胡椒堿對(duì)檳榔堿促進(jìn)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響

陳鐘權(quán), 符春茹, 符鳳親, 陳 穎, 符昌文, 高凌峰

陳鐘權(quán), 符春茹, 符鳳親, 陳穎, 符昌文, 高凌峰, 海南醫(yī)學(xué)院機(jī)能學(xué)實(shí)驗(yàn)室 海南省海口市 571199

核心提要：本文通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)觀察胡椒堿對(duì)檳榔堿促進(jìn)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響, 并進(jìn)一步研究胡椒堿對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮的作用機(jī)制, 從而為胃腸功能紊亂性疾病的治療提供理論依據(jù), 具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景.

0 引言

胡椒堿是胡椒中主要活性成分. 胡椒堿在生物醫(yī)藥方面具有抗氧化[1]、鎮(zhèn)靜、抗驚厥[2]、抗抑郁[3]、抗腫瘤的作用[4]、抗消化系統(tǒng)潰瘍等作用[5]. 研究表明胡椒對(duì)離體平滑肌運(yùn)動(dòng)具有抑制作用, 但尚未見(jiàn)胡椒抑制消化道運(yùn)動(dòng)機(jī)制的報(bào)道[6]. 檳榔堿是檳榔中主要活性成分, 具有興奮擬副交感神經(jīng)和胃腸道平滑肌作用[7]; 檳榔堿可明顯增高家兔十二指腸腸管的張力, 減小收縮振幅, 不影響收縮頻率, 其興奮家兔十二指腸的作用可能由膽堿能M受體介導(dǎo), 并且涉及腸平滑肌細(xì)胞膜對(duì)異搏定敏感的Ca2+通道[8].

隨著人們生活節(jié)奏越來(lái)越緊湊、工作壓力越來(lái)越大, 加之飲食結(jié)構(gòu)不合理, 高血壓、胃腸道疾病已越來(lái)越常見(jiàn), 腹脹、腹瀉、便秘等消化道癥狀嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量. 本項(xiàng)目旨在研究胡椒堿對(duì)檳榔堿促進(jìn)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響, 在胡椒堿抑制家兔離體小腸平滑肌收縮振幅的基礎(chǔ)上, 進(jìn)一步觀察加入檳榔堿后促進(jìn)其家兔離體小腸平滑肌的收縮振幅, 從而開(kāi)發(fā)胡椒堿的藥用資源, 闡明胡椒堿對(duì)動(dòng)物胃腸道運(yùn)動(dòng)的調(diào)控機(jī)制, 為該藥在防治消化道疾病的應(yīng)用中提供理論依據(jù).

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 供試動(dòng)物： 健康成年家兔10只, 空腹24 h, 動(dòng)物自由飲水. 體重1.5-2.1 kg, 雌雄兼用, 由長(zhǎng)沙市天勤生物技術(shù)有限公司提供(scxk(湘)2014-0010).

1.1.2 藥品與儀器： 胡椒堿(純度97%, 由上海麥克林生化科技有限公司提供, CAS號(hào)： 94-62-2)、檳榔堿(純度97%, 由上海麥克林生化科技有限公司提供, CAS號(hào)：300-08-3)、羧甲基纖維素鈉(Carboxymethylcellulose sodium, CMC-Na)溶液(由上海麥克林生化科技有限公司提供, CAS號(hào)： 9004-32-4)、肝素(由上海麥克林生化科技有限公司提供, CAS號(hào)： 9041-08-1)、釕紅(純度95%, 由上海麥克林生化科技有限公司提供, CAS號(hào)：11103-72-3)、左旋硝基精氨酸甲酯(純度98%, 由上海源葉生物科技有限公司提供, CAS號(hào)： 51298-65-5); 自制(檳榔堿溶液2.54×10-5mol/L 10 mL, 胡椒堿溶液2.10×10-4mol/L、2.10×10-3mol/L、2.10×10-2mol/L各10 mL, 0.5%羧甲基纖維素鈉溶液500 ml, 新鮮臺(tái)氏液, 10-4mol/L阿托品溶液10 mL, 釕紅溶液1×10-3mol/L 10 mL, 左旋硝基精氨酸甲酯溶液1×10-4mol/L 10 mL, 肝素50 g/L 10 mL,蒸餾水5000 mL); BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司); HW-200型恒溫平滑肌槽(成都泰盟科技有限公司); 張力換能器(中國(guó)北京航天醫(yī)學(xué)工程研究院).

