol/L）。

Chlorophytum tuberosum全草由本校國際學(xué)院非洲留學(xué)生Abdulai Jawo Bah提供并經(jīng)天津中醫(yī)藥大學(xué)吳紅華老師鑒定為百合科吊蘭屬植物Chlorophytum tuberosum。

2 提取與分離

Chlorophytum tuberosum全草1.5 kg，用8倍量50%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，減壓濃縮至無醇味，濃縮液加蒸餾水稀釋，過濾，經(jīng)D101大孔吸附樹脂柱分離，依次用H2O和30%、50%、70%、95% 乙醇洗脫（v/v），減壓濃縮，得到 P 1～5共5個洗脫物。P 3（20 g）經(jīng)ODS中低壓柱色譜（50%乙腈-水洗脫）和LH-20凝膠柱后經(jīng)薄層檢識合并成分相同的流份，再經(jīng)薄層制備得到化合物9（17 mg）；P 4（2.7 g）經(jīng) ODS 中低壓柱色譜（乙腈-水梯度洗脫）得3個組分Fr 4.1～Fr 4.3，將Fr 4.1經(jīng)硅膠柱色譜分離（CH2Cl2∶MeOH∶H2O=6.2∶2.8∶1），得化合物 8（8 mg）和 4（7 mg），F(xiàn)r 4.2 經(jīng)反向高效制備液相和硅膠柱色譜（CH2Cl2∶MeOH∶H2O=6.2∶2.8∶1），薄層色譜檢識后得化合物 5（20 mg）、6（10 mg）和 7（10 mg），F(xiàn)r 4.3經(jīng)硅膠柱色譜，石油醚-乙酸乙酯梯度洗脫得化合物 11（3 mg）；P 5（1.4 g）經(jīng)反復(fù)凝膠和硅膠柱色譜后，得組分Fr 5.1和Fr 5.2，F(xiàn)r 5.1經(jīng)反向高效制備液相，乙腈-水梯度洗脫，得到化合物2（3 mg）、1（7 mg）和 3（6 mg），F(xiàn)r 5.2 經(jīng)硅膠柱色譜石油醚-乙酸乙酯洗脫，得化合物10（4 mg）。

