BAPTA-AM通過(guò)抑制炎癥和氧化損傷改善脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性肺損傷

俞巧麗，莫澤君，宋必衛(wèi)

（1.浙江醫(yī)院藥劑科，浙江 杭州 310007；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第二醫(yī)院藥劑科，浙江 杭州 310009；3.浙江工業(yè)大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)科，浙江 杭州 310014）

急性肺損傷（acute lung injury，ALI）是由嚴(yán)重感染、創(chuàng)傷、酸中毒、腸缺血和輸血等引起的肺部炎癥性疾病[1]，臨床表現(xiàn)為呼吸窘迫和難治性低血氧[2]，具有極高的死亡率[3]。肺泡上皮緊密排列著肺泡Ⅰ型和Ⅱ型上皮細(xì)胞，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞能分泌表面活性物質(zhì)降低表面張力，使肺泡保持開放，促進(jìn)氣體交換[4]。ALI早期表現(xiàn)為肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞與肺泡上皮細(xì)胞損傷，肺泡屏障通透性增高，中性粒細(xì)胞大量積累并釋放炎癥介質(zhì)，誘導(dǎo)炎癥和氧化損傷[4-6]。目前ALI的臨床治療主要有機(jī)械通氣、液體通氣和體外膜氧合技術(shù)等[7-9]，尚無(wú)有效的藥物治療方案。大量研究表明，抑制炎癥[10]和氧化損傷[11]可改善ALI，因此具有抗炎和抗氧化損傷作用的化合物具有良好的治療ALI前景。

1，2-雙（2-氨基苯氧基）-乙烷-N，N，N’，N’-四乙酸〔1，2-bis（2-aminophenoxy）ethane-N，N，N’，N’-tetraacetic acid，BAPTA-AM〕是一種Ca2+螯合劑，能在細(xì)胞內(nèi)被酶解生成BAPTA，已被證明可以保護(hù)神經(jīng)元，抑制細(xì)胞氧化應(yīng)激和凋亡[12-14]，目前國(guó)內(nèi)外尚未見BAPTA-AM抗肺損傷方面的報(bào)道。BAPTA-AM在水中溶解度低，本研究使用納米顆粒作為脂質(zhì)體載體，通過(guò)乙醚注射法制備BAPTAAM納米脂質(zhì)體（BAPTA-AM nano-liposome，BAPTA-AML）。納米脂質(zhì)體可保護(hù)BAPTA-AM的穩(wěn)定性，并能選擇性地在靶組織積累，提高藥物療效，減輕藥物的不良作用[14]。鑒于減輕炎癥和氧化損傷的ALI治療有重要意義，本研究使用脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）和缺糖缺氧復(fù)糖復(fù)氧（oxygen-glucose deprivation/recovery，OGD/R）建立小鼠和A549細(xì)胞ALI模型，探索BAPTA-AM的抗ALI作用及作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞、動(dòng)物、試劑和主要儀器

A549細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC細(xì)胞庫(kù)，接種RPMI-1640（含10%胎牛血清）培養(yǎng)液，置于37℃，5%CO2飽和濕度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

清潔級(jí)健康雄性ICR小鼠，體質(zhì)量20～22 g，購(gòu)自浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SCXK（浙）-2014-0001。實(shí)驗(yàn)小鼠于實(shí)驗(yàn)室條件飼養(yǎng)：恒溫20～24℃，自由飲水，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂食，光照周期12 h照明與12 h黑暗交替進(jìn)行。待小鼠適應(yīng)環(huán)境（約7 d）后，禁食12 h，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