1.1.3 0.5%羧甲基纖維素鈉溶液的配制： 取2.5 g的羧甲基纖維素鈉粉末溶于500 mL的蒸餾水中.

1.1.4 胡椒堿溶液的配制： 精密稱取3份2 g胡椒堿粉末,分別裝入試劑瓶中, 用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液分別配制成3組不同濃度的胡椒堿溶液(2.10×10-4mol/L, 2.10×10-3mol/L, 2.10×10-2mol/L).

1.1.5 檳榔堿溶液的配制： 取10 g檳榔堿粉末, 裝入試劑瓶中, 用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液配制成2.54×10-5mol/L的檳榔堿溶液.

1.1.6 釕紅溶液的配制： 取0.79 mg釕紅粉末, 裝入試劑瓶中, 用蒸餾水配制成1×10-3mol/L的釕紅溶液.

1.1.7 左旋硝基精氨酸甲酯溶液的配制： 取0.27 mg左旋硝基精氨酸甲酯粉末, 裝入試劑瓶中, 用甲醇配制成1×10-4mol/L的左旋硝基精氨酸甲酯溶液.

1.1.8 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)準(zhǔn)備： 開(kāi)啟生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),預(yù)熱和調(diào)節(jié)張力換能器, 加蒸餾水入潔凈恒溫平滑肌槽內(nèi), 維持水溫37 ℃, 在內(nèi)槽加入新鮮臺(tái)氏液18 mL.

1.1.9 離體家兔腸道平滑肌的制備： 使用木錘敲擊動(dòng)物頭部致昏, 立即剖腹取出小腸置于臺(tái)式液中, 并將腸管分剪成1-1.5 cm長(zhǎng)的小段, 隨后用臺(tái)氏液將腸內(nèi)容物洗凈, 放入另一份臺(tái)氏液浸浴中備用. 用棉線結(jié)扎腸管兩端, 先將腸管置于盛有37 ℃恒溫臺(tái)氏液試管中洗凈, 然后將腸管固定在恒溫平滑肌槽內(nèi)37 ℃.

1.2 方法

1.2.1 羧甲基纖維素鈉溶液對(duì)離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響： 待小腸張力描記曲線穩(wěn)定, 注入0.5%羧甲基纖維素鈉溶液1 mL(陰性對(duì)照組), 觀察并記錄小腸張力描記曲線頻率和幅度的變化情況.

1.2.2 胡椒堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響：待腸管收縮穩(wěn)定后, 分別加入濃度為0.06 g/L、0.6 g/L、6 g/L的胡椒堿溶液1 mL, 加藥間隔時(shí)間為1-3 min, 觀察并記錄小腸張力描記曲線頻率和幅度的變化情況. 每次加1種藥物濃度完成后, 待家兔離體小腸平滑肌收縮平穩(wěn), 用溫的臺(tái)式液潤(rùn)洗小腸3次.

1.2.3 檳榔堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響：待腸管收縮穩(wěn)定后, 加入濃度為0.006 g/L的檳榔堿溶液1 mL, 加藥間隔時(shí)間為1 min, 觀察并記錄小腸張力描記曲線頻率和幅度的變化情況. 每次加1種藥物濃度完成后, 待家兔離體小腸平滑肌收縮平穩(wěn), 用溫的臺(tái)式液潤(rùn)洗小腸3次.

1.2.4 胡椒堿溶液與阿托品溶液分別對(duì)檳榔堿溶液作用后家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響： 待腸管收縮穩(wěn)定后, 胡椒堿+檳榔堿組和阿托品+檳榔堿組分別加入6 g/L胡椒堿溶液和10-4mol/L阿托品溶液1 mL, 觀察1 min, 再加入0.006 g/L檳榔堿溶液1 mL. 觀察并記錄小腸張力描記曲線頻率和幅度的變化情況. 每次加1組藥物濃度完成后, 待家兔離體小腸平滑肌收縮平穩(wěn),用溫的臺(tái)式液潤(rùn)洗小腸3次.

