多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317的表達(dá)及其意義

黃亞麗 馬占忠 黃剛

[摘要] 目的 研究多發(fā)性骨髓瘤（MM）患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317的表達(dá)及其意義。 方法 選擇2016年1月～2018年5月在廣東省粵北人民醫(yī)院接受治療的86例MM患者作為觀察組，另選同期診治的缺鐵性貧血患者80例作為對(duì)照組。比較兩組骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量、血紅蛋白（Hb）、β2微球蛋白（β2-MG）及乳酸脫氫酶（LDH）水平；分析觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量，并分析患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量與Hb、β2-MG及LDH水平的相關(guān)性。 結(jié)果 觀察組骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。觀察組Hb、β2-MG水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05），但兩組LDH水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。根據(jù)Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量分別與Hb、β2-MG呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05），而與LDH無明顯相關(guān)性（P > 0.05）。 結(jié)論 MM患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317水平的表達(dá)明顯升高，Hb、β2-MG水平明顯降低，且CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量分別與Hb、β2-MG呈負(fù)相關(guān)。臨床上可進(jìn)一步監(jiān)測(cè)上述四種指標(biāo)的表達(dá)情況，從而更加全面地反映MM患者的實(shí)際病情。

[關(guān)鍵詞] 多發(fā)性骨髓瘤；骨髓細(xì)胞；CD269；CD317

[中圖分類號(hào)] R733.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210（2019）05（a）-0103-04

[Abstract] Objective To study the expression and significance of CD269， CD317 in bone marrow cells of patients with multiple myeloma（MM）. Methods A total of 86 patients with MM who were treated in Yuebei People′s Hospital of Guangdong province from January 2016 to May 2018 were selected as the observation group， another 80 patients with iron deficiency anemia during the same period were selected as the control group. The relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells， the levels of hemoglobin （HB）， β2-microglobulin （β2-MG） and lactate dehydrogenase （LDH） were compared between the two groups， the relative expressions of CD269 and CD317 in different age and sex of the observation group were compared too. The correlations between the relative expressions of CD269， CD317 and the levels of HB， β2-MG and LDH were analyzed. Results The relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells in the observation group were significantly higher than that of the control group （P < 0.05）. The levels of HB and β2-MG in the observation group were significantly lower than that in the control group （P < 0.05）， but there was no significant difference in the level of LDH between the two groups （P > 0.05）. There was no significant difference in the relative expressions of CD269 and CD317 in different age and sex of the observation group （all P > 0.05）. According to Pearson correlation analysis， the results indicated that the relative expressions of CD269 and CD317 in bone marrow cells were negatively correlated with HB， β2-MG （P < 0.05）， but there was no significant correlation with LDH （P > 0.05）. Conclusion The expressions of CD269， CD317 in bone marrow cells of patients with MM are significantly elevated， while the levels of HB and β2-MG are significantly decreased. The relative expression of CD269 and CD317 are negatively correlated with HB and β2-MG respectively. Clinically， the expression of these four indicators can be further monitored to provide more comprehensive feedback on the actual condition of MM patients.

[Key words] Multiple myeloma； Bone marrow cell； CD269； CD317

多發(fā)性骨髓瘤（MM）作為源自漿細(xì)胞的一類惡性腫瘤，患者的中位生存期通常是3～5年，且發(fā)病率在全體惡性腫瘤中大約占1%，但在造血系統(tǒng)腫瘤中約占10%，且已呈現(xiàn)出逐年增高的進(jìn)展趨勢(shì)[1-2]。MM的治療通常依賴免疫應(yīng)答反應(yīng)，這主要是免疫反轉(zhuǎn)性抑制能夠強(qiáng)化內(nèi)源型抗骨髓瘤的活性[3-4]。尋找新型免疫監(jiān)測(cè)指標(biāo)對(duì)MM患者的治療具有十分重要的意義。CD269屬于B細(xì)胞成熟性抗原，其也是B細(xì)胞表面分子，與B細(xì)胞活化因子結(jié)合后對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖具有促進(jìn)作用。分化抗原簇317（CD317），其又可稱作骨髓基質(zhì)細(xì)胞性抗原2，也可作為終末分化型B細(xì)胞的一個(gè)特異性標(biāo)志物[5-6]。為此，本研究分析了MM患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317的表達(dá)及其意義，旨在為臨床診治提供豐富的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)和參考依據(jù)，現(xiàn)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月～2018年5月在粵北人民醫(yī)院（以下簡(jiǎn)稱“我院”）接受治療的86例MM患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：①患者均符合中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤診治指南（2015年修訂）中關(guān)于MM的診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]；②年齡>30歲；③患者或其家屬已對(duì)本研究充分知情，并已簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①其他類別的血液疾病者；②有感染性疾病或免疫類疾病者；③有其他種類的惡性腫瘤者；④研究期間死亡者。觀察組男62例，女24例；年齡31～79歲，平均（61.34±1.04）歲；病程1～15個(gè)月，平均（7.35±0.82）個(gè)月。另選同期在我院診治的缺鐵性貧血患者80例作為對(duì)照組，其中男60例，女20例；年齡32～76歲，平均（61.28±1.21）歲；病程2～14個(gè)月，平均（7.40±0.77）個(gè)月。兩組性別、年齡、病程等一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 研究方法

