草酸處理對塔羅科血橙采后花色苷積累和糖酸含量的影響

喻最新，王日葵，王晶，賀明陽，3*，袁小淞，洪敏

1(西南大學(xué)柑桔研究所，重慶，400712)2(西南大學(xué) 食品科學(xué)學(xué)院，重慶，400715) 3(中國科學(xué)院華南植物園植物資源保護與可持續(xù)利用重點實驗室，廣東 廣州，510650)

血橙(CitrussinensisL. Osbeck)屬于甜橙類，是柑橘中唯一含花色苷的品種[1]。血橙中因含有抗壞血酸，多酚，類黃酮以及羥基肉桂酸等活性化合物而具有較高的營養(yǎng)價值，深受消費者喜歡[2]。但是，血橙著色需要較大的晝夜溫差，熱帶和亞熱帶氣候地區(qū)生長的血橙著色普遍不深，且顏色分布不均勻，嚴重影響其商業(yè)價值[3]。采取有效的處理措施保持水果采后良好的品質(zhì)意義重大。

草酸(oxalic acid，OA)是生物體的一種代謝產(chǎn)物，廣泛分布于植物、動物和真菌體中，并在不同的生命體中發(fā)揮不同的功能[4]。大量研究表明，適宜濃度的草酸處理能夠提高果實的抗氧化能力，延緩果實衰老、軟化進程，延長貯藏期，從而達到良好的保鮮效果[5-8]。但鮮見采后草酸處理對血橙花色苷積累及糖酸含量影響的報道。

本研究擬通過不同質(zhì)量濃度草酸對血橙浸泡處理，考察草酸處理對貯藏期間血橙花色苷積累以及糖酸含量變化的影響，篩選出利于提高血橙營養(yǎng)價值的貯藏保鮮方法，以期為血橙采后品質(zhì)調(diào)控提供切實可行的理論依據(jù)和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與處理

血橙：塔羅科，采自重慶市璧山區(qū)綠躍血橙種植園，挑選外觀著色一致，大小均一，無病蟲害、無機械損傷的血橙為試驗原料，于2018年1月24日采收后當天運回實驗室，先用清水將果實表面洗凈后，取出晾干，然后分別用質(zhì)量濃度為1、2、5 g/L的草酸溶液浸泡果實10 min，以浸泡清水為對照。果實表面的水分風(fēng)干后，置于6～8 ℃貯藏20 d。每個處理設(shè)3次重復(fù)，每次重復(fù)15個果實，每隔5 d測定相關(guān)指標。

1.2 儀器與設(shè)備

高效液相色譜儀，美國安捷倫公司；UMISIL C18色譜柱(260 mm×4.6 mm, 5 μm)、APS-2 HYPERSIL色譜柱(260 mm×4.6 mm, 5 μm)，美國Thermo Scientific公司；TU-1901紫外分光光度計，北京普析通用儀器有限公司；H1850R臺式高速冷凍離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 總花色苷含量分析

參照曹少謙[9]和CRIF等[10]的方法并略做修改。

血橙榨汁后10 000 r/min離心10 min，取2 mL上清液用緩沖液A(0.05 mol/L KCl、 0.15 mol/L HCl，pH=1.0)稀釋至10 mL，另取2 mL上清液用緩沖液B(0.4 mol/L CH3COONa、0.24 mol/L HCl，pH=4.5)稀釋至10 mL，于510 nm和700 nm處測定吸光值。按公式(1)計算：

(1)

式中：A=(A510 nm-A700 nm)pH 1.0-(A510 nm-A700 nm)pH 4.5；ε，矢車菊素-3-葡萄糖苷在pH=1.0緩沖液中510 nm下的摩爾吸光系數(shù)(24 825)；Mw=矢車菊素-3-葡萄糖苷分子質(zhì)量(484.82)；DF，稀釋倍數(shù)；L，光程，cm。