1.2.5 不同受體藥(肝素、釕紅、左旋硝基精氨酸甲酯)對(duì)胡椒堿產(chǎn)生的影響： 待腸管收縮穩(wěn)定后, 胡椒堿+肝素組、胡椒堿+釕紅組、胡椒堿+左旋硝基精氨酸甲酯組均先加入6 g/L胡椒堿溶液1 mL, 觀察1 min, 再分別加入50 g/L肝素、0.079 g/L釕紅、0.027 g/L左旋硝基精氨酸甲酯1 mL. 觀察并記錄小腸張力描記曲線頻率和幅度的變化情況. 每次加1組藥物濃度完成后, 待家兔離體小腸平滑肌收縮平穩(wěn), 用溫的臺(tái)式液潤(rùn)洗小腸3次.

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析, 計(jì)量資料以mean±SD表示, 采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析比較.P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P＜0.01表示差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

2 結(jié)果

2.1 羧甲基纖維素鈉溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響 向平滑肌槽內(nèi)加入羧甲基纖維素鈉溶液后,小腸平滑肌的收縮振幅和頻率基本沒(méi)有變化. 加入羧甲基纖維素鈉溶液作為陰性對(duì)照, 目的是觀察羧甲基纖維素鈉溶液對(duì)小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響, 結(jié)果顯示加入羧甲基纖維素鈉溶液前后小腸平滑肌收縮振幅和頻率無(wú)明顯變化, 統(tǒng)計(jì)學(xué)無(wú)顯著差異(P＞0.05, 圖1A, 圖2和表1, 表2).

表1 不同濃度胡椒堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮振幅的影響(mean±SD, g)

表2 不同濃度胡椒堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮頻率的影響(mean±SD, 次/分)

圖1 羧甲基纖維素鈉溶液(A)和低濃度(B)、中濃度(C)、高濃度(D)胡椒堿溶液分別對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖.

2.2 胡椒堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響0.06-6 g/L胡椒堿溶液能劑量依賴性抑制家兔小腸平滑肌收縮, 在較低濃度時(shí)對(duì)小腸平滑肌收縮振幅和頻率均無(wú)影響, 隨著藥物濃度的增加, 對(duì)小腸平滑肌收縮的抑制作用增強(qiáng), 與陰性對(duì)照組相比, 藥物濃度在0.6 g/L時(shí)對(duì)小腸平滑肌收縮的振幅抑制率具有極顯著差異(P＜0.01, 圖1B-D, 圖2A和表1), 藥物濃度在6 g/L時(shí)對(duì)頻率抑制率具有極顯著差異(P＜0.01, 圖1B-D, 圖2B, 表2).

2.3 胡椒堿對(duì)檳榔堿作用家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響 與對(duì)照組相比, 0.006 g/L檳榔堿對(duì)收縮振幅具有極顯著性的促進(jìn)作用(P＜0.01), 對(duì)收縮頻率具有顯著性的抑制作用(P＜0.05, 圖3); 與對(duì)照組相比, 先加入6 g/L胡椒堿溶液預(yù)處理后再加入0.006 g/L檳榔堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌的收縮振幅和頻率(P＞0.05)小于單個(gè)加入0.006 g/L檳榔堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌的收縮振幅和頻率, 見(jiàn)圖4; 可見(jiàn)6 g/L胡椒堿溶液對(duì)檳榔堿溶液作用家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的波形具有抑制作用.

2.4 阿托品溶液對(duì)檳榔堿溶液作用家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響 10-4mol/L的阿托品溶液對(duì)檳榔堿溶液誘導(dǎo)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的波形具有抑制作用, 與對(duì)照組相比, 10-4mol/L的阿托品溶液對(duì)收縮振幅具有極顯著性的抑制作用(P＜0.01), 對(duì)收縮頻率無(wú)影響, 即無(wú)顯著性差異(P＞0.05). 0.006 g/L檳榔堿溶液可以明顯地增強(qiáng)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的波形, 使收縮振幅明顯增加, 具有顯著性差異(P＜0.05), 對(duì)收縮頻率無(wú)影響, 見(jiàn)圖5.

