女貞子總黃酮超聲輔助提取工藝及體外抗氧化活性研究

周 旋 許明祥 蔡文卓 翟曉瑞 霍明洋 高 銳 郗艷麗

(吉林醫(yī)藥學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，吉林 吉林 132013)

女貞子(FructusLigustriLucidi)為木犀科植物女貞的干燥成熟果實(shí)，又名冬青子、女貞實(shí)等[1]。女貞子是中國(guó)傳統(tǒng)中藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷代本草及《中國(guó)藥典》(1963～2015版)均有記載[2]?，F(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，女貞子中主要含有黃酮類(lèi)、萜類(lèi)、多糖類(lèi)及揮發(fā)油等化學(xué)成分[3]，女貞子黃酮是女貞屬植物中常見(jiàn)的化學(xué)成分，具有降血脂[4]、抗菌[5]、抗氧化[6]等功效。

目前、植物黃酮的主要提取方法有直接浸提法、超聲輔助提取法、微波輔助提取法、酶輔助提取法等[7]，超聲輔助提取法作為植物活性物質(zhì)提取的新技術(shù)，具有節(jié)能、安全、高效等優(yōu)點(diǎn)[8]。在女貞子黃酮提取物活性方面，研究降血脂功效較多[9-10]，在體外抗氧化方面鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，本研究以女貞子總黃酮含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，利用響應(yīng)曲面法進(jìn)行優(yōu)化，并分析提取物對(duì)小鼠紅細(xì)胞、肝組織勻漿和肝線粒體丙二醛(malondialdehyde，MDA)生成量的影響，觀察其生物活性，以期為女貞子總黃酮的深度開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

ICR雄性清潔級(jí)小鼠：體重(20±2) g，長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK(吉)-2016-0003；

顆粒飼料：長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司，許可證號(hào)：SCXK(吉)2015-0005；

女貞子：產(chǎn)地河北，吉林市售；

無(wú)水乙醇：分析純，天津市永大化學(xué)試劑有限公司；

蘆丁、硫酸亞鐵：分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；

亞硝酸鈉：分析純，天津市福晨化學(xué)試劑廠；

硝酸鋁：分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠；

氫氧化鈉：分析純，西隴化工股份有限公司；

過(guò)氧化氫(hydrogen peroxide，H2O2)：分析純，北京遼寧泉瑞試劑有限公司；

VC：生工生物工程上海股份有限公司；

PBS固體粉末：北京索萊寶公司；

BCA檢測(cè)試劑盒、丙二醛(malondialdehyde，MDA)檢測(cè)試劑盒：南京建成生物科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

可見(jiàn)光分光光度計(jì)：722型，上海菁華科技有限公司；

電子天平：BS224S型，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；

高功率超聲波清洗器：KQ-800KDE型，昆山舒美超聲儀器有限公司；

中藥粉碎機(jī)：ZN-200型，中南制藥機(jī)械廠；

組織分散機(jī)：T10型，德國(guó)IKA公司；

離心機(jī)：5810R型，德國(guó)艾本德有限公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：EV311型，北京萊伯泰科公司；

鼓風(fēng)干燥箱：202-1型，天津泰森儀器股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 女貞子總黃酮的提取工藝流程 將女貞子粉碎后過(guò)60目篩，60 ℃干燥至恒重備用。稱(chēng)取1.25 g女貞子粉末，加入一定量乙醇溶液，充分混勻后按一定的提取條件(提取時(shí)間、提取功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比)提取，3 000 r/min 離心10 min，取上清液過(guò)濾，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中進(jìn)行濃縮，將濃縮液定容至100 mL，即為女貞子總黃酮粗提液。

1.3.2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精確稱(chēng)取50.00 mg蘆丁溶于體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液中，充分溶解后轉(zhuǎn)移至25 mL 容量瓶中定容，制成蘆丁儲(chǔ)備溶液，精密吸取0.00，0.25，0.50，0.75，1.00，1.25 mL儲(chǔ)備溶液，分別置于10 mL具塞試管中，加蒸餾水補(bǔ)至1.25 mL，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)5%的亞硝酸鈉水溶液0.25 mL，混勻后室溫放置6 min，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的硝酸鋁水溶液0.25 mL，混勻后放置6 min，加1 mol/L 氫氧化鈉水溶液2.5 mL，加體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液定容至10 mL，混勻后放置反應(yīng)15 min，于波長(zhǎng)510 nm 處測(cè)定吸光度，以體積分?jǐn)?shù)為40%乙醇溶液作為空白調(diào)零，以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性回歸方程為A=2.625 4x+0.067 8(R2=0.999 4)，蘆丁在50～250 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

