蘇云金芽胞桿菌制劑及其與小卷蛾斯氏線蟲對腰果重要害蟲的作用效果

張中潤 高燕 黃偉堅(jiān) 黃海杰

摘? 要? 室內(nèi)測定了蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis，Bt）對腰果重要害蟲腰果細(xì)蛾（Acrocercops syngramma）和腰果云翅斑螟（Nephopteryx sp.）幼蟲的作用效果。研究表明，在500或1000倍濃度下，Bt對低齡（1～3齡）腰果細(xì)蛾幼蟲的致死作用較強(qiáng)，致死率為70%～100%，但對高齡（4齡和5齡）腰果細(xì)蛾幼蟲致死作用較低（20.0%～52.5%）。Bt對腰果云翅斑螟3齡幼蟲的致死作用相對較慢，在500倍濃度下作用120 h后致死率為75%。2000倍Bt與200 IJs/皿小卷蛾斯氏線蟲Steinernema carpocapsae All對腰果云翅斑螟聯(lián)合作用48 h后表現(xiàn)為增效作用，致死率達(dá)90%。

關(guān)鍵詞? 蘇云金芽胞桿菌;小卷蛾斯氏線蟲;腰果云翅斑螟;腰果細(xì)蛾;致死率

中圖分類號? S476; S436.67? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼? A

腰果（Anacardium occidentale Linnaeus）是海南省特色熱帶經(jīng)濟(jì)作物，主要分布在海南省樂東縣、昌江縣、東方市和陵水縣[1]。腰果細(xì)蛾

Acrocercops syngramma Meyrick （Lepidoptera： Gracillariidae）和腰果云翅斑螟Nephopteryx sp. （Lepidoptera： Pyralidae）是腰果重要的鱗翅目害蟲[2]。腰果細(xì)蛾主要取食腰果嫩葉，為害嚴(yán)重時(shí)腰果嫩葉被害率可達(dá)90%以上，對腰果葉片造成了永久性傷害， 嚴(yán)重影響腰果植株的光合作用[3-5];而腰果云翅斑螟幼蟲可蛀食正在發(fā)育或已成熟的腰果果梨，也可蛀害幼嫩堅(jiān)果，為害高峰期時(shí)可造成60%腰果被害，一些腰果園受害后大幅減產(chǎn)[6-8]。

蘇云金芽胞桿菌（Bacillus thuringiensis Berliner，Bt）是一種存在于土壤中的革蘭氏陽性桿狀細(xì)菌，對許多農(nóng)業(yè)、林業(yè)、衛(wèi)生害蟲特別是鱗翅目幼蟲具有顯著的毒殺作用，且對非靶標(biāo)生物無害[9-11]。Bt是目前研究最多、應(yīng)用最廣的生防微生物之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，Bt制劑約占全球微生物殺蟲劑總量的95%以上，同時(shí)約占全球整個(gè)殺蟲劑市場的2%左右[12]。目前，已有報(bào)道Bt可應(yīng)用于防治多種鱗翅目害蟲如分月扇舟蛾（Clostera anastomosis L.）[13]、小菜蛾[Plutella xylostella （L.）][14]、亞洲玉米螟[Ostrinia furnacalis （Guenée）][15]、稻縱卷葉螟（Cnaphalocrocis medinalis Guenée）[16]和甜菜夜蛾[Spodoptera exigua （Hübner）][17]等。

目前，腰果重要鱗翅目害蟲腰果細(xì)蛾和腰果云翅斑螟主要以化學(xué)防治為主[4， 18-19]，也有研究發(fā)現(xiàn)抗蟲性較強(qiáng)的腰果品系[4]，但還未能大面積推廣應(yīng)用。因此，測試生物防治制劑Bt對腰果重要害蟲的控制效果，有助于豐富和完善腰果重要害蟲生物防控方法。但考慮到Bt制劑在實(shí)際應(yīng)用中還存在防治效果不穩(wěn)定、殺蟲速度慢、殺蟲譜窄等缺點(diǎn)[20-21]，本文除了在室內(nèi)測定Bt對腰果重要害蟲腰果細(xì)蛾和腰果云翅斑螟的作用效果，還初步研究了Bt與昆蟲病原線蟲對腰果云翅斑螟的聯(lián)合作用效果，為有效防治腰果重要害蟲提供技術(shù)支撐。

