豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷及抗體監(jiān)測

高沖 張平

摘 要 豬瘟（CSF）是由豬瘟病毒（CSFV）引起的一種具有高度傳染性的疫病，對養(yǎng)豬業(yè)危害極大，我國將其列為一類動物傳染病。近年來，豬瘟的非典型臨床表現(xiàn)和病理變化越來越常見，給該病的臨床診斷及有效防控帶來了難度。本文通過對豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷及抗體檢測技術(shù)進(jìn)行簡要綜述，以期為做好豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷與抗體監(jiān)測，加強(qiáng)豬瘟的防控和凈化提供參考。

關(guān)鍵詞 豬瘟；實(shí)驗(yàn)室診斷；抗體監(jiān)測

實(shí)驗(yàn)室檢測技術(shù)是畜禽疾病防控的重要手段，準(zhǔn)確而快速的診斷是畜禽疾病控制的前提。豬瘟檢測技術(shù)一直是該病防控研究的一個重要內(nèi)容。2007年我國農(nóng)業(yè)部發(fā)布了《豬瘟防治技術(shù)規(guī)范》和相關(guān)的系列診斷方法用于中國的豬瘟防控。近年來，隨著養(yǎng)殖業(yè)規(guī)模化、集約化的快速發(fā)展，非典型豬瘟流行普遍，與其他豬病混合感染現(xiàn)象日趨嚴(yán)重，豬瘟疫苗高密度100%全面免疫帶來了感染豬與免疫豬鑒別診斷的難題，加之非洲豬瘟的傳入，對豬瘟的實(shí)驗(yàn)室診斷及抗體監(jiān)測提出了更高的要求。近年來，隨著病毒學(xué)、組織培養(yǎng)技術(shù)、生物化學(xué)技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)飛速發(fā)展，大大推動了我國豬瘟檢測技術(shù)的研發(fā)進(jìn)程。

1 豬瘟病原學(xué)診斷技術(shù)

常用的豬瘟病原學(xué)診斷方法有病毒分離鑒定和實(shí)驗(yàn)動物法、雞新城疫病毒強(qiáng)化實(shí)驗(yàn)、免疫熒光實(shí)驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）和分子生物學(xué)檢測技術(shù)。

ELISA免疫檢測技術(shù)是當(dāng)前應(yīng)用最廣泛、發(fā)展最快的一項(xiàng)免疫檢測技術(shù)。豬瘟病毒抗原ELISA檢測方法主要是雙抗體夾心ELISA，也稱抗原捕獲ELISA（AC-ELISA），該方法優(yōu)點(diǎn)是操作簡單、自動化程度高、可做到高通量檢測大分子抗原，缺點(diǎn)是該方法只對強(qiáng)毒檢測效果良好，但對弱毒的監(jiān)測不敏感。

隨著分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，豬瘟病毒核酸檢測靈敏度呈現(xiàn)數(shù)量級的提高，RTPCR、RT-nPCR、熒光定量RT-PCR、RT-LAMP等多種分子生物學(xué)的檢測方法為豬瘟病毒的臨床快速診斷、基層場地實(shí)時便捷診斷、實(shí)驗(yàn)室檢測、流行病學(xué)調(diào)查及野毒株和疫苗株的鑒別診斷提供了強(qiáng)有力的支持。其中熒光定量RT-PCR方法是在普通RT-PCR的基礎(chǔ)上引入熒光染料，通過熒光PCR儀進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增，檢測樣品可以使組織病料也可以是血液樣品。該方法因敏感性高、全封閉反應(yīng)的優(yōu)勢，有效解決了RT-PCR方法容易漏檢以及RT-LAMP方法容易污染的問題，并且實(shí)現(xiàn)了對病毒含量的定量檢測，是目前對豬瘟病毒疑似感染病例進(jìn)行確診的最合適的方法。

2 豬瘟抗體監(jiān)測技術(shù)