1.3.3 女貞子提取液中總黃酮含量的計(jì)算 精確稱(chēng)取1.25 g 女貞子粉末，按“1.3.1”方法進(jìn)行提取，精確吸取1 mL 粗提液采用“1.3.2”方法顯色測(cè)定溶液吸光度，根據(jù)式(1)計(jì)算總黃酮含量。

(1)

式中：

c——總黃酮含量，mg/g；

m1——粗提液樣品中黃酮的質(zhì)量濃度，mg/L；

m2——粗提液定容后的體積，L；

m3——稀釋倍數(shù)；

m4——女貞子的質(zhì)量，g。

1.3.4 單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)

(1) 提取時(shí)間：精確稱(chēng)取1.25 g女貞子樣品放入三角瓶中按液料比50∶1 (mL/g)與體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇混合，在提取功率560 W下分別超聲提取20，40，60，80，100，120 min，分析提取時(shí)間對(duì)女貞子總黃酮提取效果的影響。

(2) 提取功率：精確稱(chēng)取1.25 g女貞子樣品放入三角瓶中按液料比50∶1 (mL/g)與體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇混合，分別在提取功率400，480，560，640，720，800 W下超聲提取60 min，分析提取功率對(duì)女貞子總黃酮提取效果的影響。

(3) 乙醇體積分?jǐn)?shù)：精確稱(chēng)取1.25 g女貞子樣品放入三角瓶中按液料比50∶1 (mL/g)與體積分?jǐn)?shù)分別為30%，40%，50%，60%，70%，80%，90%的乙醇混合，在提取功率560 W下超聲提取60 min，分析乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)女貞子總黃酮提取效果的影響。

(4) 液料比：精確稱(chēng)取1.25 g女貞子樣品放入三角瓶中分別按液料比20∶1，30∶1，40∶1，50∶1，60∶1，70∶1，80∶1 (mL/g)與體積分?jǐn)?shù)為60%的乙醇混合，在提取功率560 W下超聲提取60 min，分析液料比對(duì)女貞子總黃酮提取效果的影響。

1.3.5 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，依據(jù)Design-Expert 8.0.6軟件的Box-Behenken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，以女貞子提取液中總黃酮含量為響應(yīng)值，以提取時(shí)間、提取功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)和液料比為因變量進(jìn)行四因素三水平的響應(yīng)面分析試驗(yàn)，優(yōu)化超聲波輔助提取女貞子總黃酮工藝參數(shù)。

1.3.6 女貞子總黃酮的體外抗氧化試驗(yàn)

(1) 女貞子總黃酮對(duì)小鼠紅細(xì)胞氧化溶血的影響：試驗(yàn)小鼠飼養(yǎng)于溫度20～24 ℃，濕度50%～70%，12 h 明暗交替的環(huán)境。將小鼠摘除眼球取血，加入抗凝劑肝素鈉后5 000 r/min離心10 min，分離得到紅細(xì)胞，以冷生理鹽水洗滌3次，以生理鹽水配置成0.5%的小鼠紅細(xì)胞懸浮液備用。根據(jù)參照文獻(xiàn)[11]，修改如下：樣品組取試管分別加入0.3 mL不同質(zhì)量濃度的總黃酮提取液，然后再加入1.0 mL 的小鼠紅細(xì)胞懸浮液，混勻后加入0.1 mL 100 mmol/L 的H2O2啟動(dòng)反應(yīng)，37 ℃溫育1 h后加入5.2 mL 生理鹽水，4 000 r/min離心10 min，取上清，415 nm 處測(cè)定吸光度(m1)。正常對(duì)照組以等體積的生理鹽水代替樣品和H2O2溶液，誘導(dǎo)對(duì)照組以等體積的生理鹽水代替樣品(m2)。溶血率和抑制率按式(2)和(3)進(jìn)行計(jì)算。

(2)

(3)