1? 材料與方法

1.1? 材料

昆蟲：腰果細(xì)蛾和腰果云翅斑螟幼蟲從腰果園采集后，置于（26±1）℃下飼養(yǎng)觀察24 h，未發(fā)現(xiàn)異常的種群用于試驗(yàn)。參照Athalye等[22]和羅永明等[7]的方法分別判定腰果細(xì)蛾幼蟲和腰果云翅斑螟幼蟲齡期。

藥劑：Bt，有效成分含量32000 IU/mg，湖北康欣農(nóng)用藥業(yè)有限公司。

昆蟲病原線蟲：小卷蛾斯氏線蟲Steinernema carpocapsae （Weiser）的All品系。感染期幼蟲（IJs，infective juveniles）由廣東省昆蟲研究所以人工固體培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得后引進(jìn)[23]。引進(jìn)的昆蟲病原線蟲以黃粉蟲Tenebrio molitor L.幼蟲進(jìn)行繁殖獲取感染期幼蟲，然后以淺水層方法貯存于（10±1）℃條件下用于試驗(yàn)，貯存期不超過15 d[24]。

1.2? 方法

1.2.1? 不同濃度Bt對腰果細(xì)蛾幼蟲侵染力? 試驗(yàn)設(shè)4個(gè)不同Bt藥液濃度處理，分別為500、1000、2000和4000倍液，同時(shí)設(shè)清水對照。從腰果園中采集帶有腰果細(xì)蛾的腰果葉片，以不同試驗(yàn)濃度的Bt藥液或清水進(jìn)行噴霧處理。然后將處理后的腰果葉片置于墊了2層中速定性濾紙的9 cm直徑培養(yǎng)皿中，再置于（26±1）℃黑暗條件下。由于不同腰果葉片上的腰果細(xì)蛾幼蟲數(shù)量和齡期存在差異，試驗(yàn)時(shí)藥液或清水處理的不同齡期腰果細(xì)蛾幼蟲均多于試驗(yàn)所需。處理24 h后，隨機(jī)觀察各個(gè)處理和對照不同齡期腰果細(xì)蛾幼蟲的存活情況，每個(gè)齡期隨機(jī)觀察幼蟲數(shù)量為40頭。以10頭幼蟲為一個(gè)處理，重復(fù)4次，清水處理為對照。

1.2.2? Bt對腰果云翅斑螟幼蟲作用效果? 試驗(yàn)設(shè)4個(gè)不同Bt藥液濃度處理：500、1000、2000和4000倍液，同時(shí)設(shè)清水對照。從腰果園中采集新鮮腰果果梨并切塊成片（3 cm2 cm0.2 cm），放入不同試驗(yàn)濃度的Bt藥液或清水中浸泡5 s，然后取出在陰涼黑暗處晾干。4 h后，將晾干的果梨置于墊了2層中速定性濾紙的9 cm直徑培養(yǎng)皿中，同時(shí)挑入10條3齡腰果云翅斑螟幼蟲，再將培養(yǎng)皿置于（26±1）℃黑暗條件下。重復(fù)4次，24 h后觀察記錄各個(gè)處理和對照腰果云翅斑螟幼蟲死亡數(shù)量。