1.3.2 RNA提取、cDNA制備及熒光定量PCR

按照植物多糖多酚總RNA提取試劑盒Tiangen(天根生化科技北京有限公司)產(chǎn)品說明書進行血橙果肉RNA的提取，提取的RNA立即進行反轉(zhuǎn)錄。

以提取的RNA為模板，利用Tiangen FastKing RT Kit (含有g(shù)DNase)反轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。使用BIO-RAD CFX98TMReal-Time Systerm儀器，熒光定量試劑盒TB GreenTMPremixExTaqTMⅡ(Tli RNaseH Plus)。在冰上配制PCR反應(yīng)液，TB GreenTMPremixExTaqTMⅡ 10.0 μL，PCR正向引物Primer 1 μL，PCR反向引物1 μL，加cDNA模板1.5 μL，ddH2O 補足總體積為20.0 μL。熒光定量PCR反應(yīng)程序：預(yù)變性95 ℃ 30 s，(95 ℃、5 s，58 ℃、30 s)40個循環(huán)，95 ℃10 s。 每個模板做3次平行，用平均值表示總RNA的CT值。采用ΔΔCT法對熒光定量PCR擴增數(shù)據(jù)進行處理，目的基因的相對含量通過計算2-ΔΔCT值來確定。內(nèi)參基因選用EF-1α(Accession No. XM_015533332)，內(nèi)參基因和CHS的引物參考CRIFO等[10]。基因PAL、C4H、4CL、CHI、F3H、F3’5’H、DFR、ANS、UFGT、GST和Ruby的引物參考CARMONA等[3]。

1.3.3 可溶性糖含量分析

參照ALBERTINI等[11]的方法并略做修改。

采用高效液相色譜法。準確稱取1 g血橙果肉于研缽中，加入5 mL超純水研磨成勻漿后倒入15 mL離心管中，用1 mL超純水刷洗研缽后一并移入離心管中，在4 ℃下，15 000 r/min離心10 min，取上清液定容于10 mL容量瓶，過0.45 μm濾膜。色譜條件：色譜柱為APS-2 HYPERSIL柱(260 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為乙腈和水(體積比70∶30)；流速1.0 mL/min；柱溫35 ℃；進樣量為10 μL；RID示差檢測器。

1.3.4 有機酸含量分析

(1)抗壞血酸含量分析。參照江海等[12]的方法并略作修改。

采用高效液相色譜法。準確稱取1 g血橙果肉于研缽中，加入5 mL超純水研磨成勻漿后倒入15 mL 離心管中，用1 mL超純水刷洗研缽后一并移入離心管中，在4 ℃下，15 000 r/min離心10 min，取上清液定容于10 mL容量瓶，過0.22 μm濾膜。色譜條件：色譜柱為UMISILC18柱(260 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為甲醇和0.1%磷酸(體積比1∶99)；流速0.8 mL/min；柱溫25 ℃；檢測波長為245 nm；進樣量為10 μL。

(2)檸檬酸、蘋果酸含量分析。參照李云康[13]的方法并略作修改。

采用高效液相色譜法。準確稱取1 g血橙果肉于研缽中，加入5 mL 0.05 mol/L的KH2PO4溶液(pH=2.5)研磨成勻漿后倒入15 mL離心管中，在 4 ℃下，15 000 r/min離心10 min，取上清液用0.05 mol/L KH2PO4溶液定容于10 mL容量瓶，過0.22 μm濾膜。色譜條件：色譜柱為Venusil MP C18柱(260 mm×4.6 mm, 5 μm)；流動相為甲醇和0.05 mol/L KH2PO4溶液(體積比97∶3)，0.05 mol/L KH2PO4溶液用磷酸調(diào)pH至2.5；流速1 mL/min；柱溫40 ℃；檢測波長為210 nm；進樣量為20 μL。

總糖、總酸含量及糖酸比按公式(2)、(3)、(4)計算[13]：

總糖含量/(mg·g-1)=M果糖+M葡萄糖+M蔗糖

(2)