圖2 胡椒堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的振幅(A)和頻率(B)的影響. bP＜0.01, 與加藥前相比.

圖3 檳榔堿對(duì)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響. A： 檳榔堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖; B： 檳榔堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮的振幅和頻率的影響, aP＜0.05, bP＜0.01 與對(duì)照組相比.

圖4 胡椒堿對(duì)檳榔堿誘導(dǎo)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響. A： 胡椒堿溶液對(duì)檳榔堿溶液作用家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖; B： 胡椒堿溶液對(duì)檳榔堿溶液作用家兔離體小腸平滑肌收縮的振幅和頻率的影響, aP＜0.05, 與對(duì)照組相比.

2.5 肝素溶液、釕紅溶液、左旋硝基精氨酸甲酯溶液對(duì)胡椒堿溶液舒張家兔離體小腸平滑肌的影響 與對(duì)照組相比, 6 g/L胡椒堿溶液對(duì)收縮振幅具有顯著性的抑制作用(P＜0.05), 50 g/L肝素溶液可增強(qiáng)胡椒堿溶液舒張家兔離體小腸平滑肌的收縮振幅(P＜0.05), 而對(duì)收縮頻率無(wú)影響, 見(jiàn)圖6. 與6 g/L胡椒堿溶液組相比, 0.079 g/L釕紅溶液對(duì)6 g/L胡椒堿溶液舒張家兔離體小腸平滑肌的作用無(wú)明顯影響(P＞0.05), 見(jiàn)圖7. 0.027 g/L左旋硝基精氨酸甲酯溶液均能增強(qiáng)胡椒堿溶液舒張家兔離體小腸平滑肌的收縮振幅和頻率 (P＜0.05), 見(jiàn)圖8.

圖5 阿托品溶液對(duì)檳榔堿溶液誘導(dǎo)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響. A： 阿托品溶液對(duì)檳榔堿溶液誘導(dǎo)家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖; B：阿托品溶液對(duì)檳榔堿溶液誘導(dǎo)家兔離體小腸平滑肌收縮的振幅和頻率的影響. bP＜0.01, 與對(duì)照組相比; dP＜0.05, 與阿托品組相比.

圖6 肝素溶液對(duì)胡椒堿溶液抑制家兔離體小腸平滑肌收縮的影響. A： 肝素溶液對(duì)胡椒堿溶液作用后家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖; B：肝素溶液對(duì)胡椒堿溶液作用后家兔離體小腸平滑肌收縮的振幅和頻率的影響. aP＜0.05, 與對(duì)照組相比; cP＜0.05, 與胡椒堿相比.

圖7 釕紅溶液對(duì)胡椒堿溶液抑制家兔離體小腸平滑肌收縮的影響. A： 釕紅溶液對(duì)胡椒堿溶液作用后家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖;B： 釕紅溶液對(duì)胡椒堿溶液作用后家兔離體小腸平滑肌收縮的振幅和頻率的影響, aP＜0.05與對(duì)照組相比.

3 討論

小腸的運(yùn)動(dòng)形式包括有緊張性收縮、蠕動(dòng)、分節(jié)運(yùn)動(dòng)等, 這些運(yùn)動(dòng)的發(fā)生都是小腸平滑肌收縮的具體外部表現(xiàn); 通過(guò)觀察小腸平滑肌收縮張力高低和收縮頻率快慢來(lái)判斷小腸平滑肌興奮性高低[9]. 消化道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收的主要部位是小腸, 小腸平滑肌收縮活動(dòng)有利于營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在小腸內(nèi)的消化和吸收. 小腸平滑肌收縮機(jī)制及各種因素對(duì)平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響, 是生理學(xué)的重要研究?jī)?nèi)容, 在臨床上對(duì)防治疾病等具有重要意義. 近年來(lái)消化道疾病的增多, 對(duì)人類身體健康構(gòu)成一定的威脅. 消化道疾病的發(fā)病原因主要是由于胃腸平滑肌極易受溫度、理化及藥物等因素的影響[10,11].

