代森聯(lián)中雜質(zhì)ETU的高效液相色譜分析方法研究

王 琴，武 鵬，石凱威，吳進(jìn)龍*

(1.湖南加法檢測(cè)有限公司，湖南 長(zhǎng)沙 410017；2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所，北京 100125)

1 前言

代森聯(lián)(metiram)是一種乙撐二硫代氨基甲酸鹽(EBDCs)，可作為保護(hù)性殺菌劑而被廣泛應(yīng)用于蔬菜水果在斑點(diǎn)落葉病等的防治[1]。隨著對(duì)代森聯(lián)產(chǎn)品的深入研究，人們發(fā)現(xiàn)在其生產(chǎn)及施用過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生一種代謝產(chǎn)物——ETU[2]。與此同時(shí)，ETU同時(shí)也是代森聯(lián)產(chǎn)品中的主要雜質(zhì)，具有致癌、致畸及致突變的作用，引起研究者們的較大關(guān)注[3]。雖然目前已有相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)對(duì)生產(chǎn)中ETU含量進(jìn)行嚴(yán)格的控制[4，5]，但為了更好地實(shí)現(xiàn)ETU含量測(cè)定，我們對(duì)ETU的分析方法進(jìn)行了進(jìn)一步的探究，并通過(guò)試驗(yàn)確定了ETU的最優(yōu)分析測(cè)定條件，該方法操作簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，具有較好的精密度、準(zhǔn)確度。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 甲醇：色譜純；乙腈：色譜純；水：超純水(電阻率18.2MΩ·cm，25℃)；磷酸；ETU標(biāo)樣：已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)，99.5%(由農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥檢定所提供)；試樣：60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)水分散粒劑(由某公司提供)。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent 1100，具有二極管陣列檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器；Agilent色譜工作站；Millipore超純水制備系統(tǒng)；色譜柱：250mm×4.6mm(id)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C185μm填充物。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：ψ(甲醇∶乙腈∶水)=(0.9∶0.7∶98.4，0～6min；90∶0∶10，6.01～14min；0.9∶0.7∶98.4，14.01～20min)(V/V)；流量：1.0mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：233nm；進(jìn)樣體積：5μL；保留時(shí)間：ETU約4.7min。

ETU標(biāo)樣和試樣中ETU的高效液相色譜圖(圖1、圖2)。

圖1 ETU標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖2 試樣中ETU的高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取0.01g(精確至0.000 1g)ETU標(biāo)樣于100mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)定容至刻度，超聲波振蕩5min使標(biāo)樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液3mL于另一50mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)稀釋至刻度，搖勻。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取0.3g(精確至0.000 1g)試樣于50mL容量瓶中，用磷酸水(pH 4.0)稀釋至刻度，超聲波振蕩5 min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，過(guò)濾，注：試樣溶液應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針標(biāo)樣溶液的響應(yīng)值相對(duì)變化<1.5%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中ETU峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中ETU的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω(%)，按式(1)計(jì)算：

好不容易等來(lái)一輛車，卻是人滿為患。此時(shí)會(huì)猶豫，上還是不上？這么久沒來(lái)車了，也許后面的車很快就會(huì)跟上來(lái)。上吧，至少上了就有希望；可是，這么多人，說(shuō)不定后面的車比這一輛還快呢。糾結(jié)。

(1)

式中：

ω1——試樣中ETU的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A2——試樣溶液中，ETU峰面積的平均值；

m1——ETU標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

ω——ETU標(biāo)樣的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%；

A1——標(biāo)樣溶液中，ETU峰面積的平均值；

100/3——標(biāo)樣溶液的稀釋倍數(shù)。

3 結(jié)果與討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 通過(guò)Agilent 1100高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得ETU的紫外波長(zhǎng)掃描圖(圖3)。從圖中可以看到ETU最大吸收波長(zhǎng)在233nm處，在該波長(zhǎng)處，靈敏度較高，干擾較少，故檢測(cè)波長(zhǎng)確定為233nm。

