咳可合劑對哮喘發(fā)作期小鼠肺組織ET-1 血清I L-4 IFN-γ水平的影響研究

摘要：目的?咳可合劑為本院兒科院內(nèi)制劑，前期研究表明咳可合劑能明顯改善熱哮患兒咳嗽、喘息、痰鳴等主要癥狀及體征，可以改善患兒肺功能指標;可通過調(diào)節(jié)患兒誘導痰中EOS及血清中ECP水平，減輕哮喘患兒的病理變化從而控制哮喘的發(fā)作。為了探討咳可合劑作用機制，特進行本實驗研究。方法?按照參考文獻制備哮喘小鼠模型，分為空白對照組、模型對照組、咳可合劑低、中、高劑量組五組，各組小鼠從造模成功后第2天起灌胃，每次2 mL，每天1次，持續(xù)1周。中藥治療組分別給予咳可合劑藥液;正常對照組和模型對照組均給予生理鹽水灌胃1周，處死動物，取肺組織檢測ET-1，血清檢測IFN-r和IL-4。結(jié)果?與空白組比較，模型組ET-1、IL-4值均升高，P<0.05有統(tǒng)計學意義，IFN-γ值下降，P<0.05有統(tǒng)計學意義，IFN-γ/IL-4比值下降，P<0.05有統(tǒng)計學意義。咳可合劑三個劑量組均能降低ET-1、IL-4值，P<0.05有統(tǒng)計學意義;均能提高IFN-γ、IFN-γ/IL-4值，P<0.05有統(tǒng)計學意義。結(jié)論?咳可合劑通過降低值肺組織ET-1含量，及提高血清IFN-γ水平，拮抗哮喘小鼠IL-4分泌水平，從而達到調(diào)Th1/Th2 平衡發(fā)揮作用。

關(guān)鍵詞：咳可合劑 小鼠、ET-1、I L-4、IFN-γ

中圖分類號：R256.12?文獻標志碼：A?文章編號：1007-2349（2019）02-0062-02

近20年來隨著工業(yè)化進程的加速以及人們生產(chǎn)及生活方式的改變，小兒哮喘的發(fā)病率呈逐年上升趨勢。前期研究表明[1]：咳可合劑能明顯改善熱哮患兒咳嗽、喘息、痰鳴等主要癥狀及體征，可以改善患兒肺功能指標;可通過調(diào)節(jié)患兒誘導痰中EOS及血清中ECP水平，減輕哮喘患兒的病理變化從而控制哮喘的發(fā)作。為了探討咳可合劑作用機制，特進行本實驗研究。

1?材料與方法

1.1?實驗動物?健康雌性BALB/c純系小鼠50只，蘇州大學醫(yī)學院動物實驗中心提供。動物許可證號：SYXK（蘇）2012-0045。

1.2?藥物與試劑

1.2.1?實驗藥物?咳可合劑組方：炙麻黃、杏仁、生石膏、炙甘草、蒲公英、金銀花、野菊花、青黛、地龍、蜈蚣。由蘇州中醫(yī)院中藥研究所提供?？瓤珊蟿┑椭懈呓M分別按所用藥物及組方比例稱取各藥混合，濃縮至含生藥、0.95 g，1.9 g，3.8 g/L。

1.2.2?主要實驗試劑?雞卵清白蛋白（ovalbumin，OVA）：美國Sigma公司;氫氧化鋁干粉：蘇州科創(chuàng)生物科技有限公司;ELISA小鼠ET-1試劑盒、IFN-r和IL-4免疫組化試劑盒：蘇州科創(chuàng)生物科技有限公司。

1.2.3?主要儀器設(shè)備?霧化機：江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司，型號403 C型。

1.3?方法

1.3.1?動物模型制備及評估?哮喘模型小鼠參考文獻[2]造模方法的建立分致敏和激發(fā)兩步。除正常對照組外，其余4組于第 1、8d腹腔注射抗原液 0.2mL/只（含卵蛋白 100μg，吸附白百破聯(lián)合疫苗0.1 mL和氫氧化鋁干粉1 mg）致敏。正常對照組腹 腔注射等量生理鹽水。自第14d開始將小鼠放人不完全封閉的有機玻璃箱內(nèi)，5組1%卵蛋白（OVA）生理鹽水溶液噴霧進行激發(fā)，每天1次，每次20 min，定時連續(xù)，共激發(fā)7d，以小鼠出現(xiàn)點頭呼吸，縮胸收腹，呼吸急促，噴嚏咳嗽為誘喘成功。正常對照組噴霧等量生理鹽水。咳可合劑低中高組分別按所用藥物及組方比例稱取各藥混合，放置冰箱冷藏（4℃）備用。