圖8 左旋硝基精氨酸甲酯溶液對(duì)胡椒堿溶液抑制家兔離體小腸平滑肌的影響. A： 左旋硝基精氨酸甲酯溶液對(duì)胡椒堿溶液作用后家兔離體小腸平滑肌收縮影響曲線圖; B： 左旋硝基精氨酸甲酯溶液對(duì)胡椒堿溶液作用后家兔離體平滑肌收縮的振幅和頻率的影響. aP＜0.05與對(duì)照組相比; cP＜0.05, 與胡椒堿相比.

目前研究認(rèn)為胃腸道上主要存在M膽堿受體、組胺受體、5-HT受體及多種胃腸激素等受體. 胃腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)由交感神經(jīng)、副交感神經(jīng)系統(tǒng)和存在腸壁內(nèi)的腸神經(jīng)系統(tǒng)控制[12]. 家兔離體腸段雖然失去外來(lái)神經(jīng)的支配, 但是壁內(nèi)神經(jīng)叢仍存在, 在適宜的條件下, 仍能保持平滑肌收縮的特性及腸壁神經(jīng)叢的作用[13]. 位于環(huán)形肌黏膜下邊緣與腸肌絲Cajal間質(zhì)細(xì)胞是小腸慢波活動(dòng)的起搏器和傳導(dǎo)者[14], 小腸的節(jié)律性活動(dòng)是受小腸的基本電節(jié)律(即慢波)所控制. Cajal間質(zhì)細(xì)胞自發(fā)活動(dòng)的產(chǎn)生和傳導(dǎo)易受離子環(huán)境、神經(jīng)遞質(zhì)和激素等生物活性物質(zhì)的影響. ICC產(chǎn)生起搏電流觸發(fā)的慢波電流屬于L2 Ca2+型電流, 因此, 平滑肌的舒縮活動(dòng)依賴于細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度的變化, 當(dāng)胞漿內(nèi)Ca2+升高到一定水平(1-50 μmol/L) 時(shí), 與肌鈣蛋白或肌調(diào)蛋白結(jié)合, 觸發(fā)平滑肌收縮[15].

生理狀態(tài)下, 胃腸道運(yùn)動(dòng)受自主神經(jīng)壁內(nèi)神經(jīng)叢的支配. 一定劑量的胡椒堿對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)表現(xiàn)為抑制作用.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 在低、中、高不同劑量的胡椒堿對(duì)正常離體腸管均具有不同程度的抑制作用, 當(dāng)胡椒堿劑量達(dá)6 g/L則有非常顯著性差異(P＜0.05), 提示在與中樞神經(jīng)、體液調(diào)控脫離的條件下, 胡椒堿對(duì)離體腸管有顯著的抑制作用. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 不同濃度的胡椒堿對(duì)家兔離體小腸平滑肌自發(fā)收縮活動(dòng)具有明顯的抑制作用. 由此推斷, 胡椒堿能抑制胃腸痙攣, 緩解腸胃疼痛, 對(duì)治療胃腸動(dòng)力疾病如腹瀉, 腹痛, 胃腸痙攣等有一定療效.

阿托品作用下檳榔堿對(duì)家兔小腸平滑肌收縮的影響, 在正常條件下, 待小腸平滑肌收縮后, 加入終濃度為10-4mol/L的阿托品溶液可使腸道平滑肌的收縮明顯減弱, 在此基礎(chǔ)上加入濃度為0.006 g/L的檳榔堿溶液, 使腸道平滑肌收縮明顯加強(qiáng), 說(shuō)明檳榔堿對(duì)阿托品具有顯著的拮抗作用.

在正常條件下, 待小腸平滑肌收縮后, 加入6 g/L胡椒堿溶液后, 離體腸管的收縮幅度下降, 再加入0.006 g/L檳榔堿溶液, 離體腸管的收縮幅度比單個(gè)加入0.006 g/L檳榔堿溶液的收縮幅度有一定的下降趨勢(shì), 說(shuō)明胡椒堿抑制檳榔堿促進(jìn)離體腸管的收縮幅度,具有M膽堿受體阻斷藥的藥理作用.