總酸含量/(mg·g-1)=M抗壞血酸+M蘋果酸+M檸檬酸

(3)

(4)

2 結(jié)果與分析

2.1 草酸處理對血橙汁總花色苷含量的影響

血橙是典型的因花色苷著色的品種，花色苷的含量決定血橙果肉顏色，是血橙商業(yè)價值的重要評價指標[14]。花色苷是一類廣泛的存在于植物中的色素，屬于類黃酮化合物[15]。花色苷不僅賦予植物鮮艷的顏色以利于授粉和種子傳播、抵抗植物蟲害以及預(yù)防植物的紫外線照射損傷[16]，而且對于人類具有許多生理保健功能，如清除體內(nèi)自由基、抗腫瘤、抗癌、抗炎、抑制脂質(zhì)過氧化和血小板凝集、保護肝臟、預(yù)防糖尿病[17]、減肥[18]、保護視力[19]等。由圖1可知，整個貯藏期間，OA處理組與CK組果實花色苷的積累量均呈上升趨勢。OA2、OA3處理組果實在貯藏后期(15～20 d) 花色苷積累明顯，顯著高于CK組(P<0.05)。

OA1-1 g/L草酸；OA2-2 g/L草酸；OA2-5 g/L草酸；CK-對照，下同。圖1 草酸處理對血橙貯藏期間果汁總花色苷含量的影響Fig.1 Effects of oxalic acid treatment on total anthocyanin contents in blood orange juice during storage注:圖中標注的不同字母表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

貯藏至20 d，OA處理組果實果汁中的花色苷含量均顯著高于CK組，其中OA2、OA3處理組果實果汁花色苷積累量分別是CK組果實果汁的1.81倍和2.06倍。由此可知，適宜濃度的OA處理可以在較短的時間內(nèi)顯著提高血橙中的花色苷含量。這與前人的研究結(jié)果相互印證[7, 20-21]。PANNITTERI等[2]報道塔羅科血橙在4 ℃貯藏70 d，果汁中的花色苷含量可以從7.11 mg/L增加到54.44 mg/L，效果明顯但所需時間較長。本研究通過OA處理后在6～8 ℃ 貯藏20 d，在較短的時間內(nèi)迅速增加血橙中的花色苷含量，是一種高效、低廉、具有實際應(yīng)用前景的新方法。

2.2 草酸處理對血橙果實花色苷合成相關(guān)基因表達的影響

血橙中花色苷的代謝途徑已經(jīng)研究得較為成熟[3]。首先苯丙氨酸在苯丙氨酸裂解酶(PAL)作用下形成肉桂酸，經(jīng)肉桂酸羥化酶(C4H)和香豆酞CoA連接酶(4CL)的催化作用生成4-香豆素-CoA，在查爾酮合成酶(CHS)和查爾酮異構(gòu)酶(CHI)的催化下生成黃烷酮，再由黃烷酮-3-羥化酶(F3H)催化形成二氫黃酮醇，二氫黃酮醇是類黃酮3-羥化酶(F3′H)和類黃酮3,5-羥化酶(F3′5′H)的共同底物，這2種酶所催化的反應(yīng)產(chǎn)物是合成花色苷的直接前體，二者經(jīng)二氫黃酮醇-4-還原酶(DFR)催化形成無色矢車菊色素，經(jīng)花青素合成酶(ANS)合成有色的花青素，最后在類黃酮3,5-糖苷轉(zhuǎn)移酶(UFGT)的作用下催化成穩(wěn)定的花色苷?；ㄉ赵诠入赘孰霓D(zhuǎn)移酶(GST)的作用下被運輸至液泡中。另外，血橙花色苷的生物合成受到復(fù)合物R2R3Myb轉(zhuǎn)錄因子的調(diào)控，BUTELLI等[22]從血橙分離得到R2R3Myb轉(zhuǎn)錄因子并命名為Ruby，研究發(fā)現(xiàn)Ruby轉(zhuǎn)錄因子的表達水平和血橙中的花色苷含量具有顯著的相關(guān)性。

