醫(yī)院制劑復(fù)方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定

劉敏 劉俊麗 田佳懿

[摘要] 目的 建立紫外-可見分光光度法測定醫(yī)院制劑復(fù)方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量，以更好地控制該藥物質(zhì)量，保證用藥安全。 方法 采用紫外-可見分光光度法，于568 nm波長處測定硫酸卡那霉素的含量。結(jié)果 硫酸卡那霉素質(zhì)量濃度在0.1～0.5 mg/mL范圍內(nèi)與紫外吸收度的線性關(guān)系良好（r = 0.9999），平均加樣回收率為100.35%，RSD為0.66%（n = 9）。 結(jié)論 該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于醫(yī)院制劑復(fù)方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定。

[關(guān)鍵詞] 紫外-可見分光光度法；醫(yī)院制劑；硫酸卡那霉素；含量測定

[中圖分類號] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-7210（2019）04（c）-0109-04

Determination of kanamycin sulfate in hospital preparation Compound Diphenhydramine Nasal Drops

LIU Min LIU Junli TIAN Jiayi ZENG Weixin

Department of Pharmacy， Beijing Shijitan Hospital， Capital Medical University， Beijing 100038， China

[Abstract] Objective To establish a method for the determination of kanamycin sulfate in Compound Diphenhydramine Nasal Drops by ultraviolet-visible spectrophotometry so as to better control the quality of the drug and ensure its safety of medication. Methods The content of kanamycin sulfate was determined by ultraviolet-visible spectrophotometry at 568 nm. Results The linear relationship between the concentration of kanamycin sulfate and UV absorbance in the range of 0.1-0.5 mg/mL was good （r = 0.9999）， the average recovery was 100.35%， and the RSD was 0.66% （n = 9）. Conclusion The method is simple， accurate and reproducible. It can be used for the determination of kanamycin sulfate in hospital preparation Compound Diphenhydramine Nasal Drops.

[Key words] Ultraviolet-visible spectrophotometry； Hospital preparation； Kanamycin sulfate； Content determination

復(fù)方苯海拉明滴鼻液是液是北京中醫(yī)藥大學(xué)附屬護(hù)國寺中醫(yī)醫(yī)院的傳統(tǒng)制劑，主要有效成分為鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿以及硫酸卡鈉霉素，輔料為羥苯乙酯和氯化鈉，主要用于治療過敏性鼻炎、鼻竇炎及肥大性鼻炎，具有很好的療效。然而，其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量測定[1]，未對硫酸卡那霉素的含量進(jìn)行控制，不能全面地評價該制劑的質(zhì)量。為保證用藥安全，依據(jù)《北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)化學(xué)制劑質(zhì)量研究技術(shù)指導(dǎo)原則》[2]，本研究建立了復(fù)方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定方法。2015年版《中華人民共和國藥典》（二部）[3]中采用高效液相蒸發(fā)光檢測法測定硫酸卡那霉素的含量，但該方法所需要使用的儀器設(shè)備昂貴，且對操作要求較高，不利于醫(yī)院制劑的快速分析。本研究參考2014年版《北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)程》（第一冊）[4]，建立了硫酸卡那霉素紫外-可見分光光度的含量測定方法，該方法操作簡便、重現(xiàn)性良好、結(jié)果可靠，可用于復(fù)方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量測定。

1 儀器與試劑

UV2401紫外-可見分光光度儀（日本島津公司）、BT125D十萬分之一電子分析天平（賽多利斯公司）、S220型酸度計（瑞士梅特勒公司）、電熱恒溫水浴鍋（上海赫田科學(xué)儀器有限公司）。

復(fù)方苯海拉明滴鼻液（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院制劑室制備；批號分別為：20171101、20171102、20171103）、復(fù)方苯海拉明滴鼻液陰性樣品（首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京世紀(jì)壇醫(yī)院制劑室制備）、硫酸卡那霉素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：96066，純度為99.96%）。

