醬油中防腐劑的液相色譜法檢測(cè)結(jié)果研究

蘇記紅 劉強(qiáng) 焦志培 馮園園 劉琦

醬油是日常生活中常見的調(diào)味料，由于其中帶有大量的蛋白類物質(zhì)，容易滋生細(xì)菌，所以對(duì)保質(zhì)期進(jìn)行管理成為了醬油生產(chǎn)中的重要環(huán)節(jié)。在當(dāng)前的市場(chǎng)環(huán)境中，為了不影響醬油的鮮美口感，又為了能保存一定的時(shí)間，醬油生產(chǎn)環(huán)節(jié)中添加防腐劑，是較為普遍的方法。但是，在防腐劑的影響下，又會(huì)對(duì)食品安全產(chǎn)生影響。因此，必須采用科學(xué)的檢測(cè)方法，分析并確定醬油中的防腐劑含量，以此平衡食品安全與醬油口感。本文以液相色譜為實(shí)踐檢測(cè)方法，對(duì)醬油中的防腐劑材料進(jìn)行提取分析。在介紹液相色譜法基本技術(shù)原理的前提下，闡述研究實(shí)踐的具體內(nèi)容與方法，并根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析研究，說(shuō)明醬油中防腐劑的檢測(cè)方法，為相關(guān)研究實(shí)驗(yàn)活動(dòng)提供參考材料。

液相色譜法原理

液相色譜法是由俄國(guó)植物學(xué)家M·S·Tswett于1906年意外發(fā)現(xiàn)的研究方法。在該方法中，可以通過(guò)不同色帶的色素差異，標(biāo)記并分離有色物質(zhì)，完成有機(jī)化合物的分離。色譜法的操作方法中，不能直接對(duì)未知物質(zhì)進(jìn)行鑒定，必須通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照物的比對(duì)展開分析。需要通過(guò)質(zhì)譜、紅外光譜以及其他化學(xué)方法的配合，完成物質(zhì)的定性鑒定工作，這里不做過(guò)多介紹。

技術(shù)原理上，液相色譜法通過(guò)不同化合物在兩相之間親和力的差異進(jìn)行化合物分離。在固定相的基本差異條件下，使用液固色譜、液液色譜、鍵合色譜的方法完成分類工作。其中以液固色譜與鍵合色譜的應(yīng)用最為常見。同時(shí)，液相色譜法還可以根據(jù)固定相形式、吸附力水平等條件進(jìn)行分類。

研究?jī)?nèi)容與方法

實(shí)驗(yàn)材料與器材。實(shí)驗(yàn)材料的備制中，需準(zhǔn)備液相色譜儀、超聲波水浴器、醬油樣品材料、甲醇、0.02moL/L乙酸銨溶液、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、羥基苯甲酸脂（甲、乙、丙三種類型）、濾膜（有機(jī)、無(wú)機(jī)兩種類型）。在確定設(shè)備儀器與材料類型之后，需對(duì)部分的材料配置方法進(jìn)行說(shuō)明：1.準(zhǔn)確稱取羥基苯甲酸脂（甲、乙、丙三種類型）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用甲醇配成1mg/ L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。2.這里提到的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液均為液標(biāo)，可以根據(jù)需要直接稀釋使用。

樣品檢測(cè)前處理。在樣品進(jìn)液相色譜儀檢測(cè)前，需要對(duì)樣品進(jìn)行相應(yīng)的前處理。因?yàn)椴淮_定防腐劑含量，我們按照2g、3g、4g、5g的標(biāo)準(zhǔn)分別放置在量度為50ml的比色管中，用塞具進(jìn)行封口處理。然后，分別向這四個(gè)比色管中，加入純度為80%的甲醇溶液，將經(jīng)過(guò)混合的二次溶液，定容至50mL，做好管口封閉處理。待其均勻混合后，將完成混合的比色管放置在超聲波水浴器設(shè)備中，在經(jīng)過(guò)15min的處理后，再次混勻，再使用參數(shù)為0.45μm的濾膜進(jìn)行過(guò)濾處理，當(dāng)過(guò)濾完成后，可以進(jìn)液相色譜儀執(zhí)行具體的檢測(cè)工作。

回收率實(shí)驗(yàn)。初步檢測(cè)完成后，需對(duì)相應(yīng)的信息做好記錄，然后執(zhí)行回收實(shí)驗(yàn)。在回收實(shí)驗(yàn)中，要對(duì)選用的醬油樣品進(jìn)行回收處理，并按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的水平標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。通常情況下，回收實(shí)驗(yàn)的添加水平為3，且在每個(gè)獨(dú)立的添加水平中，設(shè)置6個(gè)平行樣本，以此保證實(shí)驗(yàn)效果。在選取空白樣品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備之前，應(yīng)準(zhǔn)備好苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液羥基苯甲酸脂（甲、乙、丙三種類型）標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。然后，在接下來(lái)的三次回收測(cè)定分析中，對(duì)加標(biāo)量進(jìn)行調(diào)整，加標(biāo)量應(yīng)在接近儀器信噪比3- 10倍范圍內(nèi)選取。在經(jīng)過(guò)這三次的測(cè)定處理后，需統(tǒng)計(jì)出單獨(dú)樣品的最低檢出限值。在完成一個(gè)醬油樣品的處理后，分別對(duì)其它醬油樣品執(zhí)行此工序處理，并得到所有的最低檢出限參數(shù)。