BAPTA-AM和BAPTA-AML購(gòu)自合肥恒星科技開發(fā)有限公司，噻唑藍(lán)（thiazolyl blue tetrazolium bromide，MTT）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；RPMI-1640培養(yǎng)液和胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS）購(gòu)自上海吉諾醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司；LPS購(gòu)自西亞試劑；羅丹明123（rhodamine 123，Rh 123）購(gòu)自南京凱基生物技術(shù)有限公司；乳酸脫氫酶（lactic dehydrogenase，LDH）、一氧化氮（nitric oxide，NO）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和髓過(guò)氧化物酶（myeloperoxidase，MPO）測(cè)定試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所；地塞米松（dexamethasone，Dex）磷酸鈉注射液購(gòu)自天津金耀藥業(yè)有限公司；小鼠腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和白細(xì)胞介素6（interleukin-6，IL-6）ELISA檢測(cè)試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。

NU-5510E CO2培養(yǎng)箱（Thermo，美國(guó)），熒光顯微鏡（尼康，日本），Synergy HI多功能酶標(biāo)儀（BioTek，美國(guó)），LDZ5-2高速冷凍離心機(jī)（Heraeus，德國(guó)），HM325輪轉(zhuǎn)式石蠟切片機(jī)（MICROM，德國(guó)）。

1.2 建立缺糖缺氧復(fù)糖復(fù)氧細(xì)胞模型及分組處理

取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期A549細(xì)胞，以每孔1×104細(xì)胞接種于96孔板，分為正常對(duì)照組（含10%FBS的RPMI-1640）、OGD/R模型組（先用無(wú)糖RPMI-1640培養(yǎng)液，于持續(xù)通入氮?dú)? h的37℃培養(yǎng)箱中缺氧培養(yǎng)12 h；之后使用含2 g·L-1葡萄糖的RPMI-1640培養(yǎng)液并在正常含氧量培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)6 h）；BAPTA-AM 0.005，0.05，0.5和5 nmol·L-1組加相應(yīng)濃度BAPTA-AM培養(yǎng)30 min后同模型組方法進(jìn)行培養(yǎng)。

MTT法檢測(cè)96孔板中A549細(xì)胞存活，收集細(xì)胞培養(yǎng)液按試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)LDH活性，裂解細(xì)胞按試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)NO和MDA含量及SOD活性。

1.3 Rh123染色法檢測(cè)線粒體膜電位

收集細(xì)胞后以每孔5×104細(xì)胞接種于24孔板，分組處理同1.2，培養(yǎng)結(jié)束后棄培養(yǎng)液，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）清洗3次，加含Rh123 10 mg·L-1的無(wú)酚紅RPMI-1640培養(yǎng)液，37℃孵育30 min，PBS清洗后加適量無(wú)酚紅RPMI-1640培養(yǎng)液，熒光顯微鏡下觀察、拍照，多功能酶標(biāo)儀檢測(cè)96孔板中熒光值（激發(fā)波長(zhǎng)：507 nm，發(fā)射波長(zhǎng)：527 nm）。Rh123為膜電位敏感的親脂性陽(yáng)離子熒光染料，能選擇性地在活細(xì)胞線粒體內(nèi)聚集，發(fā)出黃綠色熒光，其強(qiáng)度可間接反映線粒體膜電位（mitochondrial membrane potential，Δψ）的高低。

1.4 lCR小鼠ALl模型的制備及處理分組

健康ICR小鼠隨機(jī)分成6組，每組8只：正常對(duì)照組、ALI模型組（尾靜脈注射LPS 10 mg·kg-1）、Dex組（尾靜脈先后注射LPS 10 mg·kg-1和Dex 5 mg·kg-1）和BAPTA-AML 25，50和100 μg·kg-1治療組（尾靜脈先后注射LPS 10 mg·kg-1和BAPTAAML 25，50或100 μg·kg-1）。正常對(duì)照組和ALI模型組注射同等容積的生理鹽水，實(shí)驗(yàn)過(guò)程中各組小鼠均自由飲水，小鼠最后一次尾靜脈注射6 h后，摘眼球取血，室溫靜置30 min，于1000×g離心10 min制備血清。