1.2.1 儀器與試劑 FACSCalibur型流式細(xì)胞儀（美國(guó)BD公司）；單克隆抗體、同型對(duì)照物、熒光微球、溶血素相關(guān)試劑盒均購(gòu)自美國(guó)的BD公司。

1.2.2 標(biāo)本采集 所有患者入院當(dāng)日的晨間于無菌操作條件下抽取2 mL骨髓，并給予肝素抗凝，以及4 mL的血液標(biāo)本。其中，血液標(biāo)本采用3000 r/min常規(guī)離心15 min，離心半徑12 cm，分離血清，待用。

1.2.3 CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量測(cè)定 制備并收集其骨髓細(xì)胞懸液，并將細(xì)胞數(shù)調(diào)節(jié)到（0.5～1.0）×106個(gè)/mL，通過四色流式分析法測(cè)定胞膜抗原，將100 μL樣本分別添加不同組合的抗體20 μL，另制備同型對(duì)照管，混勻，避光條件下放置20 min，待溶血后，采用流式細(xì)胞儀測(cè)定，應(yīng)用CellQuest Pro軟件選擇10 000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行分析，應(yīng)用CD45/SSC及CD138聯(lián)合設(shè)門統(tǒng)計(jì)細(xì)胞群中CD269、CD317陽性率及表達(dá)強(qiáng)度，其中膜抗原陽性率>20%記為陽性。

1.2.4 血紅蛋白（Hb）、β2微球蛋白（β2-MG）及乳酸脫氫酶（LDH）水平的測(cè)定 采用日本希森美康公司的XE2100型血液分析儀測(cè)定血清中Hb水平；采用6700型全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定β2-MG及LDH水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性分析。以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量比較

觀察組骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）。見表1。

2.2 兩組Hb、β2-MG及LDH水平比較

觀察組Hb、β2-MG水平明顯低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P < 0.05）；兩組LDH水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05）。見表2。

2.3 觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量比較

觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05）。見表3。

2.4 患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量與Hb、β2-MG及LDH水平的相關(guān)性分析

Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317的相對(duì)表達(dá)量分別與Hb、β2-MG呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05），且與LDH無明顯的相關(guān)性（P > 0.05）。見表4。

3 討論

MM屬于惡性漿細(xì)胞類疾病，我國(guó)此病的年發(fā)病率高達(dá)1.3/10萬～5.0/10萬，也是發(fā)病率位居前列的血液型惡性腫瘤[8-9]。有報(bào)道[10]指出，MM患者群體中，男性占比較女性高，且發(fā)病年齡以老年為主，隨著我國(guó)老齡化程度的加劇，MM的發(fā)病率可能會(huì)迎來更加快速的增長(zhǎng)。在病理學(xué)機(jī)制中，MM主要是因患者骨髓內(nèi)存在的漿細(xì)胞發(fā)生異常性增殖，使球蛋白出現(xiàn)異常性分泌的一類B淋巴細(xì)胞不斷克隆性增殖的惡性腫瘤。當(dāng)前治療MM的方式較多，比如化療和自體骨髓抑制，以及造血干細(xì)胞的移植和生物學(xué)療法等，但其產(chǎn)生的整體療效卻不令人滿意[11]。為更好地尋找治療MM的臨床方案，對(duì)此病進(jìn)行分子學(xué)層面的深入研究十分必要。CD269是與B淋巴細(xì)胞有關(guān)刺激因子的一種受體，CD317屬于Ⅱ型跨膜蛋白，以往二者在炎癥性疾病或免疫性疾病中存在較多的研究報(bào)道。但近年來有報(bào)道[12-13]指出，二者在機(jī)體中的表達(dá)與惡性腫瘤的發(fā)病具有密切的關(guān)系。