乙醇、茚三酮、乙酸、乙酸鈉等試劑均為分析純，實驗用水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 茚三酮溶液 精密稱取水合茚三酮1.0000 g，用無水乙醇溶解后，置100 mL容量瓶中，用無水乙醇稀釋至刻度，即得10.0 g/L的茚三酮溶液；避光低溫保存，現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.1.2 乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（pH 5.4） 稱取50.0 g乙酸鈉（CH3COONa·3H2O）于燒杯中，加入150 mL純化水，用移液管移取2.50 mL冰醋酸，加熱溶解，冷卻后轉(zhuǎn)移到250 mL容量瓶中，加水定容至刻度，即得。

2.1.3 羥苯乙酯貯備液 精密稱定羥苯乙酯對照品3.00 mg，置于10 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.4 供試品貯備液 精密稱定硫酸卡那霉素對照品適量，分別置100 mL容量瓶中，再精密稱定氯鹽酸苯海拉明1.25 mg，鹽酸麻黃堿10.00 mg，氯化鈉7.00 mg，精密吸取羥苯乙酯貯備液1.00 mL，置于該容量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.1.5 供試品溶液 精密吸取復(fù)方苯海拉明滴鼻液5.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即得。

2.1.6 硫酸卡那霉素對照品溶液 精密稱定硫酸卡那霉素對照品適量，加水溶解并定容稀釋制成每1 mL含硫酸卡那霉素0.25 mg的溶液，即得。

2.1.7 陰性對照溶液 按處方比例制備不含硫酸卡那霉素的陰性樣品，并從中精密量取5.00 mL，置于100 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，即得。

2.2 檢測方法

精密吸取供試品溶液1.00 mL置于25 mL比色管中，分別加入1.00 mL乙酸-乙酸鈉緩沖溶液（pH 5.4）和1.00 mL茚三酮溶液（10.0 g/L），混勻后于沸水浴中加熱20 min，冷卻至室溫后，用水定容至刻度線，混勻，靜置15 min，于568 nm波長處測定其吸光度。

2.3 檢測波長的選擇

取上述制備好的供試品溶液及陰性對照溶液，分別在550～650 nm進(jìn)行掃描，硫酸卡那霉素對照品溶液在568 nm波長處有較大吸收；陰性對照溶液在550～650 nm無明顯的紫外吸收。該制劑中所含其他藥物及輔料在568 nm波長處對硫酸卡那霉素的紫外吸收無干擾。故選擇568 nm處為硫酸卡那霉素的檢測波長。見圖1。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

取硫酸卡那霉素對照品適量，按照“2.1.6”項下方法制備成1 mg/mL的硫酸卡納霉素對照品儲備液，分別精密吸取上述溶液1、2、3、4、5 mL，置于10 mL容量瓶中，按“2.1.6”項下方法制備一系列濃度梯度的對照品溶液，并按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度。以硫酸卡那霉素的濃度為橫坐標(biāo)（X），吸光度為縱坐標(biāo)（Y），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到硫酸卡那霉素回歸方程：Y=2.091X-0.048（r = 0.9999）。硫酸卡那霉素在0.1～0.5 mg/mL與吸光度線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗

取“2.1.6”項下硫酸卡那霉素對照品溶液，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，連續(xù)測定6次。其吸光度的RSD值為0.57%（n = 6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取復(fù)方苯海拉明滴鼻液（批號：20171101）適量，按“2.1.5”項下方法制備一系列濃度梯度的供試品溶液，于陰涼處密閉放置，分別于30、60、90、120、150、180 min按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度。其吸光度的RSD為1.32%，提示供試品溶液在陰涼處密閉放置3 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗

取同一復(fù)方苯海拉明滴鼻液（批號：20171102）6份，按“2.1.5”項下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，連續(xù)測定6次。其吸光度的RSD值為0.76%，提示該方法的重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