式中：

c1——溶血率，%；

c2——抑制率，%；

m1——正常對(duì)照組吸光度，A；

m2——誘導(dǎo)對(duì)照組吸光度，A。

(2) 女貞子總黃酮對(duì)小鼠肝線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化的影響：根據(jù)參照文獻(xiàn)[12]，修改如下：取新鮮的小鼠肝組織，冷生理鹽水清洗血漬，濾紙吸干水分后，在組織勻漿機(jī)中用5 mmol/L 的PBS緩沖液制成10%的組織勻漿液，4 ℃、3 000 r/min 離心15 min，取上清，4 ℃、10 000 r/min離心10 min，沉淀用PBS洗滌2次，加入PBS溶解沉淀，配置成肝線粒體懸浮液，以BCA試劑盒測(cè)定懸浮液蛋白質(zhì)含量，配置成蛋白質(zhì)濃度為10 mg/mL的肝線粒體懸浮液。樣品組取0.25 mL肝線粒體懸浮液于各試管中，加入0.1 mL不同質(zhì)量濃度的總黃酮提取液，混勻后加入0.5 mmol/L FeSO4和0.5 mmol/L的VC溶液各0.1 mL；正常對(duì)照組以等體積的PBS代替FeSO4和維VC溶液，誘導(dǎo)對(duì)照組以等體積PBS代替樣品溶液，混勻后37 ℃溫育1 h，以MDA試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法測(cè)定532 nm處的吸光度并計(jì)算MDA含量。

(3) 女貞子總黃酮對(duì)小鼠肝組織勻漿體外生成MDA的影響：參照文獻(xiàn)[13]，修改如下：取10%肝組織勻漿液，5 000 r/min 離心15 min，取上清備用。用BCA蛋白試劑盒測(cè)定上清液中蛋白質(zhì)的濃度。樣品組取1.0 mL 10%肝組織勻漿液與0.1 mL不同質(zhì)量濃度的總黃酮提取液混合，加10 mmol/L的 FeSO430 μL、60 mmol/L的H2O220 μL，37 ℃溫育1 h后，冰育10 min終止反應(yīng)。以MDA試劑盒說(shuō)明書(shū)的方法測(cè)定532 nm處的吸光度并計(jì)算MDA含量。以等體積的生理鹽水代替樣品溶液作為對(duì)照組。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果取平均值。數(shù)據(jù)用SPSS 16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用方差分析中的LSD法進(jìn)行樣本均數(shù)的兩兩比較，P<0.05時(shí)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素試驗(yàn)

2.1.1 提取時(shí)間對(duì)女貞子總黃酮含量的影響 由圖1可知，當(dāng)超聲時(shí)間從20 min增加到100 min時(shí)，總黃酮的含量隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸增加，當(dāng)提取時(shí)間達(dá)到100 min 時(shí)，總黃酮的含量達(dá)到最大值；隨著提取時(shí)間的繼續(xù)延長(zhǎng)，總黃酮的含量反而呈下降趨勢(shì)，可能與提取時(shí)間太長(zhǎng)，黃酮結(jié)構(gòu)發(fā)生破壞或者發(fā)生降解有關(guān)[14]。因此選擇最佳提取時(shí)間為80 min。

圖1 提取時(shí)間對(duì)女貞子總黃酮含量的影響

Figure 1 Effect of the extraction time on total flavonoids yield fromLigustrumlucidumAit

2.1.2 提取功率對(duì)女貞子總黃酮含量的影響 由圖2可知，隨著提取功率的增大，女貞子中總黃酮的含量呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)，在640 W時(shí)總黃酮的含量達(dá)到最大?？赡苁屈S酮作為次生代謝產(chǎn)物，大部分存在于細(xì)胞膜中，樣品超聲后可使媒介粒子的速度和加速度增大，導(dǎo)致界面擴(kuò)散層上的分子擴(kuò)散速度加快，使黃酮加速溶出，當(dāng)超聲波功率>640 W時(shí)，超聲波產(chǎn)生的空化效應(yīng)會(huì)使黃酮分子與其他成分反應(yīng)使黃酮的結(jié)構(gòu)遭到破壞，導(dǎo)致提取量下降[15]。因此，選擇最佳提取功率為640 W。

2.1.3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)女貞子總黃酮含量的影響 由圖3 可知，當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)從30%增加到50%時(shí)，總黃酮含量呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，材料細(xì)胞溶脹增強(qiáng)，提取劑能有效地向材料細(xì)胞內(nèi)部滲透，從而使提取的總黃酮含量增加[16]。當(dāng)乙醇體積分?jǐn)?shù)超過(guò)60%后，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增加，提取物中黃酮含量有所下降，可能是溶劑極性下降，水溶性黃酮溶出減少，同時(shí)雜質(zhì)溶出增多，使黃酮溶解度下降[17]。因此選擇最佳乙醇體積分?jǐn)?shù)為60%。

圖2 提取功率對(duì)女貞子總黃酮含量的影響

Figure 2 Effect of the extraction poweron total flavonoids yield fromLigustrumlucidumAit

圖3 乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)女貞子總黃酮含量的影響

Figure 3 Effect of the ethanol concentration on total flavonoids yield fromLigustrumlucidumAit