1.5 肺系數(shù)計(jì)算

取血后，小鼠快速處死取整肺，預(yù)冷PBS漂洗3次，吸干表面水分，稱取整肺質(zhì)量。新鮮左肺下葉稱重后于60°C烘箱烘烤48 h至恒重，稱量干重，計(jì)算肺組織濕干（lung wet/dry，W/D）比。肺系數(shù)=肺質(zhì)量/體質(zhì)量×100%。肺組織濕干比=肺濕重/肺干重。

1.6 試劑盒檢測(cè)小鼠血清LDH活性，ELlSA檢測(cè)小鼠血清TNF- α和lL-6的含量

按說(shuō)明書測(cè)定小鼠血清LDH活性，使用ELISA檢測(cè)小鼠血清TNF-α和IL-6含量。

1.7 試劑盒檢測(cè)小鼠肺組織MPO和SOD活性及MDA的含量

右肺稱重后按質(zhì)量體積比1∶9加所需體積的預(yù)冷PBS，充分勻漿，4℃，1000×g離心20 min，取上清液，考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，按說(shuō)明書檢測(cè)MPO和SOD的活性及MDA的含量。MPO是中性粒細(xì)胞功能和激活的標(biāo)志，本研究使用MPO活性反映小鼠肺組織中中性粒細(xì)胞的積累變化。

1.8 蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin staining，HE）染色觀察小鼠肺組織的病理變化

左肺上葉經(jīng)4%多聚甲醛固定后，石蠟包埋，切片，進(jìn)行HE染色，顯微鏡下觀察肺組織的病理變化，隨機(jī)選取10個(gè)視野，采用Smith等[15]方法進(jìn)行病理評(píng)分（表1）。重點(diǎn)評(píng)價(jià)：①肺充血及肺出血；②肺泡水腫；③肺泡及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；④肺泡間隔增厚及透明膜形成等。

Tab.1 Score of lung pathology in mice with acute lung injury（ALl）

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用±s表示，采用GraphPad Prism 7.0處理及分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，采用單因素方差分析法檢測(cè)均數(shù)差異顯著性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 BAPTA-AM改善OGD/R導(dǎo)致的A549細(xì)胞損傷

MTT結(jié)果（圖1A）顯示，與正常對(duì)照組相比，細(xì)胞經(jīng)缺糖缺氧培養(yǎng)12 h，復(fù)氧復(fù)糖培養(yǎng)6 h后，OGD/R模型組細(xì)胞存活率下降（P＜0.05），細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活性升高（P＜0.05）（圖1B），細(xì)胞中MDA和NO含量升高（P＜0.05），SOD活性降低（P＜0.05）（圖1C-D）；與OGD/R模型組相比，BAPTAAM 0.05，0.5和5 nmol·L-1組細(xì)胞存活率升高（P＜0.05），培養(yǎng)液中LDH活性降低（P＜0.05），SOD活性升高（P＜0.05），而BAPTA-AM 0.005 nmol·L-1組與模型組相比無(wú)顯著性差異；而不同濃度的BAPTAAM組都能降低細(xì)胞內(nèi)MDA和NO含量（P＜0.05），圖1C和D顯示，BAPTA-AM具有良好的抗氧化損傷能力。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BAPTA-AM改善細(xì)胞損傷、抗氧化應(yīng)激作用，在0.5 nmol·L-1時(shí)效果最佳，濃度增大反而作用有所減弱。

2.2 BAPTA-AM降低OGD/R導(dǎo)致的線粒體膜電位

Fig.1 Effect of BAPTA-AM pretreatment on A549 cells injured by oxygen-glucose deprivation/recovery（OGD/R）.A549 cells were cultured in the absence of serum and glucose in RPMI-1640，exposed to 95%N2and 5%CO2for 12 h.Then，the culture medium was replaced with RPMI-1640 containing normal glucose and 10%（V/V）fetal bovine serum under 5%CO2and normoxic condition for 6 h as OGD/R.BAPTA-AM 0.005，0.05，0.5 and 5 nmol·L-1was added to the cell cultures 30 min prior to ODG/R.A：survival rate of A549 cells detected by MTT assay；B：activity of lactic dehydrogenase（LDH）in culture medium of A549 cells；C：malondialdehyde（MDA），nitric oxide（NO）level；D：activity of superoxide dismutase（SOD）in A549 cells.±s，n=6，＊P＜0.05，compared with cell control group；#P＜0.05，compared with model group.