稱取化合物1 mg溶于10 mL三氟乙酸水溶液（2 mol/L）中，95℃水浴回流3 h，室溫放置冷卻，用二氯甲烷10 mL萃取3次，合并后回收二氯甲烷，得到化合物苷元部分，與相應(yīng)的苷元共薄層，確定苷元的結(jié)構(gòu)；水層回收后，用18 cm圓形濾紙進(jìn)行紙層析實驗，以標(biāo)準(zhǔn)糖對照確定糖的種類。展開劑為正丁醇-冰乙酸-水（4∶1∶5），顯色劑為苯胺-二苯胺-磷酸。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物4：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯黃色，A試劑顯黃色。ESI-MS顯示分子中含有4個六碳糖m/z：1 077.67[M-H]-，1 079.51[M+H]+，431.16[M+H-162-162-162-162]+.1H-NMR （C5D5N，400 MHz）δ 0.64（3H，s），1.06（3H，s），1.06（3H，d，J=4.4 Hz），1.36（3H，d，J=6.8 Hz），2.73（1H，t，J=6.8 Hz），3.36（1H，br d，J=10.8 Hz），2.21 （1H，dd，J=14.4，4.4 Hz），2.35（1H，t，J=13.6 Hz），4.86（1H，J=7.6 Hz），5.15（1H，J=8 Hz），5.30（1H，J=8 Hz），5.59（1H，J=7.6 Hz）。13CNMR（C5D5N，100 MHz）δ 36.5（C-1），29.6（C-2），76.9（C-3），34.5（C-4），44.3（C-5），28.5（C-6），31.3（C-7），34.2（C-8），55.4（C-9），36.2（C-10），37.9（C-11），212.7（C-12），55.2（C-13），55.8（C-14），31.6（C-15），79.7（C-16），54.1（C-17），16.0（C-18），11.6（C-19），43.0（C-20），13.7（C-21），109.7（C-22），27.4（C-23），26.3（C-24），26.1（C-25），65.1（C-26），16.2（C-27），以上苷元數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道的新?？略碥赵獢?shù)據(jù)一致，并經(jīng)酸水解實驗證明，鑒定苷元為新?？略碥赵?。酸水解實驗證明了糖鏈中糖的組成為β-D-葡萄糖與β-D-半乳糖，糖鏈核磁數(shù)據(jù)為：Gal 102.3（C-1′），73.1（C-2′），75.5（C-3′），80.2（C-4′），75.2（C-5′），60.5（C-6′），Glc 105.0（C-1″），81.4（C-2″），88.5（C-3″），70.8（C-4″），77.5（C-5″），63.0（C-6″），Glc 104.8（C-1″′），76.1（C-2″′），77.8（C-3″′），70.9（C-4″′），78.6（C-5″′），62.2（C-6″′），Glc 104.5（C-1″″），75.2（C-2″″），78.6（C-3″″），71.5（C-4″″），78.6（C-5″″），62.2（C-6″″），根據(jù) HMBC 譜遠(yuǎn)程相關(guān)（見圖1），結(jié)合1H-NMR和13C-NMR數(shù)據(jù)，推測了糖鏈部分的連接位點，其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[9]糖鏈部分的數(shù)據(jù)一致。綜合以上數(shù)據(jù)，鑒定化合物4結(jié)構(gòu)為（25S）-3β-羥基-5α-螺甾-12酮-3-O-β-D-葡萄糖-（1→2）-[β-D-葡萄糖-（1→3）]-β-D-葡萄糖-（1→4）-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物5：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯紫灰色，A試劑顯黃色，ESI-MS顯示分子中含有4個六碳糖 m/z 1 081.88[M+H]+。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ 0.77（3H，s），0.65（3H，s），1.10（3H，d，J=6.6 Hz），1.04（3H，d，J=7.2 Hz），0.76（3H），0.65（3H），3.33（1H，br d，J=10.2 Hz），4.87（1H，d，J=7.8 Hz），5.12（1H，d，J=7.8 Hz），5.25（1H，d，J=7.8 Hz），5.53（1H，d，J=7.2 Hz）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 45.4（C-1），72.4（C-2），84.0（C-3），34.0（C-4），44.5（C-5），27.9（C-6），31.9（C-7），34.4（C-8），54.2（C-9），36.7（C-10），21.3（C-11），39.9（C-12），40.6（C-13），56.1（C-14），32.1（C-15），81.0（C-16），62.6（C-17），16.5（C-18），13.2（C-19），42.3（C-20），14.7（C-21），109.6（C-22），27.4（C-23），26.0（C-24），26.2（C-25），64.9（C-26），16.2（C-27），以上苷元數(shù)據(jù)及酸水解實驗證明，其苷元為新替告皂苷元，糖鏈中糖的組成為β-D-葡萄糖與β-D-半乳糖，糖鏈核磁數(shù)據(jù)為：Gal 103.0（C-1′），71.1（C-2′），75.3（C-3′），79.6（C-4′），75.8（C-5′），60.5（C-6′），Glc 104.3（C-1″），81.1（C-2″），88.4（C-3″），71.4（C-4″），77.3（C-5″），62.3（C-6″），Glc 105.1（C-1″′），75.3（C-2″′），78.2（C-3″′），70.3（C-4″′），78.4（C-5″′），62.1（C-6″′），Glc 104.7（C-1″″），75.5（C-2″″），78.4（C-3″″），70.6（C-4″″），78.4（C-5″″），62.8（C-6″″）。綜合以上數(shù)據(jù)及 HMBC 遠(yuǎn)程相關(guān)（圖1），推測了糖鏈部分的連接位點，其數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道的數(shù)據(jù)一致，鑒定化合物5的結(jié)構(gòu)為新替告皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖-（1→2）-[β-D-葡萄糖-（1→3）]-β-D-葡萄糖-（1→4）-β-D-吡喃半乳糖苷。