2.1.4 液料比對(duì)女貞子總黃酮含量的影響 由圖4可知，當(dāng)液料比從20∶1 (mL/g)增加到60∶1 (mL/g)時(shí)，黃酮含量逐漸升高，這可能是液料比越大，溶劑中的黃酮質(zhì)量越低，傳質(zhì)推動(dòng)力越大，提取速率增加，使提取率增大，在液料比為60∶1 (mL/g)時(shí)提取溶液中總黃酮含量最高。當(dāng)液料比繼續(xù)增大時(shí)，黃酮的含量反而呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，可能是女貞子中雜質(zhì)的溶出，影響了黃酮的溶出率[18]；也可能是進(jìn)入溶劑的黃酮對(duì)未溶出黃酮有協(xié)同浸提作用[19]，造成提取溶液中總黃酮含量的減少。此外，過(guò)度增加溶劑使用量，會(huì)造成浪費(fèi)，也會(huì)增加成本，造成后續(xù)蒸發(fā)濃縮的負(fù)擔(dān)，增加工作量，因此選擇最佳液料比為60∶1 (mL/g)。

圖4 液料比對(duì)女貞子總黃酮含量的影響

Figure 4 Effect of the ratio of solution and solid on total flavonoids yield fromLigustrumlucidumAit

2.2 女貞子總黃酮提取工藝優(yōu)化

2.2.1 模型方程建立與顯著性檢驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，選用響應(yīng)面法對(duì)女貞子總黃酮的提取工藝條件進(jìn)行優(yōu)化。利用Design-Expert 8.0.6軟件的Box-Behnken設(shè)計(jì)，以提取時(shí)間、提取功率、乙醇體積分?jǐn)?shù)、液料比為響應(yīng)變量(見(jiàn)表1)，以黃酮含量為響應(yīng)值進(jìn)行數(shù)據(jù)擬合，結(jié)果如表2所示。

表1 響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平表

表2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果

對(duì)表2數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合，得到多元回歸方程：

Y=46.69-0.23A-2.35B+0.047C+2.07D-2.13AB-1.90AC+3.81AD+1.30BC+2.25BD+3.36CD-2.53A2-2.59B2-5.00C2-3.01D2

(4)

表3 回歸方程方差分析?

? *. P<0.05，差異顯著；**. P<0.01，差異極顯著。

2.2.2 響應(yīng)面分析 響應(yīng)面圖能夠直接反映各因素與響應(yīng)值之間的關(guān)系以及兩因素間交互作用類(lèi)型，并能形象描述回歸方程。由圖5(a)、(c)可知，當(dāng)提取功率的水平為0時(shí)，女貞子總黃酮的含量隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)呈先上升后下降的趨勢(shì)，當(dāng)提取功率的水平變化到1時(shí)，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，女貞子總黃酮的含量先趨于平穩(wěn)后不斷下降，這與提取功率單因素試驗(yàn)結(jié)果一致，即在較高提取功率的條件下，女貞子總黃酮的含量呈現(xiàn)下滑的趨勢(shì)；由圖5(b)、(d)可知，當(dāng)一個(gè)因素一定時(shí)，女貞子總黃酮的含量隨另一個(gè)因素增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。

圖5 各因素交互作用對(duì)女貞子總黃酮含量影響

由Design-Expert 8.0.6軟件得出女貞子總黃酮的最佳提取條件為：提取時(shí)間110.49 min、提取功率605.52 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)60.27%、液料比65.30∶1 (mL/g)?？紤]到實(shí)際操作的可行性，將最佳提取工藝調(diào)整為：提取時(shí)間110 min、提取功率640 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、液料比65∶1 (mL/g)。在此條件下進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，所得女貞子提取液中總黃酮含量平均值為47.40 mg/g與預(yù)測(cè)值47.68 mg/g接近，說(shuō)明該模型對(duì)女貞子總黃酮提取工藝條件參數(shù)優(yōu)化可靠，具有較好的應(yīng)用價(jià)值。

2.3 女貞子總黃酮的體外抗氧化研究

2.3.1 女貞子總黃酮對(duì)小鼠紅細(xì)胞氧化溶血的影響 由表4可知，H2O2可誘導(dǎo)細(xì)胞氧化損傷，加速細(xì)胞溶血，一定質(zhì)量濃度范圍的總黃酮能抑制H2O2誘導(dǎo)的紅細(xì)胞出現(xiàn)自氧化溶血現(xiàn)象。隨著總黃酮質(zhì)量濃度升高，紅細(xì)胞溶血率逐漸下降，總黃酮抑制紅細(xì)胞溶血的抑制率反而逐漸升高，提取物中總黃酮濃度與抑制率之間呈劑量依賴關(guān)系。當(dāng)女貞子總黃酮濃度達(dá)到1 000 mg/L時(shí)，紅細(xì)胞溶血的抑制率可高達(dá)到39.05%，顯著高于其他各劑量組。

表4女貞子總黃酮對(duì)H2O2誘導(dǎo)小鼠紅細(xì)胞自氧化溶血的影響?