由圖2可知，貯藏至5、10和15 d，OA3處理組果實Ruby轉(zhuǎn)錄水平均顯著高于CK組果實，OA3處理組果實中多個花色苷合成相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因(PAL，C4H和F3′5′H)轉(zhuǎn)錄水平均高于CK組果實。

圖2 草酸處理對血橙貯藏期間花色苷合成相關(guān)基因表達的影響Fig.2 Effects of oxalic acid treatment on expression of anthocyanins synthesis related genes in blood orange during storage注：* 表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

血橙果實中花色苷的積累受Ruby轉(zhuǎn)錄因子所調(diào)控，Ruby通過調(diào)控花色苷合成結(jié)構(gòu)基因的表達來影響花色苷的積累[3, 16]。但是,在多個花青苷合成結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄被明顯促進的同時,OA3處理組果實與對照組果實在貯藏過程中4CL，CHS，CHI，F(xiàn)3H，DFR，ANS，UFGT以及GST的轉(zhuǎn)錄水平基本沒有顯著差異，這一點與KEREAMY等[23]的研究結(jié)果類似?？梢奟uby轉(zhuǎn)錄因子對花色苷合成結(jié)構(gòu)基因的表達調(diào)控是1個極其復(fù)雜的過程。綜合分析認為，草酸處理可以促進血橙果實花色苷積累相關(guān)的特異調(diào)控因子Ruby的轉(zhuǎn)錄,進而調(diào)節(jié)花色苷合成結(jié)構(gòu)基因的表達,且調(diào)控的關(guān)鍵點位于包括PAL，C4H和F3′5′H在內(nèi)的花色苷合成的前期階段，即將苯丙氨酸轉(zhuǎn)化為二氫黃酮醇的階段，進而促進果實中花色苷的積累。

2.3 草酸處理對血橙果實可溶性糖的影響

2.3.1 果糖、葡萄糖和蔗糖含量

由圖3可知，血橙果實中糖組分含量最高的是蔗糖，果糖、葡萄糖和蔗糖的質(zhì)量比接近1∶1∶2。

圖3 草酸處理對血橙果實不同種類糖含量的影響Fig.3 Effects of oxalic acid treatment on contents of different sugar of blood oranges during storage注：圖中標注的不同字母表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

在整個貯藏期間，OA處理組和CK組血橙果實果糖含量均先上升后下降，且OA處理果實中的果糖含量均高于CK組。貯藏至10 d，OA處理組果實的果糖含量均顯著高于CK組；至15 d時，除OA3處理組果實的果糖含量顯著高于CK外，其他濃度OA處理的果實果糖含量與CK組差異不顯著；貯藏至20 d， OA1和OA3組的果糖含量顯著高于CK組，其中OA3處理的果實果糖含量最高，為18.99 mg/g，CK組果實中的果糖含量為17.7 mg/g，OA2處理果實中果糖含量也略高于CK組?？梢奜A處理延緩了血橙果實中果糖的代謝速率，其中OA3處理組效果最顯著。研究表明，草酸處理能夠降低果實在貯藏期間的呼吸作用速率[5, 24]。糖作為呼吸作用代謝的底物，其含量越高則越有利于貯藏[25]。WANG等[26]研究發(fā)現(xiàn)草酸可以提高杏葡萄糖合成相關(guān)酶、果糖合成相關(guān)酶的活性從而提高杏中葡萄糖和果糖的含量，因此推測經(jīng)OA處理的血橙果實貯藏過程中果糖含量高于CK組血橙果實，可能是因為OA處理抑制了果實中的呼吸作用速率從而延緩了果實中果糖的代謝速率，或是因為OA處理提高了果實中果糖合成相關(guān)酶的活性。