取含量的已知復(fù)方苯海拉明滴鼻液（批號：20171 102）適量，參考2015年版《中華人民共和國藥典》（四部，通則9101）[3]，并加入取樣量中硫酸卡那霉素含量的80%、100%、120%的硫酸卡那霉素對照品，每個濃度各3份，按照“2.1.5”項下供試品溶液制備方法制備，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，計算硫酸卡那霉素的含量及其回收率。硫酸卡那霉素的平均加樣回收率為100.35%，RSD值為0.66%，提示該方法準(zhǔn)確性良好。見表1。

2.9 含量測定

取3批復(fù)方苯海拉明滴鼻液（批號：20171101、20171102、20171103），分別按“2.1.5”項下方法制備供試品溶液，按照“2.2”項下檢測方法測定其吸光度，計算硫酸卡那霉素的含量。3批樣品中硫酸卡那霉素的含量分別為5.1204、5.0876、5.1765 mg/mL，分別為標(biāo)示量的102.05%、101.75%、103.53%。

3 討論

原復(fù)方苯海拉明滴鼻液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量測定，未對硫酸卡那霉素的含量進(jìn)行控制。硫酸卡那霉素是臨床上常用的一種氨基糖苷類的光譜抗生素[5]，具有很好的水溶性，其性質(zhì)穩(wěn)定，價格低廉，對大多數(shù)革蘭陰性菌，如大腸埃希菌、沙門菌、變形桿菌、多殺性巴氏桿菌等，有較強(qiáng)的抗菌作用[6-7]。硫酸卡那霉素也具有一定的毒性，不但有可能使機(jī)體產(chǎn)生過敏反應(yīng)，而且濃度過高時，也對神經(jīng)系統(tǒng)、腎臟系統(tǒng)產(chǎn)生毒性[8-9]。因此，對制劑中的硫酸卡那霉素的含量進(jìn)行控制，具有十分重要的意義，有助于保證藥品質(zhì)量，確保用藥安全。

相關(guān)文獻(xiàn)中記載的硫酸卡那霉素的含量測定方法有微生物法[10]、酶聯(lián)免疫法[11]、高效液相蒸發(fā)光檢測法[12-13]、旋光法[14]、熒光法[15]、紫外-可見分光光度法[16]、電化學(xué)法[17]等?？紤]到醫(yī)院藥檢室設(shè)備條件有限[18]，本研究建立了紫外-可見分光光度法測定復(fù)方苯海拉明滴鼻液中硫酸卡那霉素的含量。紫外-可見分光光度法操作簡單、分析成本低、準(zhǔn)確度高、快速且易于推廣[19]，適用于醫(yī)院制劑的快速檢測。

本研究建立的硫酸卡那霉素的含量測定方法，雖然參考了2014年版《北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)程》（第一冊）[4]中的硫酸卡那霉素的含量測定方法，但由于處方中的其它藥物及輔料成分有了很大的變化，因此本研究重點考察了組方中鹽酸苯海拉明、鹽酸麻黃堿及其它輔料成分對硫酸卡那霉素含量測定的影響。本研究陰性對照品溶液在568 nm處無紫外吸收，故排除了該制劑中其它成分的干擾。

此外，2014年版《北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)程》（第一冊）[4]中的硫酸卡那霉素的含量測定方法的前處理采用鹽酸苯肼溶液，其與硫酸卡那霉素反應(yīng)生成絡(luò)合物，在可見光區(qū)出現(xiàn)明顯的褪色峰，利用褪色峰的吸光度與硫酸卡那霉素濃度的相關(guān)性，測定硫酸卡那霉素的含量[20]。茚三酮是一種用于檢測或者一級胺以及二級胺的試劑[21]。硫酸卡那霉素中含有較多的氨基，茚三酮與氨基酸機(jī)構(gòu)中的氨基作用可發(fā)生顯色反應(yīng)，其方法更為簡便、反應(yīng)靈敏、顯色速度快，所需試劑較為廉價，故本研究選用茚三酮作為顯色劑。

綜上，本研究建立了紫外-可見分光光度法以測定醫(yī)院制劑復(fù)方苯海拉明滴鼻液中的硫酸卡那霉素含量。該方法方法操作簡便、分析速度快、結(jié)果準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為復(fù)方苯海拉明滴鼻液的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 劉煒，曾蔚欣，劉禮斌，等.反相離子對高效液相色譜法測定復(fù)方苯海拉明滴鼻液中鹽酸苯海拉明和鹽酸麻黃堿的含量[J].中國藥房，2011，22（41）：3894-3896.