本研究發(fā)現(xiàn)，觀察組骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組（P < 0.05），提示MM患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317表達(dá)明顯升高。CD269作為B細(xì)胞刺激因子的重要受體，其參與了此種刺激因子調(diào)控機(jī)體中惡性B細(xì)胞的主要增殖過程，同時(shí)參與了MM細(xì)胞的分化和增殖，最終在MM的一系列病理生理反應(yīng)中產(chǎn)生了重要的作用[14-15]。因此，機(jī)體骨髓細(xì)胞中的CD269水平明顯升高。CD317是終末B細(xì)胞的自身限制型抗原，其在腫瘤細(xì)胞亦或是可分泌免疫球蛋白的已成熟B細(xì)胞中表達(dá)，可作為晚期B細(xì)胞已成熟的重要特異性標(biāo)記[16]。同時(shí)，CD317能夠調(diào)控機(jī)體中免疫應(yīng)答反應(yīng)而產(chǎn)生抗炎和抗病毒等作用，進(jìn)而參與腫瘤細(xì)胞的免疫反應(yīng)，其在MM患者骨髓細(xì)胞中的表達(dá)水平明顯升高。本研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，觀察組Hb、β2-MG水平明顯低于對(duì)照組（P < 0.05），但兩組LDH水平比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P > 0.05），提示MM患者機(jī)體中Hb、β2-MG水平明顯下降，且LDH水平無明顯變化。其中β2-MG是一類相對(duì)分子質(zhì)量比較低的蛋白，也是細(xì)胞膜的完整組織相容型抗原，其因在電泳時(shí)處在β2區(qū)帶而得名。在機(jī)體血清中的β2-MG能經(jīng)過腎小球的毛細(xì)血管壁，自由濾過，且?guī)缀跞勘蝗梭w的近端腎小管進(jìn)行重吸收和分解[17-18]。但對(duì)MM患者而言，隨著瘤細(xì)胞的不斷增生和細(xì)胞周轉(zhuǎn)的加速，最終可致使β2-MG水平下降。MM患者大都合并貧血癥狀，這主要是由骨髓瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)和其自身的生物學(xué)特性而引起，Hb作為患者機(jī)體是否貧血的重要判斷指標(biāo)，其在MM患者機(jī)體中的水平明顯下降。LDH作為一類糖酵解酶，其通常在心肌和骨骼肌及肝腎等細(xì)胞中具有廣泛的存在，特別是在紅細(xì)胞中的含量十分豐富。本研究?jī)山M患者LDH水平差異不大，原因可能是MM患者的腫瘤細(xì)胞量顯著升高，而機(jī)體的紅系造血功能受到抑制，最終使得LDH水平變化不大[19-20]。同時(shí)，本研究觀察組不同性別及年齡患者CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P > 0.05），提示性別、年齡的差異與MM患者CD269、CD317表達(dá)無明顯關(guān)系。筆者考慮原因主要可能是CD269、CD317的表達(dá)主要與患者的病情及癥狀有關(guān)，而性別、年齡的差異并不會(huì)直接影響到患者的病情及癥狀，故其差異并不十分明顯。此外，Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量分別與Hb、β2-MG呈負(fù)相關(guān)（P < 0.05），且與LDH無明顯相關(guān)性（P > 0.05），這也再次證實(shí)了MM患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317的表達(dá)與Hb、β2-MG密切相關(guān)，但與LDH無明顯關(guān)系。分析原因，主要是因?yàn)镸M患者機(jī)體內(nèi)的病理變化致使瘤細(xì)胞不斷增生，細(xì)胞周轉(zhuǎn)隨之加速，且細(xì)胞功能發(fā)生變化，最終通過一系列的信號(hào)傳導(dǎo)途徑干擾了CD269、CD317的表達(dá)及Hb、β2-MG的水平[21]。

綜上所述，MM患者骨髓細(xì)胞中CD269、CD317的表達(dá)明顯升高，Hb、β2-MG水平明顯降低，且CD269、CD317相對(duì)表達(dá)量分別與Hb、β2-MG呈負(fù)相關(guān)，臨床上進(jìn)一步監(jiān)測(cè)上述四種指標(biāo)的表達(dá)情況，從而更加全面地反映MM患者的實(shí)際病情。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 楊陽.補(bǔ)腎強(qiáng)骨方治療多發(fā)性骨髓瘤的臨床效果[J].臨床醫(yī)學(xué)研究與實(shí)踐，2018，3（2）：120-121.