1.2.3? Bt與昆蟲病原線蟲All品系對腰果云翅斑螟幼蟲的聯(lián)合作用? 從腰果園中采集新鮮腰果果梨并切塊成片（3 cm2 cm0.2 cm），放入試驗(yàn)所需濃度的Bt藥液或清水中浸泡5 s，然后取出在陰涼黑暗處晾干。4 h后，將晾干的果梨置于墊了2層中速定性濾紙的9 cm直徑培養(yǎng)皿中，同時(shí)挑入10條3齡腰果云翅斑螟幼蟲，再將培養(yǎng)皿置于（26±1）℃黑暗條件下。設(shè)Bt 2000倍藥液單獨(dú)處理、線蟲200 IJs/皿單獨(dú)處理、Bt 2000倍藥液與線蟲200 IJs/皿聯(lián)合作用處理和清水對照。重復(fù)4次，24 h和48 h后觀察記錄各個(gè)處理和對照腰果云翅斑螟幼蟲死亡數(shù)量，同時(shí)觀察腰果云翅斑螟幼蟲行為反應(yīng)。

1.3? 數(shù)據(jù)分析

百分?jǐn)?shù)值均經(jīng)反正弦變換后，以SPSS軟件進(jìn)行方差分析，多重比較采用LSD法。

由2檢驗(yàn)判斷線蟲與藥劑聯(lián)合作用效果[25-28]。各個(gè)處理參試?yán)ハx的死亡率由死亡蟲數(shù)除以處理總蟲數(shù)，并且轉(zhuǎn)換為校正死亡率[15]。線蟲與藥劑混用對參試?yán)ハx的期望致死數(shù)ME由期望致死率M=MN+MI（1MN），乘以參試?yán)ハx總數(shù)計(jì)算而得，其中MN和MI分別為線蟲和藥劑單獨(dú)處理參試?yán)ハx的校正死亡率。2=（MNIME）2/ME，其中MNI為線蟲與藥劑混用對參試?yán)ハx的實(shí)際校正死亡數(shù)，ME為線蟲與藥劑混用對參試?yán)ハx的期望致死數(shù)。計(jì)算出的2值與2值表進(jìn)行比較。當(dāng)2<3.84（1df和p=0.05）時(shí)，顯示2種殺蟲因子混用表現(xiàn)為相加作用;當(dāng)2≥3.84（1df和p=0.05）及MNIME時(shí)，顯示2種殺蟲因子混用表現(xiàn)為增效作用。

2? 結(jié)果與分析

2.1? Bt對腰果細(xì)蛾幼蟲的作用效果

結(jié)果表明，不同濃度蘇云金芽胞桿菌對腰果細(xì)蛾幼蟲的致死率差異顯著，5個(gè)不同齡期的腰果細(xì)蛾幼蟲死亡率均隨著Bt測試濃度的提高而上升（表1）。

不同齡期腰果細(xì)蛾幼蟲對同一濃度的蘇云金芽胞桿菌敏感性也不同。從測試的4個(gè)濃度看，1齡幼蟲對Bt的敏感性最高;其次為2齡和3齡幼蟲，它們二者的敏感性在4個(gè)測試濃度中均無顯著差異;4齡和5齡幼蟲對Bt的敏感性較低，在4個(gè)測試濃度中均顯著低于1齡幼蟲，而它們二者的敏感性在4個(gè)測試濃度中除4000倍外均無顯著差異。

2.2? Bt對腰果云翅斑螟幼蟲的作用效果

試驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度蘇云金芽胞桿菌對腰果云翅斑螟幼蟲的致死率有差異，一般測試濃度越高，幼蟲死亡率也越高（表2）。在不同測試濃度下，腰果云翅斑螟幼蟲的死亡率普遍隨著測試時(shí)間延長而提高。測試24 h和48 h時(shí)，4個(gè)測試濃度的幼蟲死亡率均無顯著差異。測試72、96、120 h時(shí)，500倍、1000倍和2000倍的測試濃度幼蟲死亡率均顯著高于4000倍，但500倍測試濃度的幼蟲死亡率在測試72、96、120 h時(shí)與1000倍和2000倍差異不顯著。