線粒體膜電位結(jié)果（圖2）顯示，OGD/R模型組細(xì)胞線粒體膜完整性被破壞，黃綠色熒光強(qiáng)度降低（P＜0.05）。BAPTA-AM 0.05，0.5和5 nmol·L-1組細(xì)胞線粒體黃綠色熒光強(qiáng)度升高（P＜0.05），提示BAPTA-AM處理顯著改善線粒體對(duì)Rh123的攝取能力，穩(wěn)定Δψ，維持膜功能，有效保護(hù)線粒體；而BAPTA-AM 0.005 nmol·L-1組與模型組相比無(wú)顯著性差異。

2.3 BAPTA-AML對(duì)ALl模型小鼠肺系數(shù)及肺W/D比的影響

Fig.2 Effect of BAPTA-AM on mitochondrial membrane potential of A549 cells injured by OGD/R and detected by fluorescence microscope.See Fig.1 for the cell treatment.A：fluorescence images of rhodamine123 staining detected by fluorescence microscope；B：quantitative analysis of fluorescence intensity in A.RFU：relative fluorescence unit.±s，n=6，＊P＜0.05，compared with cell control group；#P＜0.05 compared with model group.

Fig.3 Effect of BAPTA-AM nanoliposome（BAPTAAML）on lung coefficient（A）and lung wet/dry（W/D）ratio（B）in ALl model mice induced by lipopolysaccharide（LPS）.BAPTA-AML 25，50，100 μg·kg-1or dexamethasone（Dex）5 mg·kg-1was given through tail intravenous injection（iv）after LPS（10 mg·kg-1，iv）administration.After 6 h，the mice in each group were euthanized，and lung tissues and blood were harvested immediately.±s，n=8.＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05 compared with model group.

與正常對(duì)照組比，模型組小鼠肺系數(shù)及肺W/D比升高（P＜0.05），不同濃度BAPTA-AML組以上指標(biāo)顯著降低（圖3A，B）；Dex 5 mg·kg-1組肺W/D比和肺系數(shù)降低（P＜0.05），給藥組與陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.4 BAPTA-AML對(duì)ALl模型小鼠肺組織MDA含量和SOD活性及血清LDH活性的影響

結(jié)果（圖4）顯示，與正常對(duì)照組比，模型組小鼠血清LDH活性升高（P＜0.05），肺組織MDA含量上升（P＜0.05）和SOD活性降低（P＜0.05），Dex 5 mg·kg-1和BAPTA-AML 25，50，100 μg·kg-1可逆轉(zhuǎn)上述作用（P＜0.05）；其中BAPTA-AML 25和50 μg·kg-1降低血清LDH水平和肺組織MDA含量的作用優(yōu)于Dex 5 mg·kg-1組（P＜0.05），且BAPTA-AM各劑量升高SOD活性的作用優(yōu)于Dex 5 mg·kg-1（P＜0.05）。

Fig.4 Effect of BAPTA-AML on oxidative stress factors MDA（A）and SOD（B）in lung tissue，and LDH activity（C）in serum of ALl model mice.See Fig.3 for the mouse treatment.x±s，n=8.＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05 compared with model group；△P＜0.05，compared with Dex 5 mg·kg-1group.