OA處理組果實葡萄糖含量總體變化趨勢與CK組一致，均是先上升后下降。OA處理可使果實葡萄糖含量峰值推遲出現(xiàn)，OA處理組和CK組果實葡萄糖含量分別在貯藏15 d和10 d達到峰值。貯藏至20 d，OA處理組血橙果實葡萄糖含量均顯著高于CK組。結(jié)果表明，OA處理延緩了血橙果實中葡萄糖的代謝速率，其中以O(shè)A3處理組效果最顯著，在整個貯藏期間，OA3處理組血橙果肉中的葡萄糖含量均高于CK組。經(jīng)OA處理的血橙果實貯藏過程中葡萄糖含量高于CK組血橙果實可能是因為OA處理抑制了果實中的呼吸作用速率從而延緩了果實中葡萄糖的代謝速率，或是因為OA處理提高了果實中葡萄糖合成相關(guān)酶的活性。

OA處理組蔗糖含量總體變化趨勢與CK組一致，均是先上升后下降。OA處理可使果實蔗糖含量峰值推遲出現(xiàn)，OA處理組和CK組果實葡萄糖含量分別在貯藏至15 d和5 d達到峰值。貯藏至20 d，OA3處理組血橙果實蔗糖含量顯著高于CK組?？梢奜A3處理組延緩了血橙果實中蔗糖的代謝速率。經(jīng)OA處理組的血橙果實貯藏過程中蔗糖含量高于CK組血橙果實，可能是因為OA處理抑制了果實中的呼吸作用速率從而延緩了果實中蔗糖的代謝速率。

2.3.2 總糖含量

由圖4可知，貯藏期間OA處理組及CK組的果實總糖含量均先上升后下降，這與前人的研究結(jié)果一致[27-28]。產(chǎn)生這種變化趨勢的原因可能是果實在貯藏初期水分蒸發(fā)，果汁糖分濃縮而暫時有所提高，或是果實逐漸衰老的過程中細胞壁成分的分解引起糖分暫時升高[13]，另外果實中的有機酸在代謝過程中產(chǎn)生糖也可能造成果實糖分的暫時增加[29]，其后因為呼吸作用消耗，果實糖分不斷下降。OA處理可使果實總糖含量峰值推遲出現(xiàn)，OA處理組和CK組果實總糖含量分別在貯藏至15 d和10 d達到峰值。血橙貯藏15 d后，OA處理組果實總糖含量均顯著高于CK組；貯藏20 d后，OA1和OA2處理組血橙果肉中的總糖含量與CK組差異不顯著，但均略高于CK組，OA3處理組血橙果肉中總糖含量為71.64 mg/g，顯著高于CK組果實中的總糖含量(67.15 mg/g)。同時，OA組和CK組血橙果實在貯藏20 d后的總糖含量均高于果實貯藏前的總糖含量，可知貯藏20 d可以很好維持血橙果實的品質(zhì)。

圖4 草酸處理對血橙果實總糖含量的影響Fig.4 Effects of oxalic acid treatment on total sugar contents in blood oranges during storage注：圖中標注的不同字母表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

2.4 草酸處理對血橙果實有機酸的影響

2.4.1 抗壞血酸、蘋果酸、檸檬酸含量

迄今為止，草酸處理對水果貯藏過程中有機酸含量影響的報道較少且機理有待進一步深入研究。薛錫佳等[24]報道草酸處理延緩了杧果果實在低溫脅迫下檸檬酸的下降速率，草酸處理對低溫脅迫下杧果果實的蘋果酸和酒石酸含量影響復(fù)雜，有待進一步深入研究。