化合物6：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯紫灰色，A 試劑顯黃色，ESI-MS m/z 112 5.73[M+HCOO]-。1HNMR（C5D5N，400 MHz）δ 0.76（3H，s），0.64（3H，s），1.11（3H，d，J=6.6 Hz），1.05（3H，d，J=7.2 Hz），0.76（3H），0.65（3H），3.33（1H，br d，J=10.2 Hz），4.89（1H，d，J=7.2 Hz），5.08（1H，d，J=7.8 Hz），5.16（1H，d，J=7.8 Hz），5.46（1H，d，J=7.8 Hz）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 45.4（C-1），72.4（C-2），83.9（C-3），33.9（C-4），44.4（C-5），27.9（C-6），31.9（C-7），34.4（C-8），54.2（C-9），36.7（C-10），21.3（C-11），39.9（C-12），40.6（C-13），56.1（C-14），32.1（C-15），81.0（C-16），62.6（C-17），16.5（C-18），13.2（C-19），42.3（C-20），14.7（C-21），109.6（C-22），27.4（C-23），26.0（C-24），26.2（C-25），64.9（C-26），16.2（C-27）；以上苷元數(shù)據(jù)及酸水解實驗證明，鑒定苷元為新替告皂苷元，酸水解證明糖鏈中糖的組成為β-D-葡萄糖與β-D-半乳糖，糖鏈核磁數(shù)據(jù)為：Gal 102.9（C-1′），71.1（C-2′），75.3（C-3′），79.6（C-4′），75.8（C-5′），60.4（C-6′），Glc 104.9（C-1″），75.3（C-2″），78.2（C-3″），70.3（C-4″），78.4（C-5″），62.1（C-6″），Glc 104.2（C-1″′），81.0（C-2″′），70.6（C-3″′），87.3（C-4″′），77.3（C-5″′），62.4（C-6″′），Glc 104.6（C-1″″），76.9（C-2″″），78.0（C-3″″），71.4（C-4″″），78.4（C-5″″），62.8（C-6″″）。HMBC譜遠(yuǎn)程相關(guān)推測糖鏈部分的連接位點為 β-D-葡萄糖-（1→2）-[β-D-葡萄糖-（1→4）]-β-D-葡萄糖-（1→4）-β-D-半乳糖。綜合1HNMR、13C-NMR、HMBC、HSQC、TOCSY、LC-MS 并與文獻(xiàn)[12]碳譜數(shù)據(jù)比對，鑒定化合物6的結(jié)構(gòu)為新替告皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖-（1→2）-[β-D-葡萄糖-（1→4）]-β-D-葡萄糖-（1→4）-β-D-吡喃半乳糖苷。

圖1 化合物4和5的結(jié)構(gòu)及HMBC相關(guān)信號

化合物1：白色針狀晶體，10%硫酸-乙醇顯紫色，A試劑顯黃色，E試劑顯紅色。ESI-MS m/z：433.13[M+H]＋，414.97[M+H-H2O]＋，477.07[M+HCOO]-。1H-NMR（C5D5N，600 MHz）δ 0.82（3H，s），0.85（3H，s），1.06（3H，d，J=7.2 Hz），1.13（3H，d，J=6.6 Hz），2.01（1H，ddd，J=17.4，12.6，6 Hz），2.12（1H，tt，J=18 Hz，13.2 Hz，9 Hz，4.2 Hz），2.25（1H，dd，J=12.6，4.8 Hz），3.35（1H，br d，J=11.4 Hz），3.85（1H，m），4.05（2H，m），4.51（1H，m，H-16）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 45.1（C-1），73.0（C-2），76.6（C-3），37.0（C-4），46.4（C-5），28.2（C-6），32.0（C-7），34.6（C-8），54.5（C-9），37.1（C-10），21.4（C-11），39.9（C-12），40.1（C-13），56.3（C-14），32.1（C-15），81.1（C-16），62.7（C-17），16.6（C-18），13.6（C-19），42.4（C-20），14.8（C-21），109.6（C-22），27.5（C-23），26.1（C-24），26.3（C-25），65.0（C-26），16.2（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道一致，鑒定化合物1為新替告皂苷元。