Table4EffectoftotalflavonoidextractsfromLigustrumlucidumAitonthehemolysisofmouseRBCs

總黃酮濃度/(mg·L-1)A415溶血率/%抑制率/%對(duì)照組0.16±0.02bcdef--誘導(dǎo)組1.94±0.04a100-2001.78±0.01b85.40±0.57a13.28±3.58abcd4001.77±0.13bc82.25±6.39ab16.48±6.49abcd6001.67±0.07bcd74.37±3.66bc24.48±3.72abc8001.53±0.07bcde66.37±3.56bc32.60±3.61ab1 0001.49±0.03bcde60.02±1.40bcd39.05±1.42a

? 同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.3.2 女貞子總黃酮對(duì)小鼠肝線粒體脂質(zhì)過(guò)氧化的影響

由表5可知，總黃酮處理組小鼠肝線粒體MDA水平均低于正常誘導(dǎo)組，且隨著總黃酮濃度的增加，小鼠肝線粒體MDA水平逐漸降低，有效地抑制了脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA的生成，總黃酮濃度與MDA水平呈劑量—效應(yīng)關(guān)系。隨著總黃酮濃度的增加，MDA的抑制率逐漸增加，當(dāng)總黃酮濃度達(dá)到1 000 mg/L時(shí)，抑制率可達(dá)到53.24%，明顯高于200 mg/L劑量組。

表5女貞子總黃酮對(duì)小鼠肝線粒體MDA生成的影響?

Table5EffectoftotalflavonoidextractsfromLigustrumlucidumAitonMDAgenerationinmouselivermitochondria

總黃酮濃度/(mg·L-1)MDA含量/(nmol·mg-1)抑制率/%對(duì)照組1.48±0.05bcd-誘導(dǎo)組2.17±0.01a-2002.11±0.07ab22.20±2.56bcde4001.76±0.14bcd34.86±5.12bcd6001.47±0.14bcd45.72±5.12abc8001.36±0.03bcd49.82±1.00ab1 0001.27±0.15bc53.24±5.41a

? 同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.3.3 女貞子總黃酮對(duì)小鼠肝組織勻漿MDA生成的影響 如表6所示，在這2種體系中，女貞子總黃酮濃度在200～1 000 mg/L時(shí)，對(duì)小鼠肝組織勻漿MDA的生成具有抑制作用，且呈劑量—效應(yīng)關(guān)系。當(dāng)女貞子總黃酮濃度達(dá)到1 000 mg/L時(shí)，無(wú)誘導(dǎo)體系中MDA抑制率達(dá)到了25.56%，F(xiàn)e2++H2O2誘導(dǎo)體系中MDA抑制率達(dá)到了36.10%?？傮w比較，女貞子總黃酮對(duì)誘導(dǎo)體系的小鼠肝組織勻漿MDA生成的抑制作用強(qiáng)于無(wú)誘導(dǎo)體系。

表6 女貞子總黃酮對(duì)大鼠肝組織勻漿MDA生成的影響?

? 同列不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

3 結(jié)論

本研究以女貞子總黃酮含量為指標(biāo)，在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上運(yùn)用Box-Behenken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理，進(jìn)行響應(yīng)面分析，得到超聲輔助提取總黃酮的最佳方案為：提取時(shí)間110 min、提取功率640 W、乙醇體積分?jǐn)?shù)60%、液料比65∶1 (mL/g)，經(jīng)試驗(yàn)驗(yàn)證提取的女貞子總黃酮含量平均值為47.40 mg/g，與理論值基本一致。大量研究[20]證實(shí)，植物黃酮有較好的抗氧化作用。因此通過(guò)體外抗氧化活性氧研究，適當(dāng)劑量的女貞子黃酮能夠顯著抑制小鼠紅細(xì)胞溶血(P<0.05)，抑制率最高為39.05%；能夠顯著抑制小鼠肝線粒體MDA生成(P<0.05)，抑制率最高為53.24%；能夠顯著抑制肝組織勻漿中MDA生成(P<0.05)。上述表明，本研究?jī)?yōu)化的女貞子黃酮提取工藝，可獲得抗氧化能力較高的黃酮類(lèi)物質(zhì)，具有較好的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值。