[2] 趙玲俊，高松，李曉.沙利度胺對(duì)多發(fā)性骨髓瘤患者外周血Th17與Treg細(xì)胞比值及IL-17、IL-35表達(dá)水平的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志，2018，26（1）：187-191.

[3] 黃琦，沙輝，陳龍，等.多發(fā)性骨髓瘤和慢性淋巴細(xì)胞白血病患者血漿lncRNA MALAT1、LincRNA-p21和GAS5的表達(dá)水平及其診斷意義[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2018，44（2）：339-345.

[4] 陳曦，蔡真.疫苗治療多發(fā)性骨髓瘤的研究進(jìn)展[J].中國(guó)腫瘤生物治療雜志，2017，24（3）：311-316.

[5] 朱婕，張磊，張葆康，等.多發(fā)性骨髓瘤患者血清IL-6、IL-6R、MCL1的檢測(cè)分析及與預(yù)后的關(guān)系[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2018，15（6）：792-794.

[6] 陳穎，楊清.多發(fā)性骨髓瘤SET結(jié)構(gòu)域蛋白相關(guān)靶向藥物抗腫瘤作用機(jī)制的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代藥物與臨床，2018，33（4）：997-1001.

[7] 中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)血液科醫(yī)師分會(huì)，中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì)，中國(guó)醫(yī)師協(xié)會(huì)多發(fā)性骨髓瘤專業(yè)委員會(huì).中國(guó)多發(fā)性骨髓瘤診治指南（2015年修訂）[J].中華內(nèi)科雜志，2015，54（12）：1066-1070.

[8] Okazuka K，Ishida T，Sato K，et al. Carfilzomib，lenalidomide，and dexamethasone therapy for refractory and relapsed multiple myeloma：a single-center study of 29 patients [J]. Rinsho Ketsueki，2018，59（6）：698-700.

[9] 林凡莉，周俊，葉麗，等.SDF-1、CXCR4表達(dá)及MVD與多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后的關(guān)系[J].腫瘤，2017，37（11）：1179-1187.

[10] 趙繼偉，洪少杰.57例中青年多發(fā)性骨髓瘤的臨床特點(diǎn)[J].現(xiàn)代醫(yī)院，2018，18（2）：264-267.

[11] 劉玉霞，胡國(guó)瑜，袁朝暉，等.CD269和CD317在多發(fā)性骨髓瘤中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2018，33（2）：58-61.

[12] Frigyesi I，Adolfsson J，Ali M，et al. Robust isolation of malignant plasma cells in multiple myeloma [J]. Blood，2014，123（9）：1336-1340.

[13] 袁青，陳紹水.循環(huán)微小RNA在多發(fā)性骨髓瘤中的應(yīng)用[J].國(guó)際腫瘤學(xué)雜志，2018，45（1）：53-55.

[14] Staudinger M，Glorius P，Burger R，et al. The novel immunotoxin HM1.24-ETA′ induces apoptosis in multiple myeloma cells [J]. Blood Cancer J，2014，13（4）：219-220.

[15] 譚奎，沈嬋娟，張玲，等.多發(fā)性骨髓瘤患者骨髓CD269和CD317基因的差異性表達(dá)研究[J].現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2017，32（6）：64-66.

[16] 周惠玉，孫偉才，張福軍，等.β2-MG、Cys-C、uNGAL、uMA、uCr、uMA/Cr檢測(cè)對(duì)多發(fā)性骨髓瘤早期腎功能損害的診斷價(jià)值[J].國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2018，24（2）：181-184.

[17] Chen KH，Wada M，Pinz KG，et al. A compound chimeric antigen receptor strategy for targeting multiple myeloma [J]. Leukemia，2018，32（2）：402-412.

[18] Harada T，Ozaki S. Targeted therapy for HM1.24 （CD317） on multiple myeloma cells [J]. Biomed Res Int，2014，1（2014）：965 384-965 385.

[19] 紀(jì)偉，吳洪坤，周琳，等.多發(fā)性骨髓瘤非編碼RNA的研究進(jìn)展[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2018，33（3）：264-268.

[20] Ishiguro T，Kawai S，Habu K，et al. A defucosylated anti-CD317 antibody exhibited enhanced antibody-dependent cellular cytotoxicity against primary myeloma cells in the presence of effectors from patients [J]. Cancer Sci，2010， 101（10）：2227-2233.

[21] 吳迪，余艷麗，劉芳，等.多發(fā)性骨髓瘤伴非骨旁髓外病變臨床分析[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2018，26（4）：591-594.

（收稿日期：2018-08-29 本文編輯：王 蕾）