化合物2：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯黃色，A試劑顯黃色，E試劑顯紅色。ESI-MS m/z：446.95[M+H]+，428.97[M+H-H2O]+，490.94[M+HCOO]-。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ 0.89（3H，s），1.10（3H，s），1.08（3H，d，J=8 Hz），1.38（3H，d，J=7 Hz），2.76（1H，dd，J=8.4，6.8 Hz），3.38（1H，d，J=7 Hz），3.84（1H，m），4.00（2H，m），4.07（2H，m），4.47（1H，m）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 46.1（C-1），72.9（C-2），76.6（C-3），37.2（C-4），45.2（C-5），28.2（C-6），31.6（C-7），33.9（C-8），55.5（C-9），38.1（C-10），38.4（C-11），212.8（C-12），55.8（C-13），56.0（C-14），31.9（C-15），79.9（C-16），54.3（C-17），16.3（C-18），13.3（C-19），43.3（C-20），13.9（C-21），109.9（C-22），27.7（C-23），26.3（C-24），26.5（C-25），65.3（C-26），16.4（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報道一致，鑒定化合物2為（25S）-曼諾皂苷元。

化合物3：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯黃色，A試劑顯黃色，E試劑顯紅色。ESI-MS m/z：430.95[M+H]+，412.99[M+H-H2O]+，475.07[M+HCOO]-.1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ 0.90（3H，s），1.04（3H，s），1.07（3H，d，J=6.8 Hz），1.08（3H，d，J=6.8 Hz），2.22（1H，dd，J=14.4，4.8 Hz），2.40（1H，br t，J=14 Hz），2.50（1H，dd，J=8.8，6.8 Hz），3.31（1H，d，J=10.8 Hz），3.92（1H，dd，J=10.8，2.4 Hz），3.59（1H，m），4.34（1H，m）。13C-NMR（CDCl3，100 MHz）δ 36.6（C-1），31.2（C-2），71.1（C-3），38.0（C-4），44.8（C-5），28.4（C-6），31.4（C-7），34.5（C-8），55.7（C-9），36.2（C-10），38.0（C-11），213.8（C-12），55.2（C-13），55.9（C-14），31.7（C-15），79.4（C-16），53.5（C-17），16.2（C-18），12.1（C-19），42.8（C-20），13.2（C-21），109.9（C-22），26.1（C-23），25.9（C-24），27.2（C-25），65.3（C-26），16.2（C-27）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8]報道一致，鑒定化合物3為新海柯皂苷元。

化合物7：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯紫灰色，A 試劑顯黃色。ESI-MS m/z：1 051.84[M+H]+，1 095.67[M+HCOO]-。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ 1.12（3H，d，J=6.7 Hz），1.06（3H，d，J=6.8 Hz），0.77（3H），0.67（3H），2.11（1H，tt，J=13.2 Hz），2.17（1H，dd，J=12.8，4.4 Hz），3.35（1H，br d，J=10.8 Hz），3.61（1H，m），4.91（1H，d，J=7.6 Hz），4.95（1H，d，J=8 Hz），5.10（1H，d，J=7.6 Hz），5.21（2H，m），5.50（1H，d，J=8 Hz），5.58（1H，d，J=8 Hz）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 45.5（C-1），72.5（C-2），84.1（C-3），34.1（C-4），44.5（C-5），28.0（C-6），32.0（C-7），34.5（C-8），54.2（C-9），36.8（C-10），21.3（C-11），39.9（C-12），40.6（C-13），56.2（C-14），32.1（C-15），81.1（C-16），62.7（C-17），16.5（C-18），13.3（C-19），42.4（C-20），14.8（C-21），109.6（C-22），27.4（C-23），26.1（C-24），26.3（C-25），65.0（C-26），16.2（C-27），Gal 103.2（C-1′），71.3（C-2′），75.4（C-3′），79.3（C-4′），76.0（C-5′），60.4（C-6′），Glc 104.9（C-1″），81.2（C-2″），86.9（C-3″），70.3（C-4″），77.2（C-5″），62.5（C-6″），Glc 104.7（C-1″′），74.9（C-2″′），78.6（C-3″′），70.7（C-4″′），77.5（C-5″′），62.6（C-6″′），Xyl 104.6（C-1″″），75.0（C-2″″），78.4（C-3″″），70.4（C-4″″），67.2（C-5″″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報道一致，鑒定化合物7為新吉托皂苷元-3-O-β-D-葡萄糖-（1→2）-[β-D-木糖-（1→3）]-β-D-葡萄糖-（1→4）-β-D-半乳糖苷。