[2] 北京市食品藥品監(jiān)督管理總局.北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)程[S].北京：中國商業(yè)出版社，2014：183-190.

[3] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].2015年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015.

[4] 北京市食品藥品監(jiān)督管理總局.北京市醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑規(guī)程[M].北京：中國商業(yè)出版社，2014：113-114.

[5] 鞠建剛，杜迎彬.注射用硫酸卡那霉素有關(guān)物質(zhì)分析方法研究[J].山東化工，2015，44（17）：82-86.

[6] 湛海粼，劉紹璞，胡小莉，等.苯胺藍(lán)褪色分光光度法測定卡那霉素[J].西南師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2004， 29（1）：90-92.

[7] 張楊慧，蔣孟虹，秦峰，等.氨基糖苷類抗菌藥物分析方法的思考及展望[J].中國藥師，2018，21（6）：1082-1085， 1089.

[8] 張雪嬌，劉春葉，楊黎燕，等.可見分光光度法測定卡那霉素的含量[J].理化檢驗化學(xué)分冊，2016，52（5）：510-513.

[9] 張志存，余洪猛，劉全，等.硫酸卡那霉素對成年大鼠的耳毒性效應(yīng)[J].生理學(xué)報，2011，63（2）：171.

[10] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（三部）[S].2000年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：59.

[11] 王蘭，畢華，饒春明.應(yīng)用ELISA測定睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子中卡那霉素殘留量[J].藥物分析雜志，2011，31（6）：1064-1066.

[12] 李珉，侯金鳳，陸巖，等.HPLC-CAD法測定硫酸卡那霉素及注射液含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國抗生素雜志，2018， 43（3）：341-347.

[13] 王金鳳，楊化新，朱俐，等.HPLC-NQAD和HPLC-ELSD法測定硫酸卡那霉素注射劑的含量[J].藥物分析雜志，2014（4）：644-648.

[14] 黃麗娟，韓業(yè)超，馮澤，等.旋光法快速測定硫酸卡那霉素注射液的含量[J].吉林畜牧獸醫(yī)，2004（4）：49-50.

[15] 毛永強(qiáng)，胡美娜，李娜，等.同步熒光光譜法直接測定尿液中卡那霉素[J].分析科學(xué)學(xué)報，2016，32（2）：253-256.

[16] 殷寶劍，武海霞，吳慧芳，等.紫外可見分光光度法應(yīng)用于抗生素類藥物檢測[J].凈水技術(shù)，2017，36（9）：23-26.

[17] 方賓，胡勝水，李培標(biāo)，等.卡那霉素的單掃描示波極譜測定[J].分析化學(xué)，1989，7（7）：636-638.

[18] 黃利群.醫(yī)院制劑發(fā)展的制約因素與方向研究[J].按摩與康復(fù)醫(yī)學(xué)，2018，9（5）：4-5.

[19] 李蘭英，鄭國金.紫外-可見分光光度法在藥物分析中的應(yīng)用[J].中國醫(yī)藥指南，2013，11（30）：295-297.

[20] 湛海粼，劉紹璞，胡小莉，等.苯胺藍(lán)褪色分光光度法測定卡那霉素[J].西南師范大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2004， 29（1）：90-92.

[21] 朱文祥，謝學(xué)輝，馮帆，等.茚三酮定量蛋白質(zhì)方法的改進(jìn)[J].東華大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2015，41（1）：60-64， 90.

（收稿日期：2018-08-15 本文編輯：王 蕾）