由圖5可知，血橙果實中主要的有機酸是檸檬酸，抗壞血酸和蘋果酸均為微量酸。在貯藏期間，OA1、OA3處理組以及CK組血橙果實抗壞血酸含量呈波動狀態(tài)，OA2處理組血橙果實抗壞血酸含量先升高后降低。貯藏至15 d，OA1處理組血橙果實抗壞血酸含量顯著高于CK組，OA2、OA3處理組血橙果實抗壞血酸含量與CK組差異不顯著；貯藏至20 d，OA3處理組血橙果實抗壞血酸含量與CK組差異不顯著，但略低于CK組，OA1和OA2處理組血橙果實抗壞血酸含量均顯著低于CK組。

圖5 草酸處理血橙果實不同種類酸含量的影響Fig.5 Effects of oxalic acid treatment on contents of different organic acids of blood oranges during storage注：圖中標注的不同字母表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

OA2處理組以及CK組血橙果實在貯藏期間蘋果酸含量均先升高后降低，OA1處理組血橙果實在貯藏期間蘋果酸含量呈波動狀態(tài)，OA3處理組血橙果實蘋果酸含量在貯藏期間一直下降。貯藏至15 d，OA1處理組血橙果實抗壞血酸含量與CK組差異不顯著，但含量略低于CK組，OA2和OA3處理組血橙果實抗壞血酸含量顯著低于CK組；貯藏至20 d，OA1處理組血橙果實蘋果酸含量與CK組差異不顯著，OA2和OA3處理組血橙果實蘋果酸含量顯著低于CK組?？芍狾A處理可能會在一定程度上加快血橙果實蘋果酸的代謝。柑橘在貯藏的過程中有機酸會降解合成糖[29]。因此推測草酸可能是通過增強果糖、葡萄糖合成相關(guān)酶的活性促進了果糖、葡萄糖的合成[26]從而間接加速了蘋果酸的代謝。

CK組血橙果實檸檬酸含量在貯藏期間先升高后降低，OA處理組血橙果實檸檬酸含量在貯藏期間呈波動狀態(tài)。貯藏至15 d，OA1處理組血橙果實檸檬酸含量與CK組差異不顯著，OA2和OA3處理組檸檬酸含量均顯著低于CK組；貯藏至20 d，OA處理組血橙果實檸檬酸含量均高于CK組，其中OA3處理組血橙果實檸檬酸含量顯著高于CK組，OA1、OA2處理組與CK組差異不顯著。

2.4.2 總酸含量

由圖5可知，貯藏期間CK組血橙果實總酸含量先升高后降低，OA處理組血橙果實總酸含量呈波動狀態(tài)。貯藏至15 d，OA1處理組血橙總酸含量與CK組差異不顯著，OA2和OA3處理組血橙果實總酸含量均顯著低于CK組；貯藏至20 d，OA處理血橙果實總酸含量與CK組差異均不顯著，但略高于CK組。有關(guān)OA處理對血橙貯藏過程中有機酸代謝的影響比較復(fù)雜，還需進一步的研究。

圖6 草酸處理對血橙果實總酸含量的影響Fig.6 Effects of oxalic acid treatment on total acid contents in blood oranges during storagee注：圖中標注的不同字母表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

2.5 草酸處理對血橙糖酸比的影響

果實的口感很大程度上取決于糖酸比值。由圖7可知，貯藏至15 d，OA2和OA3處理組血橙果實糖酸比均顯著高于CK組，OA1處理組血橙果實糖酸比與CK組差異不顯著，但略高于CK組；貯藏至第20天，OA處理組血橙果實糖酸比與CK組糖酸比差異不顯著，但OA處理組血橙果實糖酸比均略高于CK組。可見，OA處理可以在一定程度上提高血橙在貯藏過程中的糖酸比。

圖7 草酸處理對血橙果實糖酸比的影響Fig.7 Effects of oxalic acid treatment on sugar/acid ratio in blood oranges during storage注：圖中標注的不同字母表示在P<0.05的水平上存在顯著性差異。