圖3 ETU紫外吸收譜圖

3.2 溶劑的選擇 從同一樣品平行稱取3份試樣約0.3g，分別用50mL甲醇、水、磷酸水(pH 4.0)3種不同溶劑溶解試樣，過(guò)濾。同時(shí)，稱取3份相同的ETU標(biāo)樣約0.01g，用上述方法配置3個(gè)標(biāo)樣溶液。對(duì)上述每個(gè)溶液連續(xù)進(jìn)針進(jìn)行分析，考察ETU峰面積隨時(shí)間的變化，結(jié)果(圖4、圖5、表1和表2)。

試驗(yàn)結(jié)果顯示，(1)ETU標(biāo)樣溶液中的ETU峰面積的相對(duì)變化率呈正態(tài)分布，且變化很小，說(shuō)明ETU在選定的測(cè)定條件下是穩(wěn)定的；(2)在甲醇、水、磷酸水(pH 4.0)3種溶劑中試樣中ETU的峰面積總體均呈增加趨勢(shì)(0～16h)，說(shuō)明試樣溶液中溶解有代森聯(lián)，代森聯(lián)在逐步分解產(chǎn)生ETU；(3)不同溶劑樣品溶液ETU面積變化情況是顯著不同的，0.5h時(shí)，甲醇(13.36%)、水(5.24%)、磷酸水(pH 4.0)(5.03%)，這種規(guī)律的變化可能是由于不同溶劑對(duì)代森聯(lián)的溶解度的不同所引起的，也可能是由于代森聯(lián)在不同溶劑中的分解速度不同造成的。綜合以上結(jié)果，我們選擇磷酸水(pH 4.0)作為最佳的溶樣溶劑。

3.3 分析方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)確定色譜分析條件后，我們進(jìn)行了分析方法的線性相關(guān)試驗(yàn)。在一定質(zhì)量范圍內(nèi)，配制ETU標(biāo)樣母液，按照濃度遞增的順序分別移取不同體積ETU標(biāo)樣母液進(jìn)行稀釋。以ETU質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測(cè)得ETU線性方程為y=47 582.704 6x-0.023 594 9，相關(guān)系數(shù)R為1.000 00。結(jié)果表明ETU在測(cè)試的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

3.4 分析方法的精密度試驗(yàn) 從同一樣品中準(zhǔn)確稱取5個(gè)試樣，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得ETU的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.005，變異系數(shù)為4.45%(表3)。

圖4 在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))條件下試樣中的ETU峰面積隨著時(shí)間的變化圖(0～16h);

圖5 在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))條件下ETU標(biāo)樣峰面積隨著時(shí)間的變化圖(0～16h)

表1 0～16h內(nèi)，試樣中的ETU在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))中峰面積的相對(duì)變化率(%)

表2 0～16h內(nèi)，ETU標(biāo)樣在不同溶劑(甲醇、水、磷酸水(pH 4.0))中峰面積的相對(duì)變化率(%)

表3 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 采用已知質(zhì)量分?jǐn)?shù)的ETU試樣(0.11%)中稱取5個(gè)試樣，分別加入一定量的ETU標(biāo)樣(99.5%)，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得平均回收率為93.53%(表4)。

表4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

4 結(jié)論

建立了高效液相色譜法檢測(cè)60%吡唑醚菌酯·代森聯(lián)水分散粒劑中雜質(zhì)ETU的分析方法。詳細(xì)研究了3種不同的溶樣的溶劑對(duì)分析方法的影響，試驗(yàn)結(jié)果表明，相對(duì)于甲醇和水，選擇磷酸水(pH 4.0)作為最佳溶劑，ETU在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有操作簡(jiǎn)便、快速的特點(diǎn)，是產(chǎn)品質(zhì)量控制和應(yīng)用研究中較為理想的分析方法。