合理、有效的免疫程序是提高群體免疫水平的保證，因此抗體水平的監(jiān)測是評價疫苗免疫效果的重要技術(shù)手段。常用的豬瘟抗體監(jiān)測方法有免疫熒光抗體中和試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)（IHA）。

近年來隨著免疫學(xué)、標(biāo)記技術(shù)、分子生物學(xué)技術(shù)以及有關(guān)新型技術(shù)的發(fā)展，ELISA檢測技術(shù)取得了突破性進(jìn)展，已發(fā)展出間接ELISA、阻斷ELISA、夾心ELISA、競爭ELISA、斑點(diǎn)ELISA和PPA-ELISA等，這些方法均已被用于豬瘟抗體的檢測，而其中豬瘟病毒間接ELISA和阻斷ELISA應(yīng)用最為廣泛，也是國際貿(mào)易指定的豬瘟抗體確診方法。同時一些新型檢測技術(shù)如疫芯片技術(shù)何熒光微球技術(shù)用于豬瘟抗體診斷的研究已經(jīng)顯示出良好的勢頭，開發(fā)這類技術(shù)用于豬瘟抗體的鑒別診斷具有良好的應(yīng)用前景。

豬瘟正向間接血凝試驗(yàn)是利用CSFV致敏紅細(xì)胞，在適宜的電解質(zhì)存在的條件下，進(jìn)行抗原抗體反應(yīng)，最終根據(jù)紅細(xì)胞的凝集判斷結(jié)果。該方法由于操作簡單，不需要特殊檢測儀器，肉眼即可判定結(jié)果，目前仍廣泛應(yīng)用于基層和技術(shù)落后地區(qū)，缺點(diǎn)是受主觀因素影響極大且重復(fù)性差。

間接ELISA是在已知抗原包被板中加入稀釋待檢血清，反應(yīng)后加入HRPO標(biāo)記的葡萄球菌蛋白A或其他可與抗體結(jié)合物質(zhì)，加入底物顯色，酶標(biāo)儀讀數(shù)后判定結(jié)果。該方法優(yōu)點(diǎn)是敏感性高，可用于大批量檢測；缺點(diǎn)是非特異性強(qiáng)，各試劑盒標(biāo)準(zhǔn)不一致，相關(guān)性差。

3 小結(jié)與展望

豬瘟目前仍是嚴(yán)重危害養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的疾病，采用正向間接血凝試驗(yàn)和ELISA對豬瘟疫苗免疫效果進(jìn)行檢測，采用熒光定量RT-PCR方法對豬瘟病毒感染的疑似病例進(jìn)行確診是豬瘟防控和凈化的關(guān)鍵。雖然我國豬瘟檢測技術(shù)已經(jīng)實(shí)現(xiàn)了與國際的接軌，但相信隨著獸醫(yī)診斷技術(shù)的不斷發(fā)展和完善，探索高通量自動化的檢測技術(shù)如生物芯片技術(shù)仍將是今后研究的熱點(diǎn)。

參考文獻(xiàn)：

[1] 黎振標(biāo)，任旭皎，劉健新，魯榮，李慧子，張彭濤，寧章勇.基于E-（rns）蛋白的豬非典型瘟病毒間接ELISA檢測方法的建立[J/OL].中國動物傳染病學(xué)報：1-9[2018-12-21].

[2]鄧銀燕.佛山市高明區(qū)春防豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病、豬O型口蹄疫血清學(xué)調(diào)查分析[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技，2018，43（05）：37-38+48.

[3]王鳳武，李曉奇，耿萬恒，云伏雨，趙振華，閆紅霞，趙世華.非洲豬瘟與典型豬瘟的診斷與防控[J].畜牧與飼料科學(xué)，2018，39（11）：103-106.

[4]林彥星，曹琛福，楊俊興，阮周曦，吳江，呂建強(qiáng)，花群義.非洲豬瘟病毒實(shí)驗(yàn)室診斷方法的研究進(jìn)展[J].中國獸醫(yī)學(xué)報，2018，38（10）：2020-2024+2032.