子宮內(nèi)膜癌組織中葉酸受體α與CA125的表達(dá)及臨床意義

周洋，孫昊，金志軍，吳玉仙，王成才

子宮內(nèi)膜癌（endometrial cancer，EC）為一組源自子宮內(nèi)膜上皮的惡性腫瘤，發(fā)病率在婦科惡性腫瘤中排第2位，且呈現(xiàn)出逐年增高及年輕化趨勢(shì)[1-3]。同時(shí)因EC早期常無(wú)明顯臨床癥狀或僅存在輕微陰道出血、陰道流液等非特異性癥狀，易被患者忽視，部分患者確診時(shí)已進(jìn)展為中晚期，臨床治療難度大，預(yù)后差[4-5]。因此，尋找一種有效的病理診斷及病情評(píng)價(jià)方法對(duì)提升臨床療效及患者總體生存率尤為重要。腫瘤標(biāo)志物水平檢測(cè)為一種便捷、經(jīng)濟(jì)、無(wú)創(chuàng)的惡性腫瘤診斷方法，糖類(lèi)抗原125（CA125）為高分子糖蛋白之一，是目前臨床應(yīng)用最為廣泛的腫瘤標(biāo)志物之一。近年有研究報(bào)道，CA125可參與子宮內(nèi)膜多種生理病理過(guò)程，其高表達(dá)和子宮內(nèi)膜組織病變程度密切相關(guān)[6-7]。葉酸受體α（FRα）是細(xì)胞表面和磷酸酰肌醇相錨連的糖蛋白，屬一種新型腫瘤標(biāo)志物，有學(xué)者指出，其于正常組織內(nèi)表達(dá)極低，而約90%EC患者FRα呈高表達(dá)，且表達(dá)與腫瘤分期、分化程度有著密切關(guān)系[8]。本研究旨在探討EC組織中FRα與CA125的表達(dá)及臨床意義，為EC病理診斷及惡性程度評(píng)價(jià)提供一定參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2015年7月—2018年12月我院收治的62例EC患者作為EC組，選取同期42例子宮內(nèi)膜非典型增生患者作為非典型增生組，42例因子宮良性病變（臨床診斷排除內(nèi)膜病變）行全子宮切除術(shù)治療患者的正常子宮內(nèi)膜作為正常對(duì)照組。其中EC組年齡32～74歲，平均（51.35±7.92）歲；腫瘤分化程度：中低分化（G2～G3）43例，高分化（G1）19例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）分期：Ⅰ～Ⅱ期37例，Ⅲ～Ⅳ期25例；腫瘤直徑：＜2 cm者34例，≥2 cm者28例；肌層浸潤(rùn)深度：＜1/2者33例，≥1/2者29例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有17例，無(wú)45例。非典型增生組年齡31～73歲，平均（52.06±8.15）歲。正常對(duì)照組年齡30～70歲，平均（50.84±8.37）歲。3組年齡相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.240，P=0.787）。本研究經(jīng)第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長(zhǎng)征醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn) ①EC組經(jīng)病理檢查確診為EC，病理分型均為子宮內(nèi)膜樣腺癌，初診患者；②非典型增生組與正常對(duì)照組均經(jīng)臨床診斷證實(shí)為子宮內(nèi)膜非典型增生患者和正常子宮內(nèi)膜患者；③3組均臨床資料完整，知曉本研究，簽訂知情同意書(shū)。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn) ①既往行內(nèi)分泌治療或放化療者；②合并肝心腎肺等臟器功能?chē)?yán)重異常者；③合并腦血管疾病、全身感染、其他類(lèi)型惡性腫瘤者；④合并血液系統(tǒng)、精神系統(tǒng)疾病者。

1.3 研究方法

1.3.1 FRα、CA125表達(dá)測(cè)定 所有子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本均以多聚甲醛（4%）施行固定，制作石蠟切片（厚度為4 μm），應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法測(cè)定子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125表達(dá)。具體操作方法：將石蠟切片脫蠟、水化，應(yīng)用檸檬酸緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，以正常山羊血清工作液室溫下孵育約15 min，滴加鼠抗人CA125單克隆抗體與鼠抗人FRα單克隆抗體在4℃條件下過(guò)夜，再滴加通用型二抗在室溫下孵育15 min，以二氨基聯(lián)苯胺顯色，蘇木素復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，最后于光學(xué)顯微鏡下對(duì)切片染色情況進(jìn)行觀察，檢測(cè)試劑盒由北京中山金橋生物有限公司提供。