2.5 BAPTA-AML對(duì)ALl模型小鼠肺組織炎癥因子的影響

結(jié)果（圖5）顯示，與正常對(duì)照組相比，模型組小鼠MPO活性、TNF-α和IL-6含量升高（P＜0.05）；與模型組比，Dex和不同濃度BAPTA-AML組以上指標(biāo)降低（P＜0.05）；且BAPTA-AML 50 μg·kg-1組降低MPO活性和TNF-α含量的效果優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照Dex5mg·kg-1（P＜0.05），BAPTA-AML25和50μg·kg-1降低IL-6含量的作用高于陽(yáng)性對(duì)照Dex 5 mg·kg-1（P＜0.05）。

Fig.5 Effect of BAPTA-AML on myeloperoxidase（MPO）activity（A）in lung tissue and TNF- α（B），lL-6（C）levels in serum of ALl model mice.See Fig.3 for the mouse treatment.x ± s，n=8. ＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05，compared with model group；△P＜0.05，compared with Dex 5 mg·kg-1group.

2.6 BAPTA-AML對(duì)ALl小鼠肺組織病理變化的影響

HE染色（圖6A）及肺損傷評(píng)分（圖6B）結(jié)果顯示，正常對(duì)照組肺組織結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔清晰，肺泡壁??；而模型組肺泡結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破環(huán)，肺泡腔明顯縮小，部分肺泡腔融合，肺組織內(nèi)有大量散在的淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞，肺間隔增厚，炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肺損傷評(píng)分明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.05）；BAPTA-AML 50 μg·kg-1治療組肺組織損傷明顯減輕，結(jié)構(gòu)趨于正常，肺間隔較模型組變薄，肺泡腔融合消失，僅少量淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞滲出，少見炎癥浸潤(rùn)，肺損傷評(píng)分較模型組降低（P＜0.05）。

Fig.6 Effect of BAPTA-AML on histopathology in lung tissues in ALl model mice by HE staining.See Fig.3 for the mouse treatment.A：HE staining.B：score of lung injury pathology in A.±s，n=8.＊P＜0.05，compared with normal control group；#P＜0.05，compared with model group.The lung structure manifested pathological changes induced by LPS，which included structure despite a few lymphocytes or a little red blood cell exudation.Arrows show alveolar cavity shrinking，thickening alveolar septum，inflammatory cell infiltration and the formation of hyaline membranes.

3 討論

A549細(xì)胞為亞三倍體肺泡基底上皮細(xì)胞，被廣泛用作肺腺癌的模型以及肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的體外模型。本研究通過(guò)OGD/R處理A549細(xì)胞，結(jié)果顯示模型組細(xì)胞活力下降，LDH活性升高，產(chǎn)生氧化應(yīng)激，促進(jìn)NO釋放，提示細(xì)胞損傷模型建立成功。

生理狀態(tài)下，氧自由基不斷產(chǎn)生也不斷被清除，對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷，而在一定外源因素的誘導(dǎo)下，細(xì)胞代謝過(guò)程中產(chǎn)生過(guò)多氧自由基，誘導(dǎo)細(xì)胞損傷。MDA是典型的脂質(zhì)過(guò)氧化物，其含量的多少指示組織脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，SOD活性高低間接反映組織清除氧自由基的能力，同時(shí)測(cè)定MDA含量和SOD活性可反映肺組織氧化損傷程度。NO性質(zhì)活潑，高劑量NO能降低肺表面活性物質(zhì)功能，激活巨噬細(xì)胞，對(duì)肺上皮細(xì)胞產(chǎn)生氧化損傷[16]，并能損傷線粒體[17-18]，促使線粒體膜通透性改變，Δψ下降，釋放細(xì)胞色素c并激活胱天蛋白酶3（cysteinyl aspartate specific proteinase 3，caspase 3），導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[19-21]。Ca2+超載亦能引起氧化應(yīng)激，并能通過(guò)線粒體細(xì)胞死亡通路調(diào)控細(xì)胞凋亡[22]。BAPTA是良好的Ca2+螯合劑，其乙酰氧甲基化物BAPTA-AM易進(jìn)入細(xì)胞[23]，并在細(xì)胞內(nèi)水解生成BAPTA，有效絡(luò)合細(xì)胞內(nèi)Ca2+，且對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性[24]。有研究報(bào)道BAPTA-AM能保護(hù)Ca2+超載介導(dǎo)的Δψ崩潰，減少胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9的釋放，抑制細(xì)胞凋亡[14，25]。本研究體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BAPTA-AM能提高OGD/R處理的A549細(xì)胞活力，抑制LDH活性，改善細(xì)胞氧化損傷，減少NO的合成，且BAPTA-AM能改善OGD/R誘導(dǎo)A549細(xì)胞的Δψ崩潰，維持線粒體膜功能，進(jìn)而減少細(xì)胞凋亡，由此可見本文研究結(jié)果與研究報(bào)道一致。