1.3.2?給藥方法?各組小鼠從造模成功后第2 d起灌胃，每次2 mL，每天1次，持續(xù)1周。低中高治療組分別給予咳可合劑藥液;空白對照組和模型對照組均給予生理鹽水灌胃。各組藥物灌服前均在恒溫水浴箱內(nèi)加熱至37℃。

1.4?檢測指標?血清實驗第8 d，激發(fā)后（哮喘發(fā)作期）固定小鼠，眼球取血0.5 mL，注入抗凝管中，靜置30 min后2000 r/min離心15 min，分離血清檢測I L-4、IFN-γ水含量;取左肺組織凍存勻漿，檢測ET-1。均按照說明書進行?？瞻捉M同上。

1.5?統(tǒng)計處理?所有數(shù)據(jù)錄入SPSS21軟件，經(jīng)檢測正態(tài)分布且方差齊，采用方差分析檢測方法，如不滿足方差齊性，則采用非參數(shù)檢驗。以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。

2?結(jié)果

與空白組比較，模型組ET-1、IL-4值均升高，P<0.05有統(tǒng)計學意義，IFN-γ值下降，P<0.05有統(tǒng)計學意義，IFN-γ/IL-4比值下降，P<0.05有統(tǒng)計學意義?？瓤珊蟿┤齻€劑量組均能降低ET-1、IL-4值，P<0.05有統(tǒng)計學意義;均能提高IFN-γ、IFN-γ/IL-4值，P<0.05有統(tǒng)計學意義。

3?討論

氣道重塑是哮喘的重要病理特征之一，是呼吸道炎癥反復(fù)損傷和修復(fù)的結(jié)果。內(nèi)皮素-1（ET-1）是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的支氣管平滑肌收縮劑，它可通過活化肺泡巨噬細胞、增加超氧化物的產(chǎn)生以及激活中性粒細胞，增強彈性蛋白酶活性，使上皮細胞破壞增加，引起黏液高分泌致狹窄[3]。近年來研究證實Th1/Th2細胞因子水平穩(wěn)態(tài)破壞亦是誘發(fā)、維持哮喘的重要因素[4];Th2細胞因子水平優(yōu)勢導致氣道高反應(yīng)性進展。其中IFN-γ和IL-4分別是Thl和Th2細胞因子代表類型;IL-4能夠誘導B細胞增殖分化，促進IgE分泌，加重氣道炎癥;而IFN-γ則具有高效IgE分泌拮抗作用，可有效降低Th2型細胞因子水平。二者失衡是哮喘的重要特征，也是發(fā)病機制之一。

咳可合劑為本院兒科多年臨床經(jīng)驗結(jié)合經(jīng)典方劑組合而成，麻杏石甘湯清肺平喘為本。不用大苦大寒之品，咳可合劑使用清熱解毒之品，如蒲公英、金銀花、野菊花、青黛等，而不用黃連、黃柏之類，因為蒲公英之類清熱解毒，苦味不甚，小兒易于接受，且大苦大寒易于傷陰傷陽、敗傷胃氣。止咳化痰，輔以解痙通絡(luò)?？瓤珊蟿┮缘佚?、蜈蚣解痙止咳平喘。

結(jié)果表明，模型小鼠肺組織ET-1、血清IL-4值均升高，IFN-γ值下降，這與文獻報道發(fā)病機制相符，說明造模成功?？瓤珊蟿┤齻€劑量組均能降低ET-1、IL-4值，均能提高IFN-γ、IFN-γ/IL-4值，提示咳可合劑通過降低值ET-1含量，及提高血清IFN-γ水平，拮抗哮喘小鼠IL-4分泌水平，從而達到調(diào)Th1/Th2 平衡發(fā)揮作用。

參考文獻：

[1]李巖，符虹，楚建業(yè)，等.咳可合劑對熱性哮喘發(fā)作期兒童肺功能、誘導痰中 EOS及血清 ECP的影響[J].湖南中醫(yī)雜志，2014，30（4）：18-20.

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