化合物8：白色粉末，10%硫酸-乙醇顯黃色，A試劑顯黃色。ESI-MS m/z：1 165.54[M+H]+，1 209.52[M+HCOO]-。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ 0.86（3H，s），1.06（3H，s），1.06（3H，d，J=5.6 Hz），1.35（3H，d，J=6.8 Hz），1.70（3H，d，J=5.6 Hz），2.39（1H，m），2.67（1H，dd，J=5.2，8.8 Hz），2.72（1H，m），3.36（1H，br d，J=11.2 Hz），4.81（1H，d，J=7.6 Hz），4.95（1H，d，J=8 Hz），5.20（1H，d，J=7.6 Hz），5.33（1H，d，J=8 Hz），5.35（1H，br s）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 36.7（C-1），29.7（C-2），76.9（C-3），34.3（C-4），44.5（C-5），28.7（C-6），31.4（C-7），34.4（C-8），55.6（C-9），36.4（C-10），38.0（C-11），212.7（C-12），55.4（C-13），56.0（C-14），31.8（C-15），79.8（C-16），54.2（C-17），16.3（C-18），11.9（C-19），43.1（C-20），13.7（C-21），109.8（C-22），26.4（C-23），26.2（C-24），27.5（C-25），65.2（C-26），16.0（C-27），Gal 100.2（C-1′），77.4（C-2′），76.2（C-3′），81.4（C-4′），75.1（C-5′），60.4（C-6′），Glc 105.4（C-1″），81.5（C-2″），88.0（C-3″），70.4（C-4″），77.6（C-5″），62.9（C-6″），Rha 101.6（C-1″′），72.3（C-2″′），72.7（C-3″′），74.0（C-4″′），69.5（C-5″′），18.4（C-6″′），Xyl 105.0（C-1″″），75.1（C-2″″），78.7（C-3″″），70.7（C-4″″），67.3（C-5″″），Ara 105.7（C-1″″′），73.2（C-2″″′），74.7（C-3″″′），69.7（C-4″″′），67.3（C-5″″′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報道一致，鑒定化合物8為大葉吊蘭苷C。

化合物9：白色粉末，E試劑顯紅色。ESI-MSm/z：1 327.53[M+H-H2O]+，1 343.33[M-H]-。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ 0.87（3H，s），1.11（3H，s），1.01（3H，d，J=6.8 Hz），1.52（3H，d，J=6.4 Hz），1.71（3H，d，J=6 Hz），2.19-2.26（3H，m），2.41（1H，m），2.88（1H，t，J=7.6 Hz），3.48（1H，dd，J=6.8，9.2 Hz），4.95（1H，d，J=8 Hz），5.04（1H，d，J=7.6 Hz），5.20（1H，d，J=8 Hz），5.34（1H，d，J=7.2 Hz），5.42（1H，d，J=8 Hz），6.30（1H，br s）。13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ 36.9（C-1），29.9（C-2），77.2（C-3），34.3（C-4），44.3（C-5），28.5（C-6），31.6（C-7），34.2（C-8），55.6（C-9），36.3（C-10），37.9（C-11），213.0（C-12），55.5（C-13），55.7（C-14），31.6（C-15），79.6（C-16），54.9（C-17），16.1（C-18），11.7（C-19），41.2（C-20），15.1（C-21），110.6（C-22），31.6（C-23），28.2（C-24），34.1（C-25），75.2（C-26），17.3（C-27），3-O-Gal 100.0（C-1′），76.6（C-2′），76.1（C-3′），79.6（C-4′），75.1（C-5′），60.3（C-6′），Glc 105.3（C-1″），81.4（C-2″），87.8（C-3″），70.2（C-4″），77.6（C-5″），62.8（C-6″），Rha 101.6（C-1″′），72.3（C-2″′），72.6（C-3″′），73.9（C-4″′），69.6（C-5″′），18.4（C-6″′），Xyl 104.8（C-1″″），74.6（C-2″″），78.5（C-3″″），70.6（C-4″″），67.2（C-5″″），Ara 105.7（C-1″″′），73.1（C-2″″′），74.4（C-3″″′），69.5（C-4″″′），67.5（C-5″″′），26-O-Glc 105.0（C-1′），75.0（C-2′），78.6（C-3′），71.6（C-4′），78.4（C-5′），62.7（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報道一致，鑒定化合物9為大葉吊蘭苷E。