1.3.2 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本FRα、CA125陽(yáng)性信號(hào)定位于細(xì)胞膜和（或）細(xì)胞質(zhì)中，依照陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞染色強(qiáng)度以半定量積分法實(shí)施結(jié)果判定，每張切片選擇5個(gè)高倍鏡視野，觀察100個(gè)細(xì)胞，根據(jù)視野下陽(yáng)性細(xì)胞占比進(jìn)行評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞占比＞50%計(jì)3分，26%～50%計(jì)2分，11%～25%計(jì)1分，≤10%計(jì)0分；細(xì)胞染色強(qiáng)度：呈棕褐色計(jì)3分，棕黃色計(jì)2分，淡黃色為1分，不著色計(jì)0分；將兩項(xiàng)得分相乘，最終得分處于8～9分為“+++”，4～7分為“++”，1～3分為“+”，0分為“-”；當(dāng)結(jié)果≥“+”時(shí)判定為陽(yáng)性，并將“+++”、“++”歸為高表達(dá)，“+”和“-”歸為低表達(dá)[9]。

1.4 觀察指標(biāo) ①對(duì)比3組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125的高表達(dá)率情況；②比較EC組患者不同腫瘤大小、分化程度、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度者FRα、CA125的表達(dá)差異；③分析EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達(dá)相關(guān)性；④隨訪EC組中術(shù)后滿1年的患者，比較FRα、CA125高表達(dá)者與低表達(dá)者的術(shù)后1年復(fù)發(fā)率，復(fù)發(fā)均經(jīng)計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）、磁共振成像（MRI）等影像學(xué)和（或）病理學(xué)證實(shí)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。定量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，組間比較采用單因素方差分析；定性資料用例數(shù)（百分比）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達(dá)相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 3組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125表達(dá)情況EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125高表達(dá)率均高于非典型增生組及正常對(duì)照組（P＜0.05）。見(jiàn)表1，見(jiàn)圖1～6（見(jiàn)封三）。

表1 3組子宮內(nèi)膜組織中FRα、CA125表達(dá)情況比較例（%）

2.2 EC組不同臨床病理參數(shù)者FRα的表達(dá)差異比較 EC組不同腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的FRα高表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2的EC組患者FRα高表達(dá)率高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2者（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 EC組不同臨床病理參數(shù)者FRα的表達(dá)差異比較例（%）

2.3 EC組不同臨床病理參數(shù)者CA125的表達(dá)差異比較 EC組不同腫瘤大小、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的CA125高表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2的EC組患者CA125高表達(dá)率高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2者（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

表3 EC組不同臨床病理參數(shù)者CA125的表達(dá)差異比較例（%）

2.4 EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達(dá)Spearman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達(dá)呈正相關(guān)（rs=0.328，P=0.009）。

2.5 FRα、CA125表達(dá)與EC患者1年復(fù)發(fā)率的關(guān)系在EC患者中選取術(shù)后滿1年的患者53例，以術(shù)后12個(gè)月為時(shí)間截點(diǎn)，隨訪術(shù)后1年復(fù)發(fā)率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)子宮內(nèi)膜組織中FRα呈高表達(dá)者和低表達(dá)者的復(fù)發(fā)率分別為17.07%（7/41）和8.33%（1/12），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.553，P=0.457）；CA125呈高表達(dá)者和低表達(dá)者的復(fù)發(fā)率分別為15.38%（6/39）和7.14%（1/14），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.611，P=0.435）。

3 討論

EC好發(fā)于絕經(jīng)后及圍絕經(jīng)期女性，病因尚不完全闡明，多認(rèn)為與高血壓、肥胖癥、糖尿病、多囊卵巢綜合征、未生育、大量使用外源性雌激素、遺傳等多種因素有關(guān)，EC起病較為隱匿，早期患者臨床癥狀、體征不明顯，晚期患者治療方法有限，預(yù)后差，尋找一種有效病理診斷及預(yù)后評(píng)價(jià)方法一直為臨床研究熱點(diǎn)[10-12]。