2.3? Bt與小卷蛾斯氏線蟲All品系的聯(lián)合作用效果

蘇云金芽胞桿菌單獨(dú)作用于腰果云翅斑螟幼蟲24 h后觀察，未死亡的腰果云翅斑螟幼蟲受驚擾后表現(xiàn)出反應(yīng)遲鈍、活動減少的現(xiàn)象;48 h后，未死亡幼蟲受驚擾后表現(xiàn)出活動急劇減少甚至不活動的現(xiàn)象。而對照幼蟲在試驗(yàn)48 h后反應(yīng)依舊

靈活，受到驚擾即可迅速移動。

試驗(yàn)結(jié)果表明，蘇云金芽胞桿菌與小卷蛾斯氏線蟲All品系共同作用24 h后，對腰果云翅斑螟幼蟲表現(xiàn)為相加作用;48 h后，二者對腰果云翅斑螟幼蟲表現(xiàn)為顯著的增效作用（表3），致死率達(dá)90%。

3? 討論

本文初步研究表明，蘇云金芽胞桿菌對腰果重要害蟲腰果細(xì)蛾特別是低齡幼蟲（1～3齡）有良好的作用效果，在今后的田間防治中可以作為腰果細(xì)蛾的防控手段之一。但本研究也發(fā)現(xiàn)Bt對腰果細(xì)蛾高齡（4齡和5齡）幼蟲毒力作用較弱，在田間應(yīng)用時(shí)應(yīng)抓住低齡幼蟲發(fā)生初期進(jìn)行應(yīng)用。在海南省腰果種植區(qū)，腰果細(xì)蛾的初發(fā)期為8—9月腰果嫩梢期，大概在11—12月進(jìn)入高發(fā)期[2]。因此，在田間應(yīng)用Bt防治腰果細(xì)蛾時(shí)，較佳的施用時(shí)間為8—9月害蟲為害初期。

Bt對腰果云翅斑螟幼蟲的毒力作用相對較弱，作用效果也很慢，在最高的試驗(yàn)濃度500倍作用120 h，致死率僅為75%。因此，與其他殺蟲因子如昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用有可能提高Bt單劑的作用效果。Oestergaard等[29]發(fā)現(xiàn)，Bt與小卷蛾斯氏線蟲聯(lián)合作用對歐洲大蚊Tipula paludosa Meigen低齡幼蟲可以取得增效作用。Salem等[30]也發(fā)現(xiàn)Bt與小卷蛾斯氏線蟲對斜紋夜蛾Spodoptera littoralis （Boisd） 2齡和5齡幼蟲可以取得增效作用。同時(shí)，在前期研究中，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)小卷蛾斯氏線蟲All品系對腰果云翅斑螟低齡幼蟲（1～3齡）有一定的控制潛力[31]。

在本研究中，當(dāng)蘇云金芽胞桿菌與昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用時(shí)，蘇云金芽胞桿菌可能使腰果云翅斑螟幼蟲活動減少，有利于昆蟲病原線蟲侵染，但由于昆蟲病原線蟲作用效果與Bt一樣較為緩慢，聯(lián)合作用24 h后死亡的腰果云翅斑螟幼蟲還較少，Bt與昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用只表現(xiàn)為相加作用。試驗(yàn)48 h后，在蘇云金芽胞桿菌的作用下，幼蟲的活動進(jìn)一步減少，更加有利于昆蟲病原線蟲侵染，因此Bt和昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用對腰果云翅斑螟幼蟲表現(xiàn)出良好的增效作用。因此，在今后的田間試驗(yàn)中，可進(jìn)一步研究Bt和昆蟲病原線蟲聯(lián)合作用在田間對腰果云翅斑螟幼蟲的作用效果，期望可以降低昆蟲病原線蟲的使用劑量，同時(shí)提高對腰果云翅斑螟幼蟲的殺蟲速度。

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