化合物10：白色針狀結(jié)晶，易溶于二氯甲烷，10%硫酸-乙醇顯色呈紫紅色。石油醚-乙酸乙酯（5∶1）為展開劑，與β-谷甾醇對照品共薄層，Rf值及顯色情況均相同。鑒定化合物10為β-谷甾醇。

化合物11：白色無定型粉末，易溶于二氯甲烷，10%硫酸-乙醇顯色呈紫紅色。二氯甲烷-甲醇（15∶1）為展開劑，與胡蘿卜苷對照品共薄層，Rf值及顯色情況均相同。鑒定化合物11為胡蘿卜苷。

4 血小板聚集實驗

4.1 方法 SD大鼠稱體質(zhì)量，10%水合氯醛麻醉（0.5 mL/100 g），腹主動脈取血后室溫下離心10 min（200×g）；取上清，離心 10 min（800×g），棄去上清，加緩沖溶液將沉淀混勻，得到血小板懸濁液，血小板數(shù)調(diào)整為約5×108個/mL。加100 μL血小板混懸液至96孔酶標(biāo)板，每孔加入CaCl2溶液1～2 μL（0.9～1.8 mmol/L），F(xiàn)lexstation 3 酶標(biāo)儀在 405 nm 處測A值。陽性組加入50 μL阿司匹林，陰性組和對照組加入50 μL緩沖溶液，實驗組加入50 μL測試樣品溶液，于37℃持續(xù)震動孵育10 min，實驗組和陽性組、陰性組加入 20 μmol/L 的 ADP 各 50 μL，進(jìn)一步激活血小板[14]，對照組加50 μL緩沖溶液。37℃下每45 s讀數(shù)1次，至A值不再變化，得A值隨時間變化的動力學(xué)曲線：1）血小板聚集率%=（At=0-At）/At=0×100%；2）藥物對血小板聚集的抑制率%=（陰性組最大聚集率-對應(yīng)實驗組聚集率）/陰性組最大聚集率×100%。

4.2 結(jié)果 Chlorophytum tuberosum 50%乙醇提取物及經(jīng)大孔樹脂柱層析得到的5個極性部位P 1～5（見第2部分）。以阿司匹林為陽性對照，ADP為激動劑，在100 μg/ml（95%乙醇洗脫物為50 μg/mL）的測試濃度下，95%乙醇洗脫物對血小板聚集抑制活性最強(qiáng)，30%乙醇洗脫物具有較弱的血小板聚集抑制活性，其他組分及受試化合物對ADP誘導(dǎo)的血小板聚集幾乎無影響。在不加ADP的情況下，測試了不同極性部位及部分化合物誘導(dǎo)血小板聚集的活性，實驗結(jié)果表明70%乙醇洗脫物有中等強(qiáng)度的誘導(dǎo)血小板聚集的活性；化合物7具有顯著的誘導(dǎo)血小板聚集活性，化合物6有中等強(qiáng)度的誘導(dǎo)血小板聚集活性。各極性部位及化合物對血小板聚集活性的影響見表1。

表1 各組分及化合物對血小板聚集活性的影響

5 討論

對Chlorophytum tuberosum 50%乙醇提取物中的化學(xué)成分及不同極性部位和單體化合物進(jìn)行了血小板聚集活性研究，共分離得到11個化合物，化合物2（25S）-曼諾皂苷元為百合科首次分離，化合物1新替告皂苷元為吊蘭屬首次分離，并通過血小板聚集實驗發(fā)現(xiàn)，同一植物不同極性部位及單體化合物對血小板聚集活性作用不同，值得進(jìn)一步研究其化學(xué)成分與藥效之間的關(guān)系，為該植物開發(fā)研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)。