FRα為新型腫瘤標(biāo)志物之一，在機(jī)體正常組織中幾乎不表達(dá)，而在卵巢癌、鼻咽癌、肺癌、乳腺癌等上皮源性腫瘤中具有較高表達(dá)，可參與腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展過(guò)程[13]。流行病學(xué)研究報(bào)道，葉酸攝入不足與腫瘤發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)升高密切相關(guān)，葉酸經(jīng)小腸吸收后在二氫葉酸還原酶作用下可轉(zhuǎn)化為四氫葉酸，進(jìn)而參與DNA合成需要的嘌呤前體、胸腺嘧啶脫氧核苷酸及細(xì)胞中甲基供體S-腺苷甲硫氨酸（SAM）生成，當(dāng)葉酸缺乏時(shí)，機(jī)體SAM生成減少，影響DNA合成過(guò)程中嘧啶核苷酸甲基化，低甲基化可造成腫瘤抑制基因失活，致使癌基因突變，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤發(fā)生、發(fā)展[14]。由細(xì)胞學(xué)水平而言，葉酸缺乏可致使細(xì)胞凋亡產(chǎn)生紊亂、新生血管生成加快，進(jìn)而加速腫瘤發(fā)生[15]。而FRα于腫瘤組織中可經(jīng)胞吞作用有效地結(jié)合葉酸，F(xiàn)Rα高表達(dá)可造成葉酸相對(duì)缺乏，為腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖創(chuàng)造有利條件[15-16]。沈祥麗等[17]研究報(bào)道，子宮內(nèi)膜樣腺癌（EEC）患者子宮內(nèi)膜組織中FRα陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于子宮內(nèi)膜增生和正常子宮內(nèi)膜患者。黎金顏等[18]研究指出，EC患者子宮內(nèi)膜組織FRα表達(dá)高于子宮內(nèi)膜增生和正常子宮內(nèi)膜患者，且表達(dá)與臨床分期、分化程度密切相關(guān)。本研究更為全面地分析了EC組織中FRα的高表達(dá)率及其在不同瘤體大小、腫瘤分化程度、肌層浸潤(rùn)深度、臨床分期等病理參數(shù)患者中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示，EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα的高表達(dá)率顯著高于非典型增生組及正常對(duì)照組，且腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2的EC組患者FRα高表達(dá)率均高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2的患者（P＜0.05）。這表明EC組織中FRα呈高表達(dá)，且其表達(dá)水平在不同腫瘤分化程度、臨床分期、肌層浸潤(rùn)深度者中差異顯著，提示可將FRα高表達(dá)作為EC病理診斷與惡性程度評(píng)價(jià)的重要依據(jù)。

CA125為臨床應(yīng)用較廣泛的腫瘤標(biāo)志物，主要分布于子宮內(nèi)膜、卵巢等由體腔上皮所分化形成的組織，在正常分化細(xì)胞、組織中表達(dá)較低，而在肺癌、卵巢癌、乳腺癌、EC等上皮源性腫瘤中均高表達(dá)[19-20]。蔡鳳梅等[21]研究報(bào)道，EC組織中CA125陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于子宮內(nèi)膜增生患者，且與腫瘤臨床分期、浸潤(rùn)深度關(guān)系密切。本研究全面探究了EC組織中CA125的高表達(dá)率及其在不同臨床病理參數(shù)患者中的表達(dá)差異，結(jié)果顯示，EC組子宮內(nèi)膜組織中CA125的高表達(dá)率高于非典型增生組及正常對(duì)照組，且腫瘤分化程度為G2～G3、臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期、肌層浸潤(rùn)深度≥1/2的EC患者CA125高表達(dá)率均高于腫瘤分化程度為G1、臨床分期為Ⅰ～Ⅱ期、肌層浸潤(rùn)深度＜1/2者（P＜0.05）。這表明EC組織中CA125呈高表達(dá)，且在不同腫瘤分化程度、臨床分期、肌層浸潤(rùn)深度患者中表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，亦提示可將CA125高表達(dá)作為EC病理診斷與惡性程度評(píng)定的有力依據(jù)。

本研究EC組患者子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），表明FRα與CA125存在相關(guān)性，可協(xié)同參與EC發(fā)生、發(fā)展。本研究首次探討了EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125的高表達(dá)率與患者預(yù)后復(fù)發(fā)率的關(guān)系，結(jié)果顯示，EC組子宮內(nèi)膜組織中FRα與CA125具有高表達(dá)率者其復(fù)發(fā)率高于低表達(dá)率者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。分析其原因可能與本研究樣本量較少有關(guān)，尚待增加樣本量后進(jìn)一步研究。

綜上，EC組織中FRα、CA125均呈現(xiàn)高表達(dá)率，且在不同腫瘤分化程度、臨床分期、肌層浸潤(rùn)深度的患者表達(dá)有顯著差異，該結(jié)果可作為EC病理診斷和惡性程度評(píng)價(jià)的有效參考指標(biāo)。