細(xì)胞內(nèi)釋放的鈣離子主要來(lái)自于肌漿網(wǎng), 肌漿網(wǎng)內(nèi)釋放的鈣離子主要通過(guò)三磷酸肌醇受體(inositol 1, 4,5-trisphosphate, IP3)和雷諾定受體(ryanodine)來(lái)完成. 當(dāng)這些受體被激活后, 可引起肌漿網(wǎng)內(nèi)鈣離子釋放, 從而引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增加, 誘導(dǎo)平滑肌收縮[16,17].

胡椒堿可能通過(guò)IP3或雷諾定受體途徑來(lái)完成其對(duì)腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的抑制作用. 為此, 本試驗(yàn)進(jìn)行了IP3阻斷劑肝素(Heparin, HP)和肌漿網(wǎng)ryanodine受體阻斷劑釕紅(ruthenium red, RR)預(yù)處理下胡椒堿對(duì)腸平滑肌的作用.結(jié)果顯示, 預(yù)先應(yīng)用IP可顯著減弱胡椒堿對(duì)腸平滑肌收縮的振幅(P＜0.05), 而預(yù)先應(yīng)用RR后, 對(duì)胡椒堿舒張腸平滑肌的作用無(wú)影響(P＞0.05), 由此推斷, IP3受體途徑受到抑制, 引起細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放減少可能介導(dǎo)胡椒堿舒張腸平滑肌的作用, 但雷諾定受體途徑并未介導(dǎo)胡椒堿對(duì)腸平滑肌的舒張作用機(jī)制.

據(jù)報(bào)道, 神經(jīng)遞質(zhì)NO通過(guò)激活平滑肌細(xì)胞內(nèi)的鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶, 使胞質(zhì)內(nèi)c GMP濃度增高, Ca2+濃度下降,誘導(dǎo)胃腸平滑肌的舒張[18-20]. 本試驗(yàn)采用NO合酶抑制劑L-NAME預(yù)處理腸平滑肌細(xì)胞, 胡椒堿舒張平滑肌作用明顯減弱(P＜0.05), 表明胡椒堿對(duì)腸平滑肌的抑制作用可能與NO濃度有關(guān), 但對(duì)其下游的鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶有無(wú)影響尚需進(jìn)一步研究.

通過(guò)胡椒堿對(duì)兔小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響研究, 表明胡椒堿可抑制自發(fā)性腸平滑肌收縮; 通過(guò)胡椒堿對(duì)檳榔堿促進(jìn)家兔離體小腸平滑肌運(yùn)動(dòng)的影響研究, 表明胡椒堿抑制檳榔堿促進(jìn)離體腸管的收縮幅度, 具有M膽堿受體阻斷藥的藥理作用; 通過(guò)阿托品作用下檳榔堿對(duì)家兔小腸平滑肌收縮的影響, 表明阿托品可使腸道平滑肌的收縮明顯減弱, 檳榔堿使腸道平滑肌收縮明顯加強(qiáng), 說(shuō)明檳榔堿對(duì)阿托品具有顯著的拮抗作用. HP和L-NAME預(yù)處理后可顯著增強(qiáng)胡椒堿的舒張作用, 而RR并沒(méi)有影響胡椒堿的舒張作用. 由此得出胡椒堿抑制兔腸平滑肌收縮的作用機(jī)制可能為增加小腸平滑肌NO濃度, 抑制IP3受體介導(dǎo)的內(nèi)鈣釋放, 最終使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低, 平滑肌舒張而達(dá)到對(duì)腸平滑肌的解痙作用. 胡椒堿對(duì)動(dòng)物腸平滑肌運(yùn)動(dòng)具有顯著的舒張作用, 因此該藥在胃腸功能紊亂性疾病的應(yīng)用中, 具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景.

文章亮點(diǎn)

實(shí)驗(yàn)背景

胡椒堿已經(jīng)被眾多研究證實(shí)是一個(gè)藥理作用非常廣泛的天然原料藥, 有研究證實(shí)了胡椒堿對(duì)胃腸道平滑肌的運(yùn)動(dòng)具有抑制作用, 但抑制作用機(jī)制目前尚未見(jiàn)到相關(guān)的報(bào)道, 有研究證實(shí)了檳榔堿對(duì)家兔十二指腸具有興奮作用, 其興奮十二指腸的作用機(jī)制可能由膽堿受體M受體介導(dǎo).