2.6 血橙貯藏過程中花色苷與可溶性糖、有機酸含量的相關(guān)性分析

由表1可知血橙在貯藏過程中果實中的花色苷、可溶性糖、有機酸的相關(guān)性。花色苷含量與果糖、總糖的正相關(guān)性顯著，相關(guān)系數(shù)分別為0.540和0.463，與葡萄糖、蔗糖的正相關(guān)性不顯著。

表1 皮爾遜相關(guān)系數(shù)Table 1 Pearson correlation

注：**表示在0.01水平(雙側(cè))上顯著相關(guān)；*表示在0.05水平(雙側(cè))上顯著相關(guān)。

糖是合成花色苷的原料，不僅可以通過糖代謝途徑影響花色苷的合成[30]，還作為信號分子，通過特異的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑調(diào)節(jié)花色苷合成相關(guān)酶基因的表達而影響果實著色[31]。實驗證明，蔗糖可通過特異的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑誘導(dǎo)西蘭花芽苗中花色苷合成相關(guān)酶基因上調(diào)表達從而提高其花色苷的含量[32]。NETA-SHARIR等[33]研究發(fā)現(xiàn)糖可通過己糖激酶磷酸化相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑促進矮牽?；ü谥谢ㄉ蘸铣?，上調(diào)花色苷合成相關(guān)酶基因的表達。本研究結(jié)果表明，草酸處理能夠提高血橙在貯藏過程中的花色苷、果糖、葡萄糖、蔗糖含量，草酸可能是通過提高血橙果實中的蔗糖、葡萄糖、果糖含量使總糖含量增大，進而使果實中合成花色苷的原料增多，或是通過提高血橙中可溶性糖的含量刺激了特異的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)Ruby，PAL，C4H和F3′5′H基因的上調(diào)表達從而達到增加血橙中花色苷含量的效果。

由表1可知花色苷含量與抗壞血酸含量呈顯著負相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為-0.529，與蘋果酸含量呈極顯著負相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)為-0.787，與檸檬酸含量和總酸的負相關(guān)性不顯著。目前關(guān)于果實中有機酸與花色苷代謝相關(guān)性的研究較少，很多研究集中在pH值與花色苷提取液穩(wěn)定性之間的關(guān)系方面。酸一方面調(diào)節(jié)液泡的pH，影響花色苷的穩(wěn)定性，另一方面花色苷合成過程中的各種酶需要在1個合適的pH值條件下起催化作用。細胞內(nèi)pH值的改變可以使一些酶激活或增加活性[34]。在本研究中，草酸處理會在一定程度上加快血橙果實蘋果酸的代謝速率，對檸檬酸和抗壞血酸代謝的影響比較復(fù)雜。因為柑橘中主要的酸是檸檬酸，抗壞血酸和蘋果酸都是微量酸，因此草酸是否通過降低果實中的蘋果酸含量促進血橙果實花色苷的積累還有待進一步驗證。

3 結(jié)論

草酸處理能夠顯著促進血橙貯藏過程中花色苷的積累，誘導(dǎo)花色苷合成相關(guān)基因Ruby，PAL，C4H和F3′5′H上調(diào)表達，延緩果實果糖、葡萄糖、蔗糖的代謝速率，增加果實中的總糖含量從而改善果實的品質(zhì)，但是草酸處理會在一定程度上加快血橙果實蘋果酸的代謝速率，對檸檬酸和抗壞血酸代謝的影響比較復(fù)雜，還需要進一步研究。另外，草酸處理會增大果實在貯藏期間的糖酸比，讓果實的口感更佳。草酸處理能夠提高果實中花色苷含量可能是因為草酸處理提高了果實中花色苷合成相關(guān)基因的表達量，或是因為草酸處理提高了果實中可溶性糖(果糖、葡萄糖、蔗糖)的含量從而間接促進了果實中花色苷的積累。本研究結(jié)果對于指導(dǎo)塔羅科血橙貯藏保鮮具有一定的實際意義，同時也為草酸的進一步應(yīng)用提供了理論支撐。