本研究通過(guò)尾靜脈注射LPS建立小鼠ALI模型，從血清中可發(fā)現(xiàn)小鼠炎癥因子較正常對(duì)照組顯著上升，且病理切片顯示模型組小鼠肺泡結(jié)構(gòu)被破壞，呈現(xiàn)肺水腫和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，提示造模成功。

ALI發(fā)生時(shí)，肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和肺泡上皮細(xì)胞通透性增加，造成肺泡及間充質(zhì)滲透性水腫，肺水腫發(fā)生。采用肺系數(shù)和肺W/D比測(cè)定可間接反映肺組織含水量，衡量肺水腫程度。本研究體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BAPTA-AML能顯著降低LPS誘導(dǎo)的ALI模型小鼠肺W/D比和肺系數(shù)，改善ALI小鼠肺水腫。進(jìn)一步研究顯示，BAPTA-AML能降低LDH的活性，抑制ALI小鼠氧化損傷。

ALI患者肺泡與肺間充質(zhì)內(nèi)積聚大量富含蛋白質(zhì)及多種炎癥細(xì)胞的水腫液，促進(jìn)中性粒細(xì)胞向肺間充質(zhì)和肺泡腔移行[4]。激活的中性粒細(xì)胞介導(dǎo)活性氧的產(chǎn)生，刺激NF-κB表達(dá)[11，26]，釋放大量促炎因子如TNF-α和IL-6等，促進(jìn)細(xì)胞凋亡[27]，進(jìn)一步損傷肺泡上皮細(xì)胞屏障[4，9]。XU 等[28]和 SAKURADA等[29]報(bào)道，BAPTA-AM能減少NF-κB的激活，消除還原型輔酶Ⅱ介導(dǎo)的氧化應(yīng)激。在肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞中，Ca2+作為信使參與肺泡表面活性物質(zhì)的分泌，BAPTA-AM與Ca2+絡(luò)合后，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)合型的Ca2+被釋放，通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，維持胞內(nèi)Ca2+濃度平衡，促進(jìn)肺泡表面活性物質(zhì)大量分泌，改善肺損傷。肺組織MPO活性，可反映組織中中性粒細(xì)胞的含量，間接反映肺組織炎癥浸潤(rùn)程度，且MPO催化反應(yīng)還會(huì)生成過(guò)量的氧化物，導(dǎo)致氧化應(yīng)激和氧化性組織損傷。本文研究結(jié)果顯示BAPTA-AML能降低LPS誘導(dǎo)的ALI模型小鼠MPO活性、血清TNF-α和IL-6含量，提示BAPTA-AML能減少中性粒細(xì)胞的積累，減輕肺部炎癥；且從病理切片可見BAPTAAML能減少ALI小鼠淋巴細(xì)胞和紅細(xì)胞滲出，改善肺部炎癥，減輕肺組織病理?yè)p傷，保護(hù)肺組織。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，BAPTA-AM改善ALI具有濃度或劑量依賴性，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中0.5 nmol·L-1時(shí)效果最佳，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中50 μg·kg-1時(shí)擁有最佳效果，作用效果與給藥劑量不是成正比。

綜上所述，BAPTA-AM具有抗炎和抗氧化損傷作用，能抑制損傷細(xì)胞NO的合成，提高細(xì)胞活性，減輕ALI小鼠肺水腫，改善肺組織病理變化，具有良好的治療ALI效果，有望為ALI的臨床治療帶來(lái)新的方案。