實(shí)驗(yàn)動(dòng)機(jī)

現(xiàn)代人們因生活節(jié)奏快, 工作壓力大而出現(xiàn)相應(yīng)的胃腸道疾病. 由于運(yùn)用一些藥物后出現(xiàn)一些不良反應(yīng), 因此開(kāi)發(fā)低毒性、低殘留的藥物意義重大. 本實(shí)驗(yàn)以胡椒堿和檳榔堿為基礎(chǔ), 闡明胡椒堿對(duì)動(dòng)物胃腸道運(yùn)動(dòng)的調(diào)控機(jī)制, 從而開(kāi)發(fā)胡椒堿的藥用資源, 為該藥在防治消化道疾病的應(yīng)用中提供理論依據(jù).

實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)

觀察胡椒堿、檳榔堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌的作用; 并探究不同受體藥物(肝素溶液、釕紅溶液、左旋硝基精氨酸甲酯溶液)與胡椒堿溶液對(duì)家兔離體小腸平滑肌收縮之間的機(jī)制作用, 發(fā)現(xiàn)胡椒堿、檳榔堿對(duì)消化道平滑肌的藥理作用.

實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)采用敲暈家兔進(jìn)行離體腸平滑肌恒溫灌流, 通過(guò)BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)測(cè)定其張力的變化, 采用了控制變量法和自身對(duì)比法, 便于實(shí)驗(yàn)的觀察和對(duì)比. 數(shù)據(jù)分析采用統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)進(jìn)行對(duì)比, 直觀得出有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)達(dá)到研究目的, 證明胡椒堿溶液抑制單個(gè)檳榔堿溶液促進(jìn)家兔離體小腸平滑肌的收縮振幅, 肝素溶液能增強(qiáng)胡椒堿舒張家兔離體小腸平滑肌收縮的作用, 釕紅溶液對(duì)胡椒堿舒張家兔小腸平滑肌的作用無(wú)明顯影響;左旋硝基精氨酸甲酯溶液能夠部分阻斷胡椒堿舒張家兔離體小腸平滑肌收縮的作用. 胃腸平滑肌過(guò)度收縮可引起腹痛腹瀉疾病, 本實(shí)驗(yàn)證明胡椒堿溶液具有M受體阻斷藥的藥理作用, 因此該藥在胃腸功能紊亂性疾病的應(yīng)用中具有廣闊的開(kāi)發(fā)前景.

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)胡椒堿能抑制家兔離體小腸平滑肌自發(fā)性收縮, 并通過(guò)胡椒堿對(duì)檳榔堿、阿托品對(duì)檳榔堿的拮抗作用, 推斷了胡椒堿可能存在M膽堿受體阻斷藥的藥理作用. 另外, 通過(guò)阻斷劑肝素、L-NAME預(yù)處理后顯著增強(qiáng)胡椒堿的舒張作用, 推斷胡椒堿抑制小腸平滑肌收縮的作用機(jī)制可能為增加小腸平滑肌NO濃度、抑制IP3受體介導(dǎo)的內(nèi)鈣釋放, 最終使細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度降低,而達(dá)到對(duì)腸平滑肌的解痙作用, 反映胡椒堿為臨床胃腸功能紊亂疾病診療提供有價(jià)值的參考.

由此能夠發(fā)現(xiàn)，林語(yǔ)堂在進(jìn)行翻譯的過(guò)程中，將他自身也放置在讀者的視角中，即“我們”中的一員。這樣的翻譯形式拉近了譯者與讀者之間的距離，使得西方讀者在閱讀的過(guò)程中感到更加親切，更容易接受作品中的內(nèi)容。

展望前景

胃腸道平滑肌主要存在M受體、組胺受體、5-HT受體等, 為此應(yīng)繼續(xù)研究胡椒堿抑制家兔離體小腸平滑肌收縮是否還與阻斷組胺、5-HT受體有關(guān); 同時(shí)將胡椒堿與臨床常見(jiàn)治療功能性腸病的藥物進(jìn)行比較, 更能凸顯其藥理價(jià)值.