吸收波長(zhǎng)。在對(duì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的最大吸收波長(zhǎng)進(jìn)行確定的過(guò)程中，必須利用被測(cè)組分的光譜掃描圖在二極管中最為明顯的特征進(jìn)行確認(rèn)。技術(shù)原理上，二極管陣列的檢測(cè)中，二極管陣列檢測(cè)器可以先進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，然后選取單個(gè)的波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。使用檢測(cè)器完成全波長(zhǎng)掃描后，觀察光譜圖，選擇各個(gè)物質(zhì)的特征吸收峰來(lái)確定該物質(zhì)的檢測(cè)波長(zhǎng)。二極管陣列檢測(cè)器可以選擇多個(gè)通道，根據(jù)物質(zhì)特定吸收的不同，可以選擇不同的通道進(jìn)行分析。

流動(dòng)相及色譜柱的選擇。液相色譜儀的核心是色譜柱。另外，流動(dòng)相對(duì)改善分離效果也有重要的輔助效應(yīng)。色譜柱的關(guān)鍵內(nèi)容是制備出高效的填料?，F(xiàn)代液相色譜填料多使用鍵合固定相。在醬油中防腐劑的測(cè)定中我們選擇的是C18液相色譜柱，粒徑為5μm，比較常見。流動(dòng)相的選擇上，我們知道，理想的液相色譜流動(dòng)相應(yīng)具有低粘度、與檢測(cè)器兼容性好、易于得到純品、毒性低等特征。根據(jù)這些特點(diǎn)及所測(cè)化合物的性質(zhì)，我們選擇的流動(dòng)相為甲醇和乙酸銨溶液。

樣品凈化。經(jīng)過(guò)前面的實(shí)驗(yàn)過(guò)程，我們發(fā)現(xiàn)，由于醬油樣品中，帶有較為濃稠的顏色，并帶有極多的蛋白質(zhì)物質(zhì)，如果直接進(jìn)入液相色譜儀，會(huì)對(duì)色譜柱產(chǎn)生誤導(dǎo)，影響觀測(cè)參數(shù)的采集，使其準(zhǔn)確率水平大大降低，并最終造成試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)誤差或是錯(cuò)誤的問(wèn)題。嚴(yán)重時(shí)，沒(méi)有經(jīng)過(guò)凈化的醬油溶液，甚至?xí)捎谄渲械拇箢w粒物質(zhì)，造成液相色譜儀色譜柱的堵塞，影響儀器設(shè)備的正常使用。因此，在醬油溶液進(jìn)入液相色譜儀進(jìn)行數(shù)據(jù)分析之前，必須對(duì)被試驗(yàn)的樣品進(jìn)行凈化，并重點(diǎn)對(duì)其中的色譜柱物質(zhì)進(jìn)行處理，防止其對(duì)觀測(cè)過(guò)程產(chǎn)生影響。技術(shù)原理上，應(yīng)當(dāng)使用固相萃取柱進(jìn)行凈化處理。用C18固相萃取柱對(duì)提取后的樣品進(jìn)行凈化處理后，醬油溶液在顏色上較淡，但是經(jīng)過(guò)直接提取的醬油溶液顏色較深，仍然保留著較多體積較大的雜質(zhì)物質(zhì)與蛋白質(zhì)。所以，為了進(jìn)一步的對(duì)醬油樣品進(jìn)行分析，必須對(duì)其溶液進(jìn)行凈化，以達(dá)到觀測(cè)的客觀需求指標(biāo)。確定好凈化方案后，我們?cè)俅胃鶕?jù)前面提到的回收率實(shí)驗(yàn)過(guò)程的加標(biāo)水平進(jìn)行再次加標(biāo)，對(duì)提取液進(jìn)行凈化處理，我們會(huì)發(fā)現(xiàn)凈化后，回收率效果得到提升，并使醬油樣品溶液中的水油度達(dá)到最佳狀態(tài)，經(jīng)過(guò)凈化處理，樣品雜質(zhì)減少，對(duì)色譜柱和儀器傷害較小，在一定程度上提高了色譜柱和儀器的使用壽命。

結(jié)果計(jì)算。使用無(wú)菌水把6種標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液配成混標(biāo)濃度分別為2μg/mL、4μg/mL、8μg/mL、16μg/mL、32μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)混合工作液，然后再使用液相色譜儀進(jìn)行分析，并將完成測(cè)量的實(shí)驗(yàn)對(duì)象數(shù)據(jù)整理出來(lái)，繪制成完整的曲線參數(shù)，就可最終確定樣品中每種防腐劑的含量。

綜上，醬油防腐劑是生產(chǎn)廠家為了延長(zhǎng)其保質(zhì)周期而使用的食品添加劑材料。在對(duì)多種防腐劑進(jìn)行分析的過(guò)程中，可以使用液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，在核對(duì)防腐劑成分的同時(shí)，分析其使用的具體劑量，為食品安全問(wèn)題提供保障。從技術(shù)角度出發(fā)，液相色譜法有著較高的精確度，可以便捷的完成多種成分的檢定。對(duì)于此項(xiàng)內(nèi)容的研究探討，可提升醬油防腐劑的檢測(cè)技術(shù)，并滿